Sunteți pe pagina 1din 59

Spectrometria de absorbtie UV-

VIS in analiza si controlul


medicamentelor
SPECTROFOTOMETRIA DE ABSORBIE
MOLECULAR N UV - VIS
PRINCIPIUL METODEI
Spectrofotometria de absorie molecular n UV VIs se bazeaz pe
absorbia radiaiilor de regul ntre 180 800 nm de ctre speciile
moleculare din probe lichide, solide sau gazoase.
Proba lichid se pune ntr-o cuv i asupra ei se trimite un fascicul primar
emis de o surs extern de spectru continuu. Fotonii ntlnesc n calea lor
speciile absorbante moleculare, care absorb o parte din radiaia incident.
Puterea radiant transmis prin cuv este msurat cu ajutorul unui
detector optic sensibil n domeniul UV Vis.

Cuv cu soluie (prob)

P0() Pt() P0() Puterea radiant incident


Pt () Puterea radiant transmis

Sursa Detector
Bilanul puterii radiante, dac se neglijeaz puterea
radiant reflectat de pereii cuvei, cea absorbit de
pereii cuvei i cea dispersat prin soluie este

P0 Pa Pt
Puterea radiant absorbit (Pa)
i cea transmis (Pt) depind de

Lungimea de Concentraia speciilor


und () absorbante

CONCLUZIE. Deoarece Pa i Pt depind de lungimea de


und i concentraie, prin spectrometria de absorbie
molecular se pot face analize calitative i cantitative
MRIMILE OPTICE. TRANSMITANA
I ABSORBANA
Interaciunea radiaiei n absorbia molecular se
caracterizeaz prin dou mrimi optice: Transmitana
(T) sau transmitana procentual (T%) i Absorbana (A)

Gradul de transmisie a radiaiei prin


MRIMI OPTICE prob la o anumit lungime de und

TRANSMITANA (T) Pt Pt
T T% 100
P0 P0
Gradul de absorbie a radiaie prin
ABSORBANA (A) prob la o anumit lungime de und

A log T A 2 log T%
DOMENIILE DE VARIAIE ALE
TRANSMITANEI I ABSORBANEI
Pt = 0 P t = P0
T 0 1
T% 0 100
A 0

Scala de transmitan este liniar iar cea de absorban este


logaritmic. Pe scala unui spectrofotometru pot fi citite absorbane
ntre 0 2. Absorbanele mai mari dect 2 sunt asimilate cu infinit.
LEGEA LAMBERT-BEER LEGEA
ABSORBIEI MOLECULARE
Legea lui Lambert Beer descrie relaia de legtur dintre
absorban, grasimea stratului absorbant de prob (grosimea
cuvei) i concentraia speciilor absorbante

A bc A abc
A absorbana fr unitate de msur
b grosimea stratului absorbant (grosimea cuvei , n cm)
- absorbtivitatea molar, n l mol-1 cm-1
a absorbtivitatea, n l g-1 cm-1
c concentraia speciilor absorbante n mo l-1 (pentru ) sau

g l-1 (pentru a)
Absorbana crete liniar cu concentraia speciilor absorbante
i grosimea cuvei. Dac grosimea cuvei este constant atunci
absorbana depinde liniar numai de concentraie.
ABSORBTIVITATEA MOLAR ()

A 1
l mol cm
1 1

b c cm mol l 1

Dac b = 1 cm i concentraia speciilor absorbante c = 1 mol l -1,


rezult

A
Absorbtivitatea molar () este absorbana unui strat de soluie cu
grosimea de 1 cm i concentraia speciilor absorbante de 1 mol l -1
Cu ct este mai mare cu att substana absoarbe mai bine radiaia
optic.
CARACTERISTICILE ABSORBTIVITII
MOLARE

CARACTERITICILE
ABSORBTIVITII MOLARE ()

ESTE O MRIME CALITATIV

NU DEPINDE DE CONCENTRAIA
SPECIEI ABSORBANTE

DEPINDE DE NATURA SPECIEI


ABSORBANTE

DEPINDE DE LUNGIMEA DE UND


RELAIILE DE LEGTUR DINTRE
ABSORBAN I TRANSMITAN

A log T Intre absorban i transmitan


exist o relaie logaritmic
A 2 log T% Absorbana crete liniar cu
concentraia
Pt
T 10 10
A bc
Transmitana scade exponenial cu
P0 concentraia
Puterea radiant transmis scade
Pt P0 10 bc exponeneial cu concentraia

In metodele prin absorbie spectrometrul msoar


transmitana, iar absorbana este calculat pe baza
relaiei logaritmice de dependen ntre ele
SPECTRUL DE ABSORBIE I DREAPTA
DE CALIBRARE IN ABSORBIE

Absorbana
Co(H2O)62+
Absorbana

Cr(H2O)63+
Transmitana

Co(H2O)62+

Transmitana
Cr(H2O)63+

Lungimea de und / nm
Concentraie Cr3+ / mg l-1

Spectre de absorbie A = f() Dreapta de calibare in absorbie,


i transmisie T = () A = (c) i T = (c)
CONDIIILE DE VALABILITATE A LEGII
LUI LAMBERT - BEER
Radiaia incident trebuie s fie perfect monocromatic i conine raze
paralele, i s cad perpendicular i uniform distribuite pe suprafaa mediului
absorbant
Reflexia i absorbia radiaiilor de ctre pereii cuvei s fie neglijabile
Puterea radiant incident s nu fie suficient de mare pentru a duce la efecte
de saturaie a absorbiei i astfel la limitarea semnalului detectorului optic
Mediul absorbant s fie suficient de diluat, astfel nct speciile absorbante
(moleculele) s interacioneze independent unele fa de altele cu fotonii.
Prezena moleculelor solventului s nu influeneze interaciunea foton-specie
absorbant i absorbia solventului s fie neglijabil.
Mediul absorbant s fie omogen i s nu aib loc o dispersie a luminii la
trecerea prin acesta
Grosimea mediului absorbant s fie uniform pe toat suprafaa transversal
a cuvei (lungimea drumului optic al radiaiei prin mediul absorbant s fie egal
pe toat suprafaa transversal a mediului absorbant)
ABATERI POZITIVE I NEGATIVE DE LA
LEGEA LUI LAMBERT - BEER
(+) TIPURI DE ABATERI
Abateri ABATERI POZITIVE
(-)
pozitive Absorbana msurat este mai
mare dect cea teoretic n
Absorban Abateri conformitate cu legea lui
negative Lambert- Beer

(+) ABATERI NEGATIVE


(-) Absorbana msurat este mai
mic dect cea teoretic n
Concentraie conformitate cu legea lui
Lambert- Beer

Abaterile pozitive i negative de la legea lui Lambert- Beer apar n


soluii diluate sau concentrate. Exist un domeniu dinamic al curbei
de etalonare, pe care exist o relaie liniar ntre absorban i
concentraie. Abaterile duc la erori sistematice pozitive i negative.
ORIGINEA SPECTRELOR DE
ABSORBIE MOLECULAR IN UV VIS
Moleculele au trei nivele energetice cuantificate

NIVELE ENERGETICE CUANTIFICATE


PENTRU MOLECULE

ELECTRONICE Ee

Crete energia
VIBRAIONALE Ev

ROTAIONALE Er

Pentru fiecare nivel electronic molecula are mai multe nivele


energetice vibraionale i pentru fiecare nivel vibraional mai multe
nivele rotaionale.
MICAREA DE VIBRAIE I ROTAIE A
MOLECULELOR
MICRI DE VIBRAIE MICRI DE ROTAIE

Alungire Forfecare

Prin micarea de rotaie se


+ + + - schimb frecvena de
- - - + rotaie a moleculelor n
Vibraie n plan i n planuri diferite jurul centrelor de greutate
Prin micarea de vibraie se modific
lungimea legturilor i unghiul dintre legturi
ENERGIA MOLECULEI. TRANZIII
ENERGETICE
Energia total a molecule este suma energiei electronice,
vibraionale i rotaionale

Et E e E v E r
Et h e h v (v 1) hcBJ ( J 1)
e frecvena radiaiei optice care provoac tranziia energetic
electronic
v frecvena radiaiei optice care provoac tranziia energetic
vibraional
v numrul cunatic vibraional (v = 0, 1, 2, 3,......n)
J numrul cunatic rotaional (J = 0, 1, 2, 3,.......n)
B constanta
TRANZIII ENERGETICE ALE MOLECULEI LA
ABSORBIA UNEI RADFIAII UV VIS
REGULI DE SELECIE
3
2 La absorbia unei radiaii
1
UV Vis nu exist nici o
v=0 E1
regul de selecie. Astfel
Abs. Emisie sunt posibile orice tranziii
radiaie cldur energetice

3 n = 1
2
1 v = 0, 1, 2, 3, etc
v=0 E0 J = 0, 1, 2, 3, etc
La absorbia unei radiaii UV Vis molecula sufer o tranziie energetic electronic de pe
nivelul fundamental (E0) pe cel excitat (E1). Tranziia electronic a moleculei este nsoit
de mai multe tranziii energetice vibraionale i rotaionale. In spectrul de band a
moleculei sunt grupate mai multe linii spectrale. Banda molecular are un caracter
hiperfin. Conform principiului Frank Condon tranziia de vibraie pentru care este
aceeai distan interatomic pe cele dou nivele are loc cu probabilitate maxim. Astfel
benzile moleculare de absorbie UV Vis sunt asimetrice spre lungimi de und
mari.Spectrele moleculare de absorbie UV Vis sunt spetre electronice vibraionale.
FORMA SPECTRELOR DE ABSORBIE
MOLECULAR UV VIS

Benzen
vapori

Benzen
lichid

Spectrul de absorbie molecular n domeniul UV pentru benzen n


stare de vapori i n stare lichid.
Caracterul hiperfin al benzilor moleculare din UV Vis pot fi observate numai
pentru probele n stare gazoas sau de vapori (exemplu benzen), deoarece
n aceast stare vibraia i rotaia moleculeor absorbante este liber. Pentru
probe n stare lichid (exemplu benzen) caracterul hiperfin nu mai poate fi
observat, deoarec vibraia i rotaia moleculeor de benzen nu este liber.
INSTRUMENTAIA IN SPECTROMETRIA DE
ABSORBIE MOLECULAR UV - VIS

Schema bloc pentru spectrometria de absorbie


molecular

DISPOZITIV IZOLARE
SURS BAND SPECTAL CUVA CU DETECTOR
PRIMAR DE I SELECTARE PROB OPTIC UV
RADIAIE LUNGIME DE UND VIS

PROBA AMPLIFICATOR

MSUR I
AFIAJ

Semnal optic Semnal electric


ELEMENTELE COMPONENTE ALE
SPECTROMETRELOR UTILIZATE N UV VIS

Sursa primar de radiaie


Dispozitivul de monocromare a
radiaiei i selectare lungime de und
(monocromatoare sau policromatoare)
Detectorul optic
Sistemul de condiionare a semnalului
(amplificatorul)
Sistemul de citire i afiare rezultat
SURSELE PRIMARE DE RADIAIE
UTILIZATE N UV VIS
SURSE PRIMARE
DE RADIAIE
Se utilizaez n absorbia
DE SPECTRU molecular, fosforescena
CONTINUU molecular, absorbia
atomic

DE SPECTRU Se utilizeaz n absorbia


atomic i fluorescena
DE LINII
atomic

Aceai surs poate s emit att un spectru continuu ct


i un spectru de linii
APARARENA SPECTRULUI
CONTINUU I DE LINII

SPECTRUL CONTINUU

SPECTRUL DE LINII

SPECTRUL CONTINUU
Este format din linii spectrale foarte apropiate ntre ele nct nu pot
fi separate
SPECTRUL DE LINII
Spectrul de linii conine radiaii discrete cu lungime de und bine
definit care port fi separate ntre ele.
SURSE DE SPECTRU CONTINUU
UTILIZATE N UV VIS
SURSE DE SPECTRU CONTINUU
UTILIZATE N UV VIS
CU CORP
INCANDESCENT

BECUL CU FILAMENT LAMPA CU HALOGEN


DE WOLFRAM

CU DESCRCRI
ELECTRICE N GAZE

LAMPA DE DEUTERIU LAMPA DE XENON


BECUL CU FILAMENT DE
WOLFRAM I LAMPA CU HALOGEN
Se utilizeaz ca surse de spectru continuu n absorbia molecular
n domeniul vizibil.
Au n construcia lor un filament de W adus la incedescen (2000
3500 K) nchis ntr-un corp de sticl sau cuar.
Becul cu filament de W emite un spectru continuu n domeniul
vizizib IR (400 1400 nm)
Lampa cu halogen emite un spectru continuu n domeniul UV
VIS, i are n interiorul o cantitate mic de iod care reduce
sublimarea W de pe filament.

W(s) W(g)
W(g) + I2(g) WI2(g)
WI2(g) W(s) + I2(g)
Forma spectrului continuu emis de
becul cu filament de W

Becul cu filament de W

Intensitatea
spectrului
continuu crete
cu temperatura
filamentului

Lampa cu halogen

LUNGIMEA DE UND / nm
Lampa de deuteriu
Funcionarea se bazeaz pe o descrcare electric ntre doi
electrozi de W imersai ntr-o atmosfer gazoas de deuteriu sau
hidrogen.
Spectrul este:
unul continuu n domeniul UV emis de moleculele de deuteriu
(180 380 nm
Unul de linii n domeniul vizibil emis de atomii excitai de
hidrogen sau deuteriu (liniile hidrogenului din seria Balmer)
Spectrul lmpii de deuteriu este mai intens

UTILIZAREA LMPII DE DEUTERIU


ca surs de spectru continuu n absorbia molecular UV VIS
ca surs de spectru continuu n corecia de fond n absorbia
atomic UV - VIS
SPECTRUL DE EMISIE AL LMPII DE
DEUTERIU

SPECTRU
CONTINUU
180 380 nm

SPECTRU
DE LINII

Lungimea de und / nm
SPECTRUL DE EMISIE A LMPII DE XENON

Lungimea de und / nm

Lampa de Xe emite un spectru continuu foarte intens n domeniul UV


VIS (200 1000 nm), pecte care se suprapune spectrul de linii al Xe.

Lampa de Xe se utilizeaz ca surs primar n spectrometria de absorbie n


cazul spectrometrelor simultane precum i n fluorescen atomic
IMAGINI CU LAMPA DE DEUTERIU I
DE XENON

LAMPA DE DEUTERIU LAMPA DE XENON


DISPOZITIVE DE IZOLARE BAND SPECTRAL DE
TRECERE. MONOCROMATOARE. POLICROMATOARE

ROLUL DISPOZITIVELOR.
Sursele primare de radiaie sau proba emit de regul un spectru
policromatic, format din radiaii cu mai multe lungimi de und.
Determinrile spectrale se efectueaz de regul n radiaie
monocromatic (radiaie cu o singur lungime de und.
Dispozitivele de izolare band spectral de trecere au dou roluri:
De a dispersa radiaia policromatic provenit de la surs n
funcie de lungimea de und
De a izolara benzi spectrale de trecere nguste pe ca se
consider c radiaia este monocromatic. Cu alte cuvinte de a
selecta radiaii cu anumite lungimi de und din spectrul
policromatic.
BENZILE SPECTRALE DE TRECERE IZOLATE.
SELECTARE LUNGIMI DE UND

Benzi spectrale de trecere izolate


Radiaie considerat monocromnatic
Semnal

1 2 3 4
Lungimea de und / nm
i lungimi de und selectate din spectrul sursei de radiaie
Nu se poate izola din spectru o radiaie perfect monocromatic. Pe banda
spectral de trecere se consider ca radiaia este monocromatic.
MONOCROMATOR I POLICROMATOR

DISPOZITIVE
SELECTARE
Selecteaz odat o singur
MONOCROMATOR lungime de und (o singur
band spectral de trecere)
din spectru

Selecteaz simultan mai


POLICROMATOR multe lungimi de und (mai
multe benzi spectrale de
trecere) din spectru
ELEMENTE COMPONENTE I SCHEMA
OPTIC A UNUI DISPOZITIV DE DISPERSIE I
SELECTARE LUNGIME DE UND
Lentil Fant de intrare Colimator Reea Focalizator

SURSA DE
RADIAIE Plan
focal

Fant de
ieire

1 1
2
3
Monocromator Policromator
O singur fant de ieire Mai multe fante de ieire
Reeaua se rotete pt select Reea fix
ELEMENTELE COMPONENTE
MONOCROMATOR / POLICROMATOR

ELEMENTE
COMPONENTE

FANTA DE INTRARE

COLIMATOR

ELEMENT DE DISPERSIE

FOCALIZATOR

FANTA/FANTE DE IEIRE
ROLUL COMPONENTELOR
MONOCROMATORULUI / POLICROMATORULUI

FANTA DE INTRARE. Este o deschidere ngust de 20 50 m prin


care ptreunde radiaia de la surs, sau prin care se vizualizeaz
sursa spectral.
COLIMATORUL. Colecteaz radiaia ptruns n monocromator i o
proiecteaz asupra dispozitivului de dispersie sub forma unui fascicul
de raze paralele. Este o lentil sau oglind.
DISPOZITIVUL DE DISPERSIE. Realizeaz dispersia radiaiei n funcie
de lungimea de undn planul focal n puncte diferite pentru diferite
lungimi de und.
FOCALIZATORUL. Este o lentil sau oglind care focalizeaz radiaia
pentru o anumit lungime de und asupra fantei de ieire.
Focalizatorul realizeaz de fapt refacerea imaginii sursei spectrale
pentru diferite lungimi de und n planul focal al monocromatorului /
policromatorului.
ROLUL COMPONENTELOR
MONOCROMATORULUI / POLICROMATORULUI
FANTA DE IEIRE. Este o deschidere ngust prin care se izoleaz o
bend spectral de trecere care conine lungimea de und a radiaiei
monocromatice pentru analiz. Rezoluia spectral (capacitatea de
separare a liniilor spectrale) depinde de lrgimea fantei de ieire.
Fanta ngust asigur o rezoluia mai bun.

Separarea liniei dublet Interferena liniilor din


cu o fant ngust dublet cu o fant larg
Rezoluie mare Rezoluie mic
TIPURI DE MONOCROMATOARE

MONOCROMATOARE

Utilizeaz ca element dispersiv a


PRISM spectrului o prism din sticl sau
cuar

Utilizeaz o rea ca element


dispersiv. Reeaua este o
REEA suprafa striat cu un numr de
1200 2400 linii / mm.
MONOCROMATORUL CU REEA
Reeua este o suprafa striat (1200 2400 linii/mm). Funcionarea
reelei se bazeaz pe dispersia radiaiei incidente de ctre
suprafaa striat i pefenomenul de interferen constructiv ntre
radiaiile reflectate de ctre suprafaa striaiunilor.

unghiul de inciden
unghiul de reflexie
C D d distnaa dintre striaiuni

Diferena de drum optic ntre


raze se caluleaz cu relaia,
A B unde m este ordinul de
interferen
d d m = 0,1, 2, 3....

AC BD d (sin d sin ) m
CARACTERISTICILE SPECTRALE ALE
MONOCROMATORULUI CU REEA

Monocromatorul cu reea are putere de dispersie mai


mare dect cel cu prism
Scala lungimii de und este liniar
Monocromatorul cu reea acoper domeniul spectral
UV VIS ntre 190 800 nm. Pentru domeniul spectral
120 180 nm, monocromatorul trebuie vidat i umplut
cu argon sau azot. Radiauiile din acest domeniu sunt

absorbite de aer.
MONOCROMATORUL CZERNY TURNER
Axa optic Normala


Colimator Focalizator

Fanta de ieire
Fanta de
intrare Detector
Detector
1 optic

optic
2

3
Sursa de Reea
radiaie
In montajul optic Czerny Turner, reeua este montat simetric fa de
colimator i focalizator. Selectarea lungimii de und se realizeaz prin rotirea
reelei, cd se modific unghiul de inciden i sunt focalizate diferite radiaii
asupra fantei de ieire. Inregistrarea spectrului se realizeaz prin baleiaj.
DETECTOARE OPTICE UTILIZATE
IN UV VIZIBIL
ROLUL DETECTOARELOR
Sunt dispozitive optoelectronice care realizeaz transformarea
semnalului optic nre-un semnal electric. Semnalul electric este
direct proporional cu cel optic.

S S0 k P S S0 daca P0
Unde
S semnalul electric
S0 semnlul curentului de ntuneric (zgomotul detectorului)
generat de detector n absena semnalului optic.
Cu ct semnalul de ntuneric este mai mic cu att detectorul este
mai sensibil.
TIPURI DE DETECTOARE IN UV VIS

DETECTOARE OPTICE IN UV VIS

FOTOELECTRONICE

FOTOCELULA FOTOMULTIPLICATORUL

FOTOCONDUCTIVE

FOTELEMENTUL ARIA DETECTORUL CU


CU DE TRANSFER DE
SELENIU FOTODIODE SARCIN
PRINCIPII DE FUNCIONARE A
DETECTOARELOR OPTICE UV VIS

DETECTOARELE FOTOELECTRONICE
Funcionarea se bazeaz pe efectul
fotoelectric.
Au n construcia lor electrozi pe suprafaa
crora este depus un material care pune uor
n libertate electroni sub aciunea radiaiilor
UV Vizibil, genernd un semnal electric ca
urmare a deplasrii electronilor generai ntre
electrozi sub aciunea unei tensiuni aplicate
ntre electrozi.
FOTOMULTIPLICATORUL

CONSTRUCIE
Anod
Fotomultiplicatorul are trei electrozi
1. Un catod
2. Un anod
3. Mai multe dinode.
ROLUL ELECTROZILOR
1. Catodul pune n libertate electroni
1000
300-
primari sub aciunea fotonilor
V
Radiaie Dinod 2. Dionodele au rol de transportare a
optic lectronilor pn la nod i rol de
amplificare intern a semnalului
Electroni prin generarea a 2 5 electroni
secundari pentru fiecare electron
care atinge suprafaa sa
3. Anodul are rol de colectare a
Catod electronilor
CARACTERISTICILE
FOTOMULTIPLICATORULUI
1. Semnalul fotomultiplicatorului depinde de mrimea
semnalului optic i tensiunea aplicat pe fotomultiplicator.
La semnale optice mici se aplic o tensiune mai mare,
respectiv invers. Dac se menine tensiunea constant
semnalul electric depinde liniar de semnalul optic.
2. Fotmultiplicatirul are cea mai mare sensibilitate dintre
detectoarele optice utilizate n UV - VIS. Aceasta se
datoreaz amplificrii interne mari (numarul electronilor care
ajung la anod este cu 8 9 ordine de mrime mai mare dect
al electronilor primari generai de catod.
3. Fotmultiplicatorul acoper domeniul UV VIS ntre 190 900
nm
4. Se interzice ca fotomultiplicatorul s fie sub tensiune i pe
suprafaa catodului s cad lumina zilei.
APLICAII CANTITATIVE ALE ABSORBIEI
MOLECULARE UV VIS. DETERMINAREA
CONCNTRAIEI.
Spectrofotometria de absorbie molecular UV Vis se aplic att la
analiza substanelor incolore ct i la cele colorate.
Se pot analiza att substnae organice ct i anorganice.
Substanele organice care sunt incolore prezint spectre de absorbie
foarte intense n domeniul UV al spectrului (200 400 nm).
Substanele organice i anorganice colorate absorb n domeniul
Vizibil al spectrului (400 800 nm).
Absorbia molecular Uv - Vis se aplic adesea la determinarea
cationilor metalici n soluii apoase.
In cazul n care cationii nu sunt colorai, se aplic o reacie de
derivatizare prin chelatizare cu un ligand ca reactiv de culoare. In
urma reaciei rezult un complex numit specie absorbant mult mai
intens colorat comparativ cu cationul original, denumit specie de
determinat.
REACII DE DERIVATIZARE

Me mL MeLm
n ( nm )

Specie de Reactiv de Specie absorbant


determinat culoare
Ex: determinarea ionilor Fe3+ cu acid sulfosalicilic n mediu acid sau bazic

3-
HO3S COOH HO3S CO
Fe 3+
+3
Fe
OH O 3

Compexul Fe3+ cu acidul sulfosalicilioc este galben n mediu bazic i


rou n mediu acid. Reaciile de derivatizare sunt totale i astfel n
calcule se utilizeaz concentraia speciei de determinat (Fe3+) i nu
concentraia speciei absorbante. Prin reacia de derivatizare crete
sensibilitatea metodei (crete ).
ABSORBIA RADIAIILOR VIZIBILE DE
CTRE SUBSTANELE COLORATE.
Substanele colorate absorb culoarea lor complementar. Culorile
complementare sunt cele dou culori care prin amestecare dau
culoartea alb.

Domeniul spectral / Culoarea Culoarea


nm complimentar
625 750 Rou Verde-albastru
590 625 Oranj Albastru-violet
575 590 Galben Albastru
560 575 Verde-galben Violet
500 560 Verde Purpuriu
490 500 Albastru Rou
480 490 Verde-albastru Oranj
450 480 Albastru-verde Galben
400 450 Violet Galben-verde
METODE DE DETERMINARE A
CONCENTRAIEI

1.METODA DREPTEI DE ETALONARE


2.METODA STANDARDULUI DE ADIIE
METODA DREPTEI DE ETALONARE
ETAPE
1. Se prepar proba analitic din materialul de analizat care conine
analitul n concentraie necunoscut
2. Se prepar etaloanele care conin enalitul n concentraie
cunoscut. Etaloanele se prepar dintr-o soluie stoc.
3. Se prepar proba martor care nu conine analitul, dar conine
reactivii de derivatizare utilizai la prepararea ealoanelor i probei
necunoscute.
4. Se traseaz spectrul de absorbie A = f() prin msurarea
absorbanei unui etalon fa de martor la diferite lungimi de und.
Se determin lungimea optim de analiz corespunztoare
maximului de absorbie.
5. Se msoar absorbana etaloanelor la lungimea optim de analiz,
fa de martor.
6. Se traseaz dreapta de etalonare A = f(c)
7. Se msoar absorbana probei analitice i se determin
concentraia speciei analitice prin interpolare.
ALEGEREA LUNGIMII OPTIME DE
ANALIZ N ABSORBIA MOLECULAR
Se lucreaz pe maximul de
maxim absorbie din urmtoarele
considerente
Absorban

1. Metoda are sensibilitatea


maxim (panta dreptei de
etalonare este maxium)
2. Dreapta de etalonare are cea
mai bun liniritate (nu
prezint abateri semnificative
optim de la legea lui Lambert Beer.
Lungimea de und / nm 3. Se pot determina precis
concentraii mai mici de
Spectrul de absorbie molecular. analit.
Absorbana n funcie de
DREAPTA DE ETALONARE IN
ABSORBIA MOLECULAR
Dreapta de etalonare n absorbia molecular este reprezentarea
grafic a absorbanei fa de concnetraia etaloanelor. Dreapta de
etalonare se traseaz la lungimea optim de analiz.

Panta dreptei de etalonare


Absorban este
Absorban

prob tg = b
Ax Cu ct absorbtivitatea molar
Concentraie
prob () este mai mare cu att
dreapta are o pant mai mare,
metoda este mai sensibil i
cx pot fi determinate concentraii
Concentratie mai mici.
INFLUENA DESCHIDERII FANTEI I A LUNGIMII
DE UND SELECTATE ASUPRA ABATERILOR

D C B C
A
B A
m
Absorbtivitate Absorban
D

m
Lungimea de und / nm Concentraie

1. Situaia A. Dac se lucreaz pe maximul peakului (la m) i fanta este


infinitezimal se obine liniaritate prefect a curbei de etalonare
2. Situaia B. Se lucreaz pe maximul absorbiei i ef este 1/10 din
semilrgimea benzii de absorbie, abaterile de la liniaritate sunt neglijabile
3. Situaia C. Se lucreaz pe maximul absorbiei dar fanta este larg apar abateri
negative n soluii concentrate.
4. Situaia D. Se lucreaz la alat lungime dect maximul de absorbie. Panta
dreptei scade semnificativ i abaterile de la liniaritate sunt cele mai mari.
CURBA ERORILOR N ABSORBIA
MOLECULAR

Curba erorilor n absoria molecular este reprezentarea


grafic a incertitudinii relative a concentraiei (c/c) n
fujncie de absorban sau transmitan.
Curba erorilor permite alegerea domeniului optim al
absorbanei, pentru care incertitudinea concentraiei este
este mic.
Forma curbei erorilor depinde de tipul zgomotului
preponderent care afecteaz msurarea transmitanei
sau absorbanei, precum i de performanele
spectrometrului.
CURBA ERORILOR PENTRU SPECTROFOTOMETRE
DE SLAB I INALT PERFORMAN. DOMENIUL
OPTIM AL ABSORBANEI
CURBA A. T k1
Curba erorilor vpentru un sepctrofotometru
de slab performan. Incertitudinea este
dat aparatul de msur .
Domeniul optim al absorbanie este 0.2
0.8. Eroarea minim este la A = 0.434.
CURBA B i C. T k 2T 1/ 2 T k3T
T k1
Eroare rel. Conc. (
Curba erorilor pentru un spectrometru de
E nalt performan. Incertitudinea este
A datorat detectorului, fluctuaiei sursei i
D transmisiei luminii prin cuv.
B C Domeniul optim al abasorbanei este mai
larg 0.2 2 sau 0.2 3.

Absorban CURBA D i E.
Curbe acare includ 2 sau 3 surse de
incertitudini.
DETERMINAREA SUBSTANELOR IN
AMESTEC PRIN ABSORBIA MOLECULAR
PRINCIPIU:
Determinarea substanelor n amestec se bazeaz pe aditivitatea
legii liu Lambert Beer la o anumit lungime de und pentru un
amestec de substane.
La o anumit lungime de und, absorbana total este suma
absorbanelor compuilor din amestec.
n n
At i Ai i i b ci
Unde
Ai absorbana componentului (i) la lungimea de und ()
i absorbtivitatea molar a componentului (i) la lungimea de und ()
Ci concentraia componentului (i) din amestec
Pentru un mestec binar, legea lui Lambert Beer este:

At A1 A2 b c1 b c2

1

2

Din aceast ecuaie nu puten calcula concentraiile c 1 i c2 din


amestec.
Pentru a determina concentraiile din amestecul binar trebuie s se
cunoasc absorbana amestecului la dou lungimi de und ( 1 i 2)

At 1 bc1 bc2

1 1
Pentru 1
1 2

At 2 bc1 bc2

2 2
Pentru 2
1 2

Dac se cunosc absorbanele amestecului la cele dou lungimi de


und i coeficienii sistemului se pot calcula concentraiile celor
dou componente.
Etapele analizei amestecurilor de substane sunt
urmtoarele:
1. Determinarea lungimilor optime de analiz 1 i 2
2. Determinarea coeficienilor sistemului de ecauii i
3. Determinarea absorbanei amestecului la cele dou
lungimi de und i rezolvarea sistemului

Condiiile care se impun la determinarea a amestecurilor


de substane:
1. Substanele s nu reacioneze ntre ele
2. Substanele s nu prezinte interferene spectrale
3. Substanele s aib absotbtiviti molare diferite,
pentru ca determinantul sistemului () s fie diferit de
zero. 0
DETERMINAREA LUNGIMILOR OPTIME DE
ANALIZ A AMESTECURILOR
Pentru aceasta se prepar un etalon din fiecare compus i se traseaz
spectrul de absorbie A = f().
Din spectrul de absorbie se determin lungimile optime de analiz 1 i 2,
coerspunztoare maximelor de absorbie pentru cei doi compui.
Se aleg lungimile optime corespunztoare maximelor, deoarece la aceste
lungimi de und dreptele de etalonare au panta maxim, respectiv abaterile
de la liniaritate sunt neglijabile. Implict metoda are sensibilitate i precizie
foarte bune.
Compus II
Compus I
Absorbana

1 2
Lungimea de und / nm
DETERMINAREA COEFICIENILOR
SISTEMULUI
Se prepar etaloane din fiecare compus
Se msoar absorbanele etaloanelor la cele dou lungimi de und
Se traseaz drptele de etalonare A = f(c) pentru fiecare compus la cele
dou lungimi de und i se calculeaz panta dreptelor, care sunt egale cu
coeficienii sistemului.

Comp. I Comp. II

1 1b 2 2b
Absorban

Absorban
Comp. II Comp. II

2 1b 1 2b

Concentratie Concentratie
1 2