Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO

Nano partculas GANS in Vitro

Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

CONCLUSIN:

Observamos que tanto GANS CO2 como ZnO NPs poseen efectos distintos sobre la viabilidad celular de los mamferos a travs de matar
clulas de cncer (HepG2, A549 y BEAS 2B) que no poseen clulas normales (astrocitos de rata y hepatocitos). La marcada diferencia en
citotoxicidad entre las clulas cancerosas y las clulas normales sugiere un gran potencial para GANS CO2 y ZnO NPs como nuevas alternativas
a la terapia del cncer.

Nuestros datos moleculares mostraron que tanto el ARNm y los niveles de protenas del gen supresor tumoral p53 y se gen apoptico fueron
regulados en ascenso mientras que el gen antiapopttico bcl-2 bajaron su regulacin tanto en GANS CO2 y ZnoNPs tratados con cncer de
hgado humano clulas HepG2. Ambos CO2 y ZnO NPs tambin se encontra que inducen la actividad de la enzima caspase-3 y la fragmentacin
del ADN en clulas HepG2. Adems, tanto GANS CO2 como ZnONP se inducen niveles de oxidantes (Ros y LPO) y reducen la capacidad
antioxidante de las clulas HepG2. Este experimento sugiere que GANS NPs induzca la apoptosis en clulas cancerosas, que est mediada por
ROS va p53, bax/bcl-2, y las vas de caspase a travs de los cuales la mayora de los frmacos anticancergenos desencadenan la apoptosis
blanqueando sin toxicidad a las clulas sanas. Por otro lado, la adicin de GANS NPs con Amino contenedora de agua disminuy la actividad
de las nanopartculas.
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro Test Preliminar
Test preliminar no controlado: 3 gramos de GANS CO2 NPs fueron combinados con 1 litro de agua destilada para
formar 1 ml de solucin GANS CO2 NPS. La solucin fue inyectada (subcutneamente) in cada uno de los sobre la
base diaria.
Resultados

Antes 20 das despus de tratamiento inyectado

 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

Cultivo de clulas Vitro y la exposicin con GANS co2 y znoNPs: Tres tipos de clulas cancerosas (HepG2 AS49 y BEAS-2B)
(Astrocitos y hepatocitos) para determinar la viabilidad celular frente a la exposicin a GANsco2 y ZnoNPs. El carcinoma
hepatocelular humano (HepG 21. clulas epiteliales bronquiales humanas (BEAS 2B) se obtuvo de American Type Culture
Collection (Rockville, MD, EE.UU.) y el adenocarcinoma de pulmn humano (AS49) se compr a lapanese Cancer Resources
Bank ucRB Tokio, Y los astrcitos se aislaron por medio de la tcnica de perfusin de colageno

Las clulas se cultivaron en medio DMEM / F-12 o RsMi 1640 suplementado con 10% de bovino fetal y 100 uuml en co2 y las
clulas CAt 85 se cosecharon usando tripsina al 0,25% y se cultivaron zsem2 fasks y sub Seis placas de pocillos o placas de
96 pocillos de acuerdo con la seleccin de los experimentos las clulas se dejaron unir a la superficie durante 24 horas para el
tratamiento de GANS zno Npy fueron medio de cultivo y diluido con agua o con Amino para apropiarse de 0,1 ng / ml de zno
(suglmu. 10 ug / ml de N2 de co2 y de ozsugUmt oos ug / ml, NP), las diluciones de GANS NP fueron sonicadas usando un
bao onicador a temperatura ambiente durante 10 minutos a 40 W para evitar el aglomerado de NP Antes del tratamiento
posterior, se recogieron las clulas para determinar la citotoxicidad. Estrs y marcadores de apoptosis. Clulas no expuestas a
GANS NPs servido ascontrols en cada experimento
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

Aislamiento total de ARN y el anlisis cuantitativo en tiempo real de PCR para marcadores
apoptticos Clulas hepG2 hepticas humanas Se cultivaron clulas HepG2 en placas de seis pocillos y
se expusieron a 15 ug / Y 0,1 ng / mL de GANSZno NP diluidos con agua o agua con Amino T durante 24
horas. Al final de la exposicin, se extrajo el ARN total mediante el kit de kit RNA (xurabo, Japn) de
acuerdo con las instrucciones del fabricante, se determin la concentracin de la muestra utilizando el
espectrofotmetro Uv 1800 (Shimadzu, Japn) y se visualiz la integridad del ARN en gel de agarosa al 1%
Utilizando un sistema de documentacin de gel (AE-6933FXES, Attov Japan). La primera cadena de cDNA
se sintetiz a partir de 1 \ mu g de ARN total mediante transcriptasa inversa utilizando M MLV (BeerTraAce-
a, Toyobo ufe Sciences, cebadores de acuerdo con el protocolo del fabricante PCR PCR cuantitativa en
tiempo real llevada a cabo por SYBR Green Realtime PCR Master MixToyobo Life Sciences Japan) ABI
pRISAM 7000 Sistema de Deteccin de Secuencias (Applied Biosystems, CA, USA). Se aadieron dos
microlitros de ADNc de molde al volumen final de 20 \ mu l de mezcla de reaccin. Los parmetros del ciclo
de POR en tiempo real incluyeron 10 minutos a 95C seguidos por 40 ciclos que implicaron
desnaturalizacin a 95C durante 15 segundos, recocido a 60C durante 20 segundos y alargamiento a
72C durante 20 segundos. Todos los experimentos de PCR en tiempo real se realizaron por triplicado y los
datos se expresaron como la media de al menos tres experimentos independientes.
 Agua potable GANS

CO2 AGUA GANS (Clulas conectoras, emociones del sistema neuronal)

ZINC AGUA GANS (Emociones)

CuO AGUA GANS (Msculos, ligamentos, desinfecciones)

CH3 (Energa)

Nunca dar CH3 GANS a pacientes de cncer

 CO2 GANS PRUEBA DE TOXICIDAD EN VIVO
TOXICIDAD DE CO2 GANS NPs EN EXPOSICIN INTRAVENOSA DEL
RATN
Periodo de experimento: 14 de noviembre de 2016 5 de diciembre de 2016
Distribucin tisular a corto plazo de PNs Co2 de GANS: La distribucin tisular a corto plazo de
GANS se investig en 4 puntos de tiempo (5min, 15min, 30min, y 1h) despus de la inyeccin
intravenosa de NP GANSco2 (1000 mg / kg) (Fig. A, B, c). En general, una sustancia inyectada por
va intravenosa se distribuye por primera vez en los pulmones y luego se distribuye a todo el cuerpo
a travs de la circulacin sangunea. nivel en el hgado (Fig. A) alcanz su punto mximo a los 5
min, y que en el rin (Fig. y el bazo (Fig. El hgado mostr la concentracin ms baja entre 3
tejidos (Fig. A), y El el nivel de rin disminuy rpidamente despus de 15 minutos al mismo nivel
que el grupo de control. Los datos a continuacin expresan S.D.
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016
GANS CO2 y ZnO NPS induciendo fragmentacin apoptotico DNA en cncer de hgado humano HepG2 clulas: El
perfil ADN de las clulas tratadas con 15 ug/ml de GANS CO2 NPs y 0,1 ug/ml GANS ZnO NPs a lo largo de 24
horascon no tratado control de clulas analizadas. En clulas controladas, el ADN no fue fragmentado, donde las
clulas se trataron ambas con GANS CO2 y ZnO NPS diluidad agua fue tratado procesos apoptotico como era
evidente por fragamentacin ADN, por otro lado las clulas tratadas con ambos GANS CO2 y ZnO NPs diluido con
Agua amino contenida sin inducir fragmentacin ADN apoptotica.
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

Matanza selectiva de clulas cncer por GANS CO2 NPs:

Efectos del GANS CO2 NPS sobre la viabilidad de tres tipos

de clulas de cncer (HepG2, A549 y BEAS-2B) y dos tipos
de clulas normales (astrocitos y hepatocitos de ratas).
Clulas son tratados con GANS CO2 NPS y diluida con agua
en las concentraciones de 5ug/ml, 10ug/ml y 15 ug/ml
diluido con amino agua contenida en la concentracin de 15
ug/ml por 24 horas. Al final de la exposicin, viabilidad
celular fue determinada usando ensayo MTT. Fecha
representa +/- desviacin estndar de tres experimentos
idnticos que fueron triplicados
Protocolo plasma para el paciente

Paso 1 Paso 2 Paso 3

ANALIZA EMOCIONES PRUEBA ORDEN DE

CON CANCER
SANGRE Crear parches
CREADO
Apuntando al rea
Lado izquierdo problemas Buscar metal en altos afectada
de madre o hijo niveles
Para mis pacientes eran
Lado derecho problemas Dictar cuanto metal est Parches de calcio.
asociados sembrado en el cncer
 Resultados histopatologa
Biopsia de masa del seno y nodos linfticos
Fibra conexin de tejidos con extensa necrosis coagulada
Comentarios
Seccin de la biopsia de masa muestra tejido granulado asociado con
Extensa coagulacin y calcificacin, con alta sospecha de necrosis
tumoral
El tejido adyacente viable muestra tejido granulado, fibrosis estromal
y colecciones de
Histiociatica y crnica inflamacin de clulas ligadas
Sin evidencia de humor vial al ver en la biopsia corriente
Descontaminacin de agua con
Agua Copper GANS energizada
Resultados
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 20 de febrero de 2017 - Contina
Material de ensayo: GANS co2 y zno NPs dispersin en polvo NPs, 100 nm tamao de partcula (en
H20) fueron sintetizados de acuerdo con la tcnica de Keshe. Antes de la administracin oral o
intravenosa, la dispersin se diluy con agua destilada para evitar la agregacin.

Animales de ensayo: Se compraron ratones Balb c machos y hembra de ocho a diecisis semanas
de edad (Bw 28,1-33,6 g) de CLEA Japan, incorporado (Tokyo, Japn). Los ratones se alojaron dos a
una jaula en un ciclo de 12 horas / oscuridad con acceso ilimitado a comida de ratn y agua en una
habitacin regulada por temperatura. Se les permiti aclimatarse a su entorno durante una semana
antes del tratamiento.

Mtodo del experimento: De cada 50 varones y hembras (Bw.2s13a6d y edad (8-16) se

implantar una seccin medular de 2 mm x 2 mm del tumor de colon humano de un ratn donante.
Se mantendrn diez ratones como grupo de control y cuarenta ratones Cuatro grupos, diez ratones
cada uno o un co2 y zno NPs (wtw 1: 3) en grupo por va oral o intravenosa.Los tumores extirpados
de ratn donante se colocaron por primera vez en una solucin de Ringers para asegurar la
viabilidad despus de la eliminacin del ratn donante. La seccin Se inyect en el abdomen por
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Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

Medicin de intracelular ROS: La produccin intracelular de ROS fue medida usando 2,7-
diclorofluorescente diactetico (DCFH-DA). El DCFH-DA entra pasivamente en la clula, donde
reacciona con Ros para formar el compuesto altamente fluorescente diclorofluorescena (DCF-
DA) ). En breve. Se diluy solucin madre de DCFH-DA 10 mM (en metano) en medio de cultivo sin
suero u otro aditivo para producir una solucin de trabajo de 100 \ mu M. Las clulas HepG2 se
trataron con GANS CO2 NPs a la concentracin de 15 ug / mL y GANS Zno NPs a la concentracin
de 0,1 ug / ml, despus de un tratamiento con agua o agua "Amino", durante 24 horas. Al final de
la exposicin, las clulas se lavaron dos veces con HBSS y luego se incubaron en 1 ml de solucin
de trabajo de DCFH-DA a 37C durante 30 minutos. Las clulas se lisaron en solucin alcalina y se
centrifugaron a 2300 x g durante 10 minutos. Se transfiri un sobrenadante de 200 l a una placa
de 96 pocillos y se midi la fluorescencia a excitacin a 485 nm y emisin a 520 nm usando un
lector de microplacas (MTP-900, Corona Electric, Japn). Los valores se expresaron como un
porcentaje de la intensidad de fluorescencia en relacin con los pocillos de control.

Estimacin de la protena: El contenido de protena total se midi usando Protein Assay Rapid
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 14 de noviembre de 2016 5 de diciembre de 2016
RESULTADOS:
Estimacin de LD50: Para obtener la DL50 en ratones ICR, 1400, 1300, 1200, 1100, 1000, 500, 250, 100, 50, 5, 1,
0,5 y 0,1 mg / kg de GANS co2 NP se expusieron a ratones lcR a travs de la vena de la cola, se determin la DL50
en ratones ICR 1400 mg / kg mediante inyeccin.

Cintica de la sangre: Con base en la DL50, se utiliz una dosis de 1000 mg / kg de GANS co2 NP. La
concentracin de GANS de sangre alcanz su punto mximo a los 5 minutos y disminuy rpidamente despus de
15 minutos, despus cambi moderadamente en el punto de tiempo siguiente. Durante el experimento no se
observ hemlisis marcada.

Cambio en el tiempo de cambio en los niveles de GANS

sanguneos despus de la administracin intravenosa (1000 mg /
kg) en ratones. Los datos presentados como aumento de GANS
despus de la resta del nivel de GANS en el grupo de control.
Dispositivo de respiracin
 ENFERMEDADES
PSICOSOMTICAS

ESTR EMOCIONES
S
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Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 20 de febrero de 2017 Contina
Mtodo de tratamiento con GANS co2 y zno NPs: 3 gramos de GANS CO2 y ZnONPs. Respectivamente, se combinaron
individualmente con un litro de agua destilada para formar soluciones. Se prepar la solucin de GANSco2 zno Nps mezclando 3
partes de la solucin de GANS co2 y la parte de la solucin de GANS zno para producir soluciones de o.3 mg / ml. 1 ml de estas
soluciones se administra por va oral usando una pipeta con punta de plstico diariamente o una dosis intravenosa a travs de una
vena alta subcutnea en el tumor. Por decidir). La dosificacin oral y intravenosa (o subcutnea) comienza el primer da de
palpacin y cesa 20 das despus.

Los ratones se dividen en grupos de control y de ensayo de la siguiente manera:

A. Los animales de control recibirn 1 ml de agua destilada (n= 10).

B. Test Ratones (alimentacin oral)
1 ml solucin GANS CO2
1 ml solucin GANS CO2-Zno solucin tw / w 31 respectivamente)
C. Prueba Ratones (por va intravenosa o subcutnea)
1ml GANS Solucin de CO2
Solucin de GANS co2-zno (mezcla respectiva 3:1) fijada en formalina al 10%.
ABORDAJE DE TIPOS DE SALUD

FSICO
ENERGA
EMOCIONE
S
ALMA
TRATAMIENTO PLASMA
 CO2 GANS PRUEBA DE TOXICIDAD EN VIVO
TOXICIDAD DE CO2 GANS NPs EN EXPOSICIN INTRAVENOSA DEL
RATN
Periodo de experimento: 14 de noviembre de 2016 5 de diciembre de 2016

CO 2 GANS administrado por va intravenosa. Total de 65 ratones ICR en 7 grupos, 5 ratones en cada grupo.

Material de ensayo: NPs de dispersin en polvo de GANS Co2, tamao de partcula <100 nm (DLsl, 35 nm de tamao
de parte (APs) en H20 (Tipo de modificacin: 3-Aminopropil trietoxisilano catinico) Antes de la administracin
intravenosa, la dispersin se diluy con distil Agua para evitar la agregacin
Animales de ensayo Se comprarn ratones hembra ICR de ocho semanas de edad (Bw 27 a 34,2 g) de CLEA (Tokio,
Japn) Los ratones se alojaron dos en una jaula en una luz de 12 horas / Oscuro ciclo con acceso ilimitado a la comida
de ratn y el agua Se les permiti aclimatarse a su entorno durante una semana antes del tratamiento). En un
experimento preliminar, no se observ diferencia de gnero con respecto a la estimacin de GANS.
LD50: la estimacin de DL50 se llev a cabo utilizando el mtodo de Litchfield-Wilcoxon. Un total de 65 ratones fue
expuesto a 1400, 1300, 1200, 1100, 1000, 500, 250, 100, 50, 5, 1,0,5 y 0,1 mg / kg de GANS Co2 NPs a travs de la vena
de la cola. Despus de la inyeccin, se observaron sntomas y mortalidad.
Acumulacin de tejidos: Se fij una dosis nica intravenosa (o 1, 1000 mg / kg) en formalina al 10% para el
procesamiento histolgico de rutina. Los ratones recibieron una nica dosis intravenosa a travs de la vena de la cola y
se sacrificaron en el momento oportuno (1 h, 1 da, 3 das, 6 das y 16 das). Se recogieron muestras de tejido (hgado,
rin y bazo).
DESCONTAMINACIN DEL AGUA USANDO AGUA
ENERGIZADA COPPER GANS
PREPARACIN DEL EXPERIMIENTO
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

Propiedades anticancerosas de GANS NPs en clulas cancerosas humanas (HepG2, A549 y BEAS-2B)

Material de ensayo: GANS NPs y Amino CH3 que contiene agua

Reactivos: Se adquirieron suero bovino fetal, penicilina-estreptomicina, medio DMEM / F-12, medio RPMI1640 y solucin
salina tamponada con fosfato de Dulbecco de Nacalai Tesque (Kyoto, Japn). Anticuerpo anti-p53 anticuerpo antibax,
anticuerpo anti-bcl-2 y anticuerpo anti-B-actina fueron obtenidos de IBL akasaki, Japn). Los anticuerpos secundarios, el
tampn RIPA y el dodecil sulfato de sodio (sDS) se compraron a la industria qumica pura de Wako (osaka, uapan). MTT
(bromuro de 3- (4,5 - dimetiltiazolil) - 2,5 - difeniltetrazolio), GsH, cido 5,5 - ditio - bis- (2 - nitrobenzoico) tiobarbitrico
(TBA), 2,2 fueron adquiridos a Sigma Aldrich.

Anlisis tamao de las partculas GANS CO2 y ZnO NPs: El tamao hidrodinmico medio y el potencial zeta de las
GANS NP en agua y el medio de cultivo celular completo se determinaron por dispersin dinmica de la luz r y Japn).
Tanto el GANS co2 como el Zno NPs se dispersaron en medio de cultivo celular completo (DMEM) a una concentracin de
15 \ mu g / ml y 0,1 \ mu g / ml cativamente durante 24 horas. A continuacin, la suspensin utilizaba un sonicador
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

Resultados El tamao hidrodinmico promedio de CO2 NPs: En agua y

medio de cultivo celular determinado por DLs fue de 69 nm y 65 nm
respectivamente y el tamao hidrodinmico promedio de Zno Nps en agua y
medio de cultivo celular fue de 118 Nm y 115 nm, respectivamente. Adems, el
potencial zeta de co2 Nps en agua y medios de cultivo fue de 392 miv y 43
respectivamente y el potencial zeta de znoNPs en agua y medio de cultivo fue de
-31,3 mV y -33,8 miv respectivamente.
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

GANs co2 y zno NP alteraron la expresin de los niveles de ARNm de genes apoptticos
en el cncer de hgado humano Clulas HepG2: PCR cuantitativa en tiempo real para analizar
la Los niveles de ARNm de los genes apoptticos (p53, bax, bcl-2 y caspasa 3) en las clulas
expuestas a GANS co2 y Zno NP diluidas con agua o Amino "que contenan agua a la concentracin
de 15 ug / mL y 0,1 ug / mL respectivamente , Durante 24 horas.Los resultados mostraron que
tanto GANS Co2 y zno NPs significativamente alterado los niveles de expresin de ARNm de estos
genes en clulas HepG2 El mRNA nivel de expresin de los genes supresores tumorales p53 (Fig A)
y proapoptotic gen bax Significativamente regulados (pc0,05 para cada uno)
Como preparar polvo GANS en grado frmaco
Preparacin del polvo de co2 GANS para administracin oral
1-Coloque la placa de cobre nano-revestida y la placa de zinc en un recipiente de plstico.
2-hilos conectarlos como se describe por Keshe
3-Preparar una solucin de NaOH 0,5 M (Soda custica) y calentar hasta 60
4-Verter la solucin en un recipiente de plstico (reactor).
5-Colocar el reactor en un bao de agua y ajustar la temperatura a 60 C (solucin dentro
del reactor).
6 Despus de 24 horas, tomar el reactor del bao de agua y dejar enfriar a temperatura
ambiente.
7-Transferir el precipitado en frascos de centrfuga de 50 ml y centrifugar 10.000 rpm
durante 10 min.
8-Despus de la centrifugadora, reemplazar el medio de reaccin con la misma cantidad
de medio de reaccin de ultrasonido MillQ.
9- La energa aplicada por volumen (peso) de material de nanopartculas en suspensin se
estim en ca. 4,8 por 50 ml de partculas (4 g). (volumen 3 L de salida pico ultrasnica
320 W, frecuencia 35 kHz).
Repita 7,8 y 9 cuatro veces, respectivamente.
10- Despus del cuarto ciclo de limpieza, secar las partculas a 80 C (aire) ya la presin
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

Matanza selectiva de clulas cncer por GANS CO2 NPs:

Efectos del GANS CO2 NPS sobre la viabilidad de tres tipos

de clulas de cncer (HepG2, A549 y BEAS-2B) y dos tipos
de clulas normales (astrocitos y hepatocitos de ratas).
Clulas son tratados con GANS CO2 NPS y diluida con agua
en las concentraciones de 5ug/ml, 10ug/ml y 15 ug/ml
diluido con amino agua contenida en la concentracin de 15
ug/ml por 24 horas. Al final de la exposicin, viabilidad
celular fue determinada usando ensayo MTT. Fecha
representa +/- desviacin estndar de tres experimentos
idnticos que fueron triplicados
 CT SCAN

Apndice: comparacin CT abdomen pelvis

El cambio ms impresionante levemente
visible es la reduccin marcada en el tamao
de la densidad ligera del tejido dejada en la
masa del seno
Significativa reduccin de tamao del nodo
axilar izquierdo, previamente, el gran nodo
axilar mesurado sobre 3x5 ahora 2,4 x 3,5
Reduccin marcada en el tamao del lbulo
izquierdo del nodulo pulmn
 CREANDO PARCHES DE CALCIO

Parche 1 Parche 2
(lado derecho del (lado izquierdodel
seno) seno)
Calcio-3 Calcio-1
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 20 de febrero de 2017 Contina

Se sacrificaron dos de cada diez ratones en el grupo de alimentacin de co2 (BI) y se sacrificaron
2 de cada 10 ratones en el grupo de alimentacin de Zn2 + CO2 (BII) Inyecciones de grupos C.I y
C.II en progreso
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016
Resultados
Matanza selectiva de clulas cncer por GANS CO2 NPs: Durante 24 horas, tres tipos de clulas cancerosas
(HepG2, AS49 y BEAS 2B) y dos tipos de clulas normales de rata (astrocitos y hepatocitos) fueron expuestos a
GANSco2 Nps diluido con agua en la Concentraciones de 5 ug / mL de 10 ug / ml 15 ug / ml y se diluy con Amino
"que contena agua en la concentracin de 15 g / mL de GANS zno NP diluido con agua a las concentraciones de
0025 g / ml. Despus de 24 horas se determin su citotoxicidad usando el ensayo de MTT.Los resultados han
demostrado que GANS co2 y zno NPs por debajo de la concentracin de 15 ug / ml Y 0,1 ng / ml, respectivamente,
no produjo una reduccin significativa en la viabilidad de los tres tipos de clulas cancerosas (P-oos para cada
uno) .Como la concentracin de GANS co2 y zno NPs se aumentan a 15 ug / ml y01 ug / ml Respectivamente, se
observ una reduccin significativa en la viabilidad celular para todas las clulas cancerosas dependientes de la
dosis (P <Oos NPs no indujeron ninguna reduccin en la viabilidad de astrocitos de rata primaria y hepatocitos en
cualquier concentracin utilizada en este experimento. Por otro lado, 15 g / ml para GANSco2 NP y 0,1 g / ml para
GANS zno Nps diluido con Amino agua no produjeron una reduccin significativa en la viabilidad celular de todas las
clulas cancerosas o en la viabilidad de astrocitos primarios de rata y hepatocitos (P <0,05 para cada uno).
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016
Ensayos de parmetros de estrs oxidativo: Las clulas HepG2 se cultivaron en un matraz de cultivo de 7 cm2 y se
expusieron a GANS co2 y zno NP a una concentracin de 15 ug / ml y 0,1 ug / mL, respectivamente, o bien se diluyeron
con agua o agua que contena Amino Despus del tratamiento, las clulas se lavaron y se recogieron en solucin salina de
tampn de fosfato enfriada con hielo a 4 C. Los sedimentos de clulas recolectadas se lisaron a continuacin en tampn
de lisis celular (Tris-HCl1PH5,5 mM, NaCl 150 mM, Na2EDTA 1 mM , 1%, Triton y pirofosfato sdico 2,5 mM) Despus de
la centrifugacin (10.000 xg durante 10 minutos a 4 c), el sobrenadante (extracto celular) se mantuvo en hielo hasta que se
ensayaron los biomarcadores de estrs oxidativo.

La extencin de membrana LPO fue estimada midiendo la formacin de malondialdehdo (MDA) usando el mtodo de
Ohkawa (ohkawa H, Ohishi N, Yagi K. Ensayo para perxidos lipdicos en tejidos animales por reaccin de cido
tiobarbitrico, Anal Biochem, 1979; 9s: 351-358). De los productos de la membrana LPO Una mezcla de 0,1 ml ce L de
extracto y 1,9 ml de tampn de fosfato de sodio 0,1 M (pH 7,4) se incub a 37C durante 1 hora. La mezcla de incubacin,
despus de la precipitacin con TCA al 5%, se centrifug (2300 x g durante 15 minutos a temperatura ambiente) y se
recogi el sobrenadante. A continuacin, se aadieron 1,0 ml de TBA al 1% al sobrenadante y se colocaron en el agua
hirviendo durante 15 minutos. Despus de enfriar a temperatura ambiente, la absorbancia de la mezcla se tom a s32 nm y
se expres en nmol / mg de protena usando un coeficiente de extincin molar de 1,56 x 10s M -1 cm -1. El nivel de GSH
se cuantific utilizando el reactivo de Ellman.
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

GANSco2 y ZnO NPs, se examin el estado de oxidantes y antioxidantes en clulas HepG2 de cncer de hgado humano:
El estatus de oxidantes y antioxidantes fueron examinados en el cncer de hgado humano tratadas con 15 ug / mL de GANS
co2 NPs y 0,1 ug /mu GANS ZnO NPs diluidos con agua o con Amino "contiene agua" durante 24 horas. Los niveles de Ros y
LPO se midieron como marcadores de oxidantes. Los resultados mostraron que los niveles de oxidante (Ros y LPO) fueron
significativamente ms altos en las clulas tratadas, mientras que las GANS NPs diluido con Amino con contiene agua no
aumentan los niveles de antioxidantes.
COMIDA PLASMA
Recomendado
para pacientes
con cncer para
estabilizar
prdida de peso
ENERGA CORPORAL
DOS UNIDADES Y ENERGIAS DE SALUD
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

Propiedades anticancer de GANS NPs en clulas humanas cncer (HepG, A549 y BEAS-2B)

Materiales de prueba: GANS NPs and Amino=CH3 agua contenida

Reagentes: Suero bovino fetal, penicilina-estreptomicina, medio DMEM / F-12, RPMI1640 mediu y fosfato de Dulbecco De anticuerpo
anti-p53, anticuerpo antibax, anticuerpo anti-bcl-2 y anticuerpo anti-B-actina fueron obtenidos de IBL Takasaki, Japn). Se compraron
anticuerpos secundarios, tampn RIPA y dodecilsulfato sdico (SDS) a Wako Pure Chemical Industry (Osaka, Japn). MTT (bromuro
de 3- (4,5 - dimetiltiazol - 2 - il) - 2,5 - difeniltetrazolio), GSH, cido 5,5 - ditio - bis- (2 - nitrobenzoico) (DTNB), Sigma - Aldrich. Todos
los dems productos qumicos utilizados fueron de la ms alta pureza disponible de fuentes comerciales.

Anlisis del tamao de partcula de GANS co2 y znoNPs: El tamao hidrodinmico promedio y el potencial zeta de GANS Ps en
agua y medio de cultivo celular completo se determinaron mediante dispersin dinmica en (DL) (Horiba 550, ambos GANS co2 y zno
NPs y 0,1 agua Y un medio de cultivo celular completo (DMEM) a una concentracin de 15 ug / mL de bao a ug / ml, respectivamente,
durante 24 horas. A continuacin, la suspensin se utiliz una temperatura ambiente de sonicador durante 15 minutos a 40 wy los
experimentos DLS realizados.
ELEMENTOS CORPORALES
CALCIO GANS

HUESOS DE POLLO

CORTAR EN PEQUEAS PIEZA

HERVIRLO EN VINEGRE 5 VECES (GELATINA)

REMOVER EL VINAGRE PONIENDO LOS HUESOS EN UN

FRASCO Y CUBRIRLOS CON CAUSTICO (HIDROXIDO SODICO)

AADIR AGUA DESTILADA HERVIDA CUBIERTA Y DEJARLO

POR 6 DIAS

ENJUAGAR EL CAUSTICO 10 VECES CON AGUA DESTILADA Y

POR ULTIMO AADIR CO2 AGUA GANS
 CO2 GANS PRUEBA DE TOXICIDAD EN VIVO
TOXICIDAD DE CO2 GANS NPs EN EXPOSICIN INTRAVENOSA DEL
RATN
Periodo de experimento: 14 de noviembre de 2016 5 de diciembre de 2016

CONCLUSIN:

La cintica sangunea y la distribucin tisular de una dosis txica de GANS co2 NPs fueron
investigados despus de la exposicin intravenosa en ratones.

Despus de la inyeccin, GANS co2 NP se retiraron rpidamente de la sangre y se distribuyeron

a varios rganos.

La distribucin tisular a corto plazo mostr que el bazo, el hgado y el rin son rganos diana de
los NPs de coans de GANS y no se observ ningn dao patolgico en ratones tratados con
GANS Co2 NPs.

La DL50 en ratones ICR fue de 1400 mg / kg por inyeccin, esto significa que los NPs de Co2 de
GANS son prcticamente no txicos
 Eficacia Anti-Cncer del CO2 y ZNO
Nano partculas GANS in Vitro
Periodo de experimento: 12 de diciembre de 2016 30 de diciembre de 2016

Caspase-3 Ensayo: Se determin la actividad del enzima de caspasa-3 utilizando un ensayo de micro
placa fluoromtrico estndar en resumen, se sembraron 1 x 104 clulas HepG2 / pocillo en una placa de
96 pocillos y se expusieron a GANSco2 y zno NP a la concentracin de 15 g Despus de la exposicin,
las clulas se recolectaron en solucin salina de tampn de fosfato helada y se prepararon el lisado
celular. Adems, se aadi una mezcla de reaccin que contena 30% en peso de agua Se incub
durante 15 minutos el lisado de clulas, 20 \ mu l de Ac DEvDAFC (sustrato de caspasa 3 y 150 \ mu l de
tampn de reaccin de proteasa tso mM tteom, i mM de EDTA y 1 mM de Dm (pH 7 zi) Se prepararon
intervalos de 15 minutos a las longitudes de onda de emisin de 430 / s ^ {3} nm usando un lector de
micro placas (MTP-900, corona Electric, lapan), amido-4-trinuorometilcourmarin (ARC) que variaba de 5
vM a 1s wM y su fluorescencia Registrado para la ululacin de la caspasa 3 Actividad en trminos de
pmol ARc liberado minuto / mg de protena.

Apotoptico Ensayo de escalera de ADN Se realiz ensayo de escalera de ADN de apotoptico en

clulas HepG2 expuestas a 15 ng / mL de GANS co2 NPs y og / mL de GANS zno NP diluidas con agua o
Amino "que contenan agua durante 24 horas Al final de la exposicin, El DNA extrado se evalu
despus en un gel de agarosa IN con bromuro de etidio, el patrn de fragmentacin de ADN se
document mediante un sistema de documentacin de gel.
 AGUA CO2 GANS CONTRA H2O2 INDUCIDO
mtDNA DAO EN EL FIBROBLASTICA DERMIS
Cometa (nucleos) Ensayo
HUMANA

La hebra rompe en mtADN generada por

tratamiento H2O2
Forma cometa como nucleos bajo
electroforticos condiciones. Adicin de
agua CO2 GANS (250 uM) provicin
completa proteccin contra el H2O2 (10um)
induciendo dao mtADN en las clulas
fibroblsticas dermis humanas.

ADN Mitocondrial
 CO2 GANS CONTRA CANCER
Primera prueba no controlada
Prueba nico roedor

26/10/2015 -> 27/11/2015

Dosis: 5mg/kg
Suspensin GANS en agua
Tamao particula: Max. 160nm
1 ml inyeccin subcutnea dentro seccin cancerosa por da

Alimentado con comida estndar de laboratorio para roedores