Western Blot: Protenas Bloqueio: reduz as interaes no especficas entre membrana e o anticorpo
1 anticorpo: (monoclonal ou policlonal) especfico para a protena de interesse
2 anticorpo: (anti IgG espcie-espcifico) conjugado com uma enzima que
permite a identificao visual
Deteco: colorimtrica quimioluminescente fluorescente radioativa Western Blot:
-Proporciona um mtodo paracomparaesde protenas
anvel de expresso
-Diagnsticos mdicos (ex. Teste confirmatrio para HIV,
alm de outras doenas infecciosas, auto-imunes, alergias, e outros) Southern Blot: DNA Denaturao: digesto da dupla fita do DNA com enzimas de restrio e o tratamento do gel com soluo alcalina (NaOH)
Transferncia do ssDNA para uma membrana: A membrana
aquecida (no caso da nitrocelulose) ou exposta a radiao ultravioleta (no caso do nylon) para ligar permanentemente o DNA membrana. Sonda Hibridizadora: uma molcula de DNA ou RNA cuja seqncia conhecida (idntica ou complementar a seqncia de interesse). A sonda de DNA marcada normalmente incorporando-se tomos radioativos ou ligando-se corantes quimioluminescentes
Revelao: por uma auto-radiografia em um filme de raio-x, ou pelo
aparecimento de uma cor caso a marcao cromognica tenha sido usada. Southern Blot:
-Anlises de sequncias genomicas, para verificar se
uma determinada seqncia de DNA est ou no presente em uma amostra de DNA analisada
-Alteraes em um nico nucleotdeo; deteco de
inseres, delees e rearranjos; ordenamento de fragmentos do DNA; fragmentos de cromossomo. Northern Blot: mRNA Denaturao: adio de formaldedo, que funciona como um desnaturante.
Transferncia do RNA para uma membrana: aquecimento (no caso da
nitrocelulose) ou exposio a radiao UV (no caso do nylon)
Altamente sensvel a RNAses
Sonda Hibridizadora: uma molcula de DNA ou RNA cuja seqncia
conhecida e complementar a seqncia de interesse, marcada normalmente com tomos radioativos ou corantes quimioluminescentes
Revelao: exposio a filme de raio-x, ou pela deteco de
fluorescncia. Northern Blot:
teis em estudo de expresso gnica (verificar se um determinado gene de
um genoma ou no transcrito em RNA) Estudo de diferentes tecidos Estudo do padro temporal de expresso de genes durante o crescimento do indivduo Professor Sir Edwin M. Southern
Southern, E. M.(1975). "Detection of specific sequences among
DNA fragments separated by gel electrophoresis".Journal of molecular biology98(3): 503517
H. Towbin, T. Staehelin, J. Gordon. 1979. Electrophoretic transfer of proteins from
polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. PNAS