Lectura a Prueba de Errores de

la interaccin codn-anticodon

L.A. Q. B. Claudia Rebeca Gonzlez Ruiz

Autores: Robert C. Thompson y

Pamela Stone
Proc. Nati. Acad. Sci. USA
Vol. 74, No. 1, pp. 198-202, Enero de
1977
Bioqumica
Introduccin
La fidelidad de la sntesis de protena es
substancialmente mayor que la especificidad del
reconocimiento del complejo codn-anticodn de la
que se esperara una energtica conocida de las
pares de bases en solucin.

Para probar la sugerencia de que la especificidad

de reconocimiento se puede incrementar por
lectura a prueba de errores cintica asociada a
hidrlisis de GTP se estudiaron los complejos
ternarios del Factor de Elongacin polipetdico
Tu(EFTu ) y el GTP con ribosomas programados con
poli-u.
 Con la mayora de los complejos
ternarios no anlogos, incluyendo 2 que
se aparean con las bases UUU 5 y 3, el
rechazo ocurre sin hidrlisis de GTP,
presumiblemente por una reaccin de
unin inversa.
Sin embargo con complejos que
contienen Leu e Ile tRNAs las cuales se
aparean correctamente con el sitio 3 y
las bases intermedias, la hidrlisis del
GTP se estimula aunque el aatRNA no fue
retenido por los ribosomas.
Estos resultados nos demuestran la
existencia de un paso de lectura a
prueba de errores dependiente de GTP
 Estas investigaciones han demostrado
que todos los pares estndar posibles
entre G-U se acercan en energa de unin
a los pares estndar.
La energa liberada de la unin de un par
G-U difiere de los pares que son correctos
A-U y G-C por tan solo 2-3kcal/mol.
Con excepcin de la base del codn 3
donde el bamboleo permite a G-U se un
par de bases estndar en el cdigo
gentico, el apareamiento de G-U casi
siempre resultara en una unin con el
aatRNA incorrecto.
El ribosoma y sus asociados deben
por lo tanto aumentar la
especificidad del apareamiento
codn-anticodn, a travs de un
mejoramiento en la exactitud del
apareamiento de bases.
Hopfield propuso un mecanismo
alternativo para incrementar la
especificidad de la union de
aatRNAs; un paso de lectura a
prueba de errores.
La lectura a prueba de errores
debera ser conducida por la
 Esta caracterstica sugiere un mtodo de
deteccin de lectura a prueba de errores, ya
que slo ese mtodo de rechazo de error debe
consumir GTP.
Hemos estudiado el mecanismode rechazo de
error en la reaccin de ribosomas poli(U)-
programados con una variedad de no analogos
de aa-tARN, en presencia de factor de
elongacin del polipptido Tu (EFTu) y GTP.
Los resultados indican que ciertos aa-tARN
estimulan la hidrlisis de GTP y todava no se
conservan en la ribosoma.
Nuestras conclusiones por lo tanto implican
una reaccin de lectura a prueba de errores,
del tipo postulada por Hopfield, en la sntesis
de protenas
Material y Mtodos
Ribosomas y EFTu de E. coli MRE600
En la preparacin de aatRNA se usaron
aminocidos etiquetados con H3
preparados con una sola tanda de una
mezcla de aatRNA sintetasas, preparadas
de E. coli MRE600 estos fueron Phe25;
leu65; Ile84; Lys30; Tyr60 y Val12.5
Los ribosomas con Poli-u y N-acetil-
fenilalanil-tRNA en el sitio P (donador),
se prepararon enzimticamente por
incubacin de ambos componentes.
 Para preparar el complejo ternario EFTu-
GTP-aatARN, EFTu-PIB se incub con el
fosfoenolpiruvato y piruvato quinasa, se
agrego GTP para proveer actividad
especifica y por ultimo se agrego
AminoaciltRNA y se filtro para eliminar
EFTu no acomplejados.
La reaccin de unin se inicio por medio
de la mezcla de 4 volmenes del
complejo ternario y un volumen de
Ribosoma-PolyU-AcPhetRNA a 0C.
Se determinaron las uniones de
[H3]aatRNA con los Ribosomas mediante
el metodo de Niremberg y Leder.
 Resultados
El postulado del
mecanismo de
rechazo de error se
esperara que este
asociado con una
pequea cantidad de
la hidrlisis de GTP, ya
que representa una
segunda vida de la
defensa, la mayora de
los errores son
detectados en el
primer paso
discriminativo antes
FIG. 1. La hidrlisis de GTP en complejos de la hidrlisis de GTP.
ternarios
anlogos y no anlogos. Un complejo ternario [1600 l
(alrededor de 300 pmol)] de [3H] - aa-tRNA, [. -32PJGTP, y
EFTu (Material y Mtodos) fue aadido a 400 L (1nmol)
de un complejo preformado AcPh-tRNA-poli (U)-ribosoma a
0 . Las muestras (150 l) fueron retirados en el momento
indicado y el contenido de 32P, fue determinado.
 Hidrlisis de GTP asociada a complejos
ternarios anlogos y no anlogos
Como se observo en trabajos previos
cuando se incuba un complejo ternario
Phe-tRNA, EFTu, y [-32P]GTP con
ribosomas programados con poly(U),
GTP se hidroliz rpidamente con la
produccin de Pi32i (Fig. 1), y la Phe-tRNA
se uni a los ribosomas.

En comparacin con el complejo ternario

que ocupaba la Lisina que debera
interactan muy mal con el codn UUU,
mostr una muy baja tasa de hidrlisis
 Con otros complejos ternarios las tasas de
hidrlisis de GTP variaban ampliamente.
Con Val y Tir la tasa no excedia el valor de
fondo.
Con Ile la tasa fue tres veces el valor de
fondo.
Con Leu era an mayor
(aunque todava slo una pequea fraccin
de la observada con Phe).
Con Leu la actividad GTPasa declin
rpidamente al nivel de fondo, mientras que
con la Ile se mantuvo elevado mucho ms