TECNICAS DE

CONFIRMACION
1. CRISTALES DE HEMINA O DE
TEICHMANN.
1.1.-FUNDAMENTO QUIMICO
La hemoglobina cuando es tratada con acido actico, se separa
inmediatamente de las protenas y del grupo prosttico, durante la hidrolisis
la globulina se desnaturaliza.

La oxidacin del fierro del grupo hem se efecta mas rpidamente en medio
acido que en medio alcalino, si esta presente un halgeno inorgnico como el
cloro, se formaran cristales insolubles de cloruro de ferriprotoporfirina o
hemina:
C 34 H 32 O 4 N 4 Fe OH
 1.2.- PREPARACION DEL REACTIVO
Cloruro de sodio 0.1 gr.
Bromuro de potasio 0.1 gr.
Ioduro de potasio 0.1 gr.
Acido actico 100 ml.
1.2.- PROCEDIMIENTO
1. Colocar la muestra problema en el centro de una laminilla de vidrio y
poner encina de ella de un cubre objetos.
2. Deslizar entre lamina y laminilla, por capilaridad, unas gotas del reactivo
de teichmann.
 3. Calentar lentamente y a baja temperatura la laminilla hasta evaporacin.
4. Dejar enfriar y observar al miscrocopio.
2. PRUEBA DE TAKAYAMA
(HEMOCROMOGENO)
2.1 FUNDAMENTO QUIMICO
Tanto la ferroprotoporfirina como la ferriprotoporfirina tiene la propiedad de
combinarse con otros compuestos nitrogenados por medio de la globulina.
Tales compuestos incluyen otras protenas, hidrxido de amonio , cianuro ,
nicotina y piridina y los productos resultante se llaman hemocromogenos. Los
cristales pueden formarse tanto en medio acido como alcalino sin embargo, el
reactivo de takamaya es de naturaleza alcalina.
2.2 MECANISMO DE LA REACION
El hidrxido de sodio efecta una hidrolisis alcalina , liberando el grupo
prosttico de la globina, el fierro del hem en este momento se encuentra
como ion frrico (+3) debido a la formacin de la metahemoglobinaen el
proceso de desecacin de la mancha de la sangre.
 La carga (+3) del fierro se neutraliza por el ion OH ,calentando la glucosa (a
azcar reducida ), se reduce el ion frrico a ferroso (+2) y la piridina se
combina con este para formar un producto cristalino insoluble: el
hemocromogeno o piridinferroprotoporfirina.
NaOH + GLUCOSA + PIRIDINA
La es mas sensible y sencilla que la de los cristales de hemina y no se dan
casos de falsas reacciones positivas.
2.3 PREPARACION DEL REACTIVO DE TAKAYAMA
Mezclar:
Una parte de solucin saturada de glucosa.
Una parte de solucin de hidrxido al 10%.
Una parte de piridina.( PM: 79.1 D=048).
Dos partes de agua destilada.
 2.4 PROCEDIMIENTO
a) Colocar una pequea cantidad de muestra problema entre una laminilla
portaobjetos y un cubreobjetos.
B) Deslizar por capilaridad unas gotas del reactivo entre lamina y laminilla.
C) Calentar la laminilla a baja temperatura durante 30 segundos.
D) Observar la microscopio en caso de positivo se observan cristales
romboidales de color rosa al derredor de la muestra.