VIRUSOLOGIE

Lucrari practice

Prepar. Univ Dr. Aura Temereanca

Asist. Univ dr. Cornel Popescu
Sef Lucrari Univ. dr. Camelia Sultana
ALGORITMUL
DIAGNOSTICULUI
IN VIROZE
 Etapele diagnosticului
virusologic

Orientarea diagnosticului (suspiciunea

de viroz)
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
 Etapele diagnosticului
virusologic

Orientarea diagnosticului
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
 Formular de trimitere pentru diagnostic
virusologic
Adresa spitalului/policlinicii/
cabinetului ce trimite produsul
patologic
Nume, prenume pacient
Date clinice, suspiciune
diagnostic
Tipul produs patologic
Tipul tratamentului administrat
in prealabil
Analiza solicitata
Semnatura, parafa medicului
Medicul caruia i se va
comunica rezultatul (tel, fax, e-
mail)
Sex, Varsta
Data debutului
simptomatolgiei
Data, ora recoltarii
Date epidemiologice (contact
cu boli infectioase
transmisibile, vectori, calatorii
in zone endemice pt o anumita
boala, vaccinari)
V. Varicela - Zoster
 Etapele diagnosticului
virusologic

Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului
patologic
Transportul produselor patologice
Direciile diagnosticului virusologic
RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE

S T E R I L !!!
Conteinere sterile pentru recoltarea si transportul
produselor patologice
RECOLTAREA PRODUSELOR PATOLOGICE
STERIL!!!
Recoltarea probelor
- locul & timpul potrivit

POLIO (enterovirusuri)
Recoltarea produselor patologice

PRODUSE PATOLOGICE
Snge - 3-5 ml prin punctia venoasa aseptica, pe anticoagulant.
Virusuri frecvent izolate: virusuri care disemineaza viremic si agentii etiologici ai
febrelor hemoragice.
Materiile fecale - 4-8 g in solutie de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitatea
enterovirusurilor).
Virusuri frecvent izolate: enterovirusuri, rotavirusuri, calicivirusuri, mai rar
adenovirusuri enterice.
Secretii nazo faringiene
a) spalatura nazo faringiana se obtine cu ajutorul unor tampoane cu
coada (sterile) introduse in cornetul nazal inferior.
b) aspiratul nazofaringian se obtine folosind un speculum nazal prin
administrarea a 3 ml ser fiziologic in nari cu o seringa atasata la un tub de
plastic.
c) lavaj traheobronsic se obtine prin bronhoscopie in conditii speciale
de catre personal calificat
Virusuri frecvent izolate: virusurile gripale A si B, virusurile paragripale,
adenovirusuri, rhinovirusuri, coronavirusuri, virusul respirator sincitial,
v.rujeolos, v. rubeolos, v. urlian.
Lichid cefalorahidian (LCR) - 5-6 ml prin punctie rahidiana, inainte de
inceperea tratamentului.
Virusuri frecvent izolate: virusul rabic, unele arbovirusuri.
PRODUSE PATOLOGICE
Saliva. Se recolteaza saliva de langa ductul Stenon cu tampon steril.
Frecvent este limitata la diagnosticul infectiei rabice.
Lichid vezicular - Colectarea lichidului din vezicule, bule, pustule se face
dupa dezinfectia prealabila a regiunii cutanate sau mucoase. Se perforeaza
vezicula cu un ac atasat la o seringa de tuberculina sau cu ajutorul unei
pipete.
Virusuri frecvent izolate: HSV I, HSV II si VZV.
Urina -100 ml - orice specimen urinar obtinut prin abstinenta de la mictiune
timp de 2 ore este adecvat pentru diagnosticul virusologic.
Virusuri frecvent izolate. V. citomegalic, v. rujeolos.
Tampoane vaginale, lavaj cervico-vaginal, tampon uretral de la nivelul
colului uterin si uretrei (atat la femeie cat si la barbat); cu tampoane sterile,
respectiv periuta citologica (pentru uretra masculina), fara toaleta prealabila
a regiunii.
Virusuri frecvent izolate: virusuri herpetice si papilomavirusuri; diagnostic
BTS, uretritelor, leziunilor veziculare si hiperplazice genitale.
Biopsia tisulara. Fragmente de organ recoltate n ctiva ml de solutie
salina + ser de vitel 10% + antibiotice n concentratiile folosite n culturile de
celule.
 Etapele diagnosticului
virusologic

Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic

Transportul produselor
patologice
Direciile diagnosticului virusologic
Transportul probelor recoltate
Rapid

La rece
Sigur
ambalare riguros corecta
etichetarea cu semn biorisc
documentatie in legatura cu
agentul biologic transportat
 Etapele diagnosticului
virusologic

Suspiciunea de viroz
Recoltarea produsului patologic
Transportul produselor patologice

Direciile diagnosticului
virusologic
 DIRECIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1. Izolarea viral

2. Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic
Izolarea
virusurilor
Izolarea virusurilor
3 sisteme de izolare folosite n virusologie

Culturi de celule
Ou de gin embrionat
Animalul de laborator
Izolarea virusurilor
in culturi de celule
 Izolarea pe culturi de celule

Neinfectate = EFECTE CITOPATICE

Infectate cu v. variolic

HEK 293 HeLa BSC-40

RABIE
Sus- neuron fara
incluzii Negri
Jos neuron cu incluzii
Negri (col HE)
Izolarea virala
prin
inoculare la
animalul de
laborator
RABIE modificari
patognomonice in SNC
Infiltrat mononuclear perivascular-
sus
Focare de infiltratie limfocitare in
celulele gliale -jos
 Izolarea virala prin inoculare pe OGE

Pocks-uri pe Membrana Chorio-alantoindiana OGE - v. variolic

 DIRECIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1. Izolarea viral

2. Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic
Detectia directa
a particulei
virale
Microscopia electronica
Coloratia negativa
acetat de uranil
acid fosfotungstic
Metode care cresc sensibilitatea
(106-108 particule/ml)
Metode de concentrare:
ultracentrifugare
difuzia in agar
centrifugare directa pe grila de ME
Microscopie electronica
Coloratie negativa

vaccinia
Microscopie electronica
Coloratie negativa

variola
Electron micrographs of hepatitis C virus purified from cell culture.
Scale bar is 50 nanometers.
Detectia directa a
componentelor
virale
Acid nucleic
Antigene virale
Detectia directa a acidului
nucleic viral - PCR
Thermocycler
Detectia directa a antigenelor
virale ELISA (test imuno-enzimatic)
sandwich ELISA. (1) Plate is coated with a capture antibody; (2) sample is added,
and any antigen present binds to capture antibody; (3) detecting antibody is added,
and binds to antigen; (4) enzyme-linked secondary antibody is added, and binds to
detecting antibody; (5) substrate is added, and is converted by enzyme to
detectable form.
Detectia directa a antigenelor virale
reactia de imunofluorescenta (IF)
(test rapid de detectie a Ag)
Identificarea virusurilor prin neutralizarea
efectului citopatogen

RSN

Reactia de Seroneutralizare
- Identificarea Enterovirusurilor
Identificarea virusurilor prin inhibarea efectului viral

HA - hemaglutinina
RHAI
NA - neuraminidaza

Nucleocapsida helicoidala
ARNss
anvelopa
transcriptaza

Matrice

Reactia de Hemaglutinoinhibare
-Identificarea virusurilor gripale
 DIRECIILE DIAGNOSTICULUI
VIRUSOLOGIC
1. Izolarea viral

2. Demonstrarea prezenei
virusului / componentelor sale

3. Diagnosticul serologic
Diagnosticul serologic in infectiile virale

Raspuns
imun
Raspuns
secundar
imun
primar
Diagnosticul serologic
pe prob unic de ser - anticorpi antivirali de tip
IgM (rspunsul imun primar) - ELISA de captur
pe probe pereche de ser
- proba I - la debut
- proba II - la 2-3 sptmni
ELISA tehnica indirect sau de competiie

seroconversia
In proba I nu exist anticorpi
In proba II apar anticorpi specifici virusului de detectat
creterea semnificativ a titrului de anticorpi ntre
cele 2 probe (de minim 4 ori)
Etapele diagnosticului virusologic
Izolarea viral
Diagnosticul
Dem. virusului/ serologic
componente
Direciile diagnosticului virusologic

Transportul produselor patologice

Recoltarea produsului patologic

Suspiciunea de viroz