Sunteți pe pagina 1din 17

Electroforeza = metoda ce se bazeaza pe

migrarea componentilor dintr-o proba, supusa


unei diferente de potential, in camp electric
intr-o solutie sau printr-un suport solid poros
(hartie cromatografica, gel), separarea
explicandu-se prin vitezele de migrare
diferite ale componentilor incarcati electric
pozitiv sau negativ, care sunt atrasi de polii
opusi ai campului electric, proportional cu
natura, marimea si sarcina lor.

1
Mobilitatea electroforetica
Reprezinta un termen al vitezei cu care se deplaseaza
particulele purtatoare de sarcini electrice, in camp
electric in conditiile experimentale date (ve = 0 E)

In care: q
q = sarcina speciei ionice; 0
6r
E = intensitate campului electric (V/m);
0 = mobilitatea electroforetica (m2/V/s).

2
Mobilitatea electroforetica variaza functie
de :
Factori ce depind de Factori ce depind de
particula: solutia de electrolit:
marimea
natura natura
forma concentratia
sarcina forta ionica
gradul de hidratare pH-ul
si disociere vascozitatea
coeficientul de
temperatura
frecare

3
Tipuri de electroforeza
Electroforeza de frontiera
Electroforeza zonala sau pe suport
Utilizata in principal pentru unele studii
fundamentale privitoare la natura si
puritatea proteinelor
Principiu: migrarea proteinelor intr-o solutie
tampon de electroliti, intr-un aparat cu o celula
in forma de U din sticla transparenta astfel
incat sa se poata detecta spectrofotometric
migrarea proteinelor

4
Factori care influenteaza
electroforeza
Natura moleculelor pH - ul
separate In cazul acizilor si bazelor
Marimea moleculelor tari (electroliti tari) pH-ul
Mobilitatea nu influenteaza migrarea
Natura solutiei
Natura
natura sarurilor
Sarcina natura acizilor
natura bazelor
influenteaza
natura altor substante

5
Electroforeza capilara
Cea mai noua si mai utilizata tehnica
electroforetica utilizata pentru separarea speciilor
incarcate cu sarcini electrice
Pentru efectuarea separarilor se efectueaza un
montaj automatizat ale carui elemente principale
sunt:
tub capilar
sistem de introducere a probei
sistem de detectie
electrozi de platina
sursa de alimentare cu curent

6
Electroforeza capilara
Detector UV

Tubul din silice : capilarul


L = 50 cm = 0,05 mm

Anod Catod
(Pt) Lampa (Pt)
(D 2)

Solutia conductoare
+ molecula gazda

30 kV
100 A

7
Fluxul electroosmotic

La pH > 4 peretele capilarului de cuart se


incarca negativ acumularea de sarcini pozitive
la suprafata fluxului de lichid de electroliti, in
contact cu peretele capilarei = fluxul
electroosmotic
fluxul electroosmotic se deplaseaza in directia
catodica

8
Peretetle
capilarului

Stratul
Stratul
de difuzie
rigid
Potentialul zeta generat la interfata capilara electrolit suport
9
Fluxul electroosmotic este influentat
de:
Compozitia solutiei de electroliti
pH
forta ionica
vascozitatea
forta dielectrica
Temperatura
Introducerea unor aditivi

10
Analitii purtatori de sarcini sau ionizati
sufera doua deplasari care se insumeaza
sau se exercita in sens contrar:
o deplasare datorita mobilitatii lor electroforetice
o deplasare datorita mobilitatii fluxului
electroosmotic

OBS: analitii neincarcati cu sarcina se


deplaseaza doar sub actiunea fluxului
electroosmotic

11
Viteza de deplasare electroosmotica
(vEOF)
vEOF este dependenta de de mobilitatea electroosmotica
a ionilor din electrolitul suport, de potentialul zeta
generat la interfata capilara electrolit suport, de
constanta dielectrica , de vascozitatea electrolitului
suport si de campul aplicat E:
vEOF = ( / )E
Mobilitatea electroosmotica EOF = /

12
Miscarea unui analit incarcat pozitiv
Uep= mobilitatea electroforetica

+ + - UR = mobilitatea rezultanta
Ueo = mobilitatea electroosmotica

Miscarea unui analit neutru

+ -

Miscarea unui analit incarcat negativ

+ - -
13
Separarea unui amestec de cationi, anioni si compusi
neutrii

+
+ -
-

cationi
anioni
neutrii
detectorului
Raspunsul

14
Timpul de migrare
Avantajele electroforezei capilare:
timpi de analiza relativ scurti;
volume mici de proba;
cantitati mici de solventi (tampon);
posibilitatea automatizarii intregului ciclu de
analiza;
poate opera atat in medii apoase cat si in medii
neapoase;
detectia se face in capilar (UV);
sensibilitate inalta.

15
Separarea unui amestec de cationi

16
Separarea unui amestec de compusi
aromatici

17