Mtodos de

medicin
analtica en
Bioqumica
Clnica

Lic. Juliana Garnique

Bioqumica
Ciencia que
estudia las bases
qumicas de la
vida

Pilar fundamental de la biotecnologa, y se ha

consolidado como una disciplina esencial para
abordar los grandes problemas y enfermedades
actuales y del futuro
Utilidad
Diagnstico
Valoracin del pronstico y del
tratamiento
Investigacin
Ensayos clnicos de frmacos.
Fase Analtica
Comprende:

Tcnicas analticas

Procedimientos de anlisis basados en

el comportamiento de la materia.

Espectrometra Electroforesis
Cromatografa Electroqumica
Qumica seca Inmunoensayos
 Mtodos Analticos

Son aplicaciones de las tcnicas, con

parmetros y protocolos concretos.

Caractersticas analticas: punto final, cintico,

colorimtrico, enzimtico, mtodos de curva de
calibracin.

Reactivos usados: glucosa oxidasa, verde de

bromocresol
Fase Post-analtica
Desde la obtencin de resultados hasta
que el clnico solicitante tiene el informe.

Fase decisiva para cumplir una calidad

total.
 Validacin de resultados

Valoracin tcnica: es la aceptacin de los

resultados obtenidos por las distintas
tcnicas.
Valoracin clnica: los resultados deben ser
coherentes con la clnica.

Informe de resultados
Tiempo de respuesta
Teora de los valores de referencia

Variaciones analticas
Variaciones extraanalticas
MTODOS DE ANLISIS
 Mtodo qumico

Se emplean en la determinacin
de una molcula o de un
elemento determinado, que se
halla inmerso en una mezcla
con otras molculas o
elementos

Los bioelementos poseen una

Requieren de la
capacidad para emitir y absorber luz
utilizacin de alguna
de una determinada longitud, siendo
caracterstica
la longitud de onda de emisin
diferencial
caracterstica de cada elemento.
Mtodos fsicos
Compuestos
bioqumicos, es que
son muy parecidos en solubilidad
cuanto a propiedades
qumicas
polaridad

Requieren de un
procedimiento previo punto isoelctrico

Basados en las propiedades

Mtodos separativos
fsicas de los compuestos.
Mtodos enzimticos
La mayora de las veces las tcnicas
separativas no permiten determinar
la presencia de una determinada
protena en presencia de otras

Las enzimas son especficas de reaccin y sustrato, y los

elementos que intervienen en la reaccin pueden
determinarse, bien porque presentan una caracterstica que
puede medirse o bien porque pueden determinarse por
medios qumicos.
 Mtodos inmunolgicos

No todas la protenas poseen

actividad enzimtica o una
funcin que pudiera medirse

Embargo la gran diferencia entre

protenas radica en su gran y
nica configuracin
tridimensional
Mtodos de hibridacin

cidos nucleicos son difciles de

determinar Las diferencias en tamao
de las especies de ARN o de
fragmento de ADN no lo permiten

+
Secuencia de nucletidos.
Mtodo para el
reconocimiento de
una secuencia
especfica.
Este mtodo emplea sondas
que son especficas y
complementarias a
determinada zona de la
cadena de ADN o ARN
dependiendo lo que se
quiera determinar. Es
importante recordar que es
necesario un sistema de
marcaje que permita
cuantificar la cantidad de
cido nucleico presente, ya
que la hibridacin slo
induce la especificidad del
mtodo.
Mtodos Fotomtricos
Espectro Electromagntico: cubre un
amplio intervalo de E radiante, desde
los rayos de longitud de onda corta
hasta las ondas de radio, de longitud de
onda larga.

Regin Ultravioleta: = 10-380 nm

Regin Visible: = 380-780 nm
Regin Infrarroja: = 780-30.000 nm
 Ley de Beer:

LaAbsorbancia de una solucin es

directamente proporcional ala
concentracin y a la longitud del paso de la
luz.
 Espectrofotmetro

Fotmetro o Colormetro: se caracterizan

porque utilizan filtros que solo permiten el
paso de una determinada longitud de onda.

Espectrofotmetros: utilizan cromadores. Con

ellos se obtiene un haz de luz monocromtico
cuya longitud de onda se vara a voluntad.
 Fluorimetra o Fluorimetra

Luminiscencia
Fluorescencia

Tiene una alta sensibilidad de 100 a 1000

veces mas sensibles q tcnicas colorimtricas
normales.

FLUOROINMUNOANLISIS: son anticuerpos marcados

con una sustancia fluorescente, especficos de la
sustancia que se va a estudiar.

DETERMINACIN de vitaminas, frmacos, algunas

enzimas, etc.
 Fotometra de llama

La intensidad luminosa es directamente

proporcional al nmero de tomos que
emiten energa, que a su vez es directamente
proporcional a la concentracin del in de la
muestra.

Se utiliza para la determinacin de Sodio,

Litio y Potasio (Na, Li, k) en lquidos
biolgicos.
 Espectrofotometra de absorcin atmica

Se utiliza para la determinacin de Calcio,

Magnesio, Cobre, Zinc, Plomo y otros metales

Nefelometra y turbidimetra

Cuando un haz de luz choca contra una

partcula en suspensin sufre una serie de
fenmenos:

- dispersin de la luz
- reflexin
- absorcin
- transmisin
 LaDISPERSIN de la luz depende de
varios factores, que son:

Tamao y peso molecular de las partculas

Longitud de onda de la luz incidente
Distancia del detector a la cubeta
Concentracin de partculas
Mtodos para medir la []
de una sustancia por
Espectrofotometra
 Punto final o de equilibrio

Se incuba la muestra y el reactivo durante un

tiempo determinado y a una temperatura
determinada para que se complete totalmente
la reaccin, de tal forma que la sustancia que
buscamos debe consumirse totalmente. Si no
fuera as y quedase parte de la sustancia sin
consumir, al medir el producto, estaramos
midiendo menos cantidad de la que realmente
hay. Por lo tanto se mide al final de un tiempo
fijo de incubacin.
 Mtodos cinticos

En ellos se mide la velocidad de la reaccin

mediante la medida de la variacin de la
Absorbancia en el tiempo y esto se relaciona
con la concentracin. Es una medicin
continua, a diferencia de la del punto final, se
mide en tiempos regulares. Se puede medir la
cantidad de sustrato no transformado la
cantidad de producto formado
Lectur
a
Bicromtico
Esta tcnica est basada en la premisa que aunque un
compuesto puede dar una interferencia espectral, la
absorbancia mxima del interferente ser diferente de
la de la reaccin analtica verdadera

El uso de este procedimiento permite

tambin que cada muestra sea
utilizada como su propio blanco para
el color endgeno.
Esta tcnica involucra la medicin de la absorbancia de una mezcla
de reaccin a dos longitudes de onda diferentes simultneamente.
Estas son:

- la longitud de onda principal (1)

- la longitud de onda cercana 2 .

1 es la longitud de onda a la cual el cromgeno tiene la mxima

absorcin. En 2 hay un mnimo de absorcin del cromgeno. Como
la reaccin es monitoreada simultneamente a dos longitudes de
onda, sta es conocida como anlisis bicromtico.
Otro mtodo similar para la correccin de la
interferencia de fondo es la medicin de la
absorbancia a la longitud de onda primaria Amax
y a dos longitudes de onda adicional,
generalmente equidistante del pico, A1 y A2. Las
lecturas de absorbancia a estas dos ltimas
longitudes de onda son promediadas para dar la
absorbancia de fondo promedio en la muestra.
Esta tcnica para la correccin de la absorbancia
de fondo de las sustancias interferentes es
conocida como la correccin de Allen.
Curva de calibracin
Enrelacin a los equipos automatizados
y su correcto funcionamiento para
realizar una lectura hay que tener bien
en claro que no se puede procesar un
mtodo si no ha programado
previamente el equipo analizador
Calibracin por curva-Calibracin por grafica analtica

Se preparan varias soluciones estndares que contienen concentraciones

conocidas del analito, dichas soluciones deben cubrir el intervalo de
concentraciones de inters

As como tener una composicin matricial, tan parecida como se pueda a la de

las soluciones de la muestra

Si se obtiene una grafica no lineal, como ocurre con frecuencia, puede usarse
equipo electrnico o programas computacionales para compensar la curvatura y
producir una salida que sea una funcin lineal de la concentracin, en regiones no
lineales el numero de soluciones estndares analizadas debe aumentarse para
obtener la exactitud del anlisis de las muestras problema
Calibracin por el mtodo de adiciones estndares:

La respuesta del
Cuando es imposible instrumento debe ser
suprimir interferencias funcin lineal de la
fsicas o qumicas en la concentracin del analito,
matriz de la muestra en el intervalo de
concentraciones y tambin
debe tener una ordenada al
origen en cero (seal cero
para concentracin cero).

Una pequea cantidad de solucin del analito de

concentracin conocida se aade a una alcuota de una
solucin de muestra analizada previamente y el anlisis se
repite usando reactivos, parmetros del instrumento y
procedimientos idnticos.
 Calibracin por el Mtodo
del Estndar Interno
Una cantidad fija de
Se emplea un una sustancia pura
estndar interno se aade tanto a las El cociente de
para minimizar las soluciones muestra respuestas ( del
diferencias en las como a las analito al estndar
propiedades fsicas soluciones interno) depende
de un conjunto de estndares, se solamente de la
soluciones muestra determinan luego las concentracin del
que contiene el respuestas del analito
mismo analito analito y del
estndar interno

Si se controlan los parmetros que afectan las respuestas medidas, la respuesta

de la lnea del estndar interno ser constante, por supuesto que la
concentracin del estndar interno no es fija, sin embargo, si varia uno o mas
de los parmetros que afectan las respuestas medidas, dichas respuestas del
analito y del estndar interno deben ser afectada por igual.
Gracias