Sunteți pe pagina 1din 52

CITOSCHELETUL

CITOSCHELETUL
DEFINIIE
Reea complex de filamente proteice
rspndite n toat citoplasma:
microfilamentele de actin (MFA),
filamentele intermediare (FI) i microtubulii
(MT)
Structur dinamic care rspunde mediului
nconjurtor celulei
Ofer posibilitatea deplasrii organitelor
citoplasmatice
Favorizeaz segregarea cromozomilor
Responsabil de contracia muscular
CITOSCHELETUL

Comparat nu de mult cu scheletul osos


uman, comparaie care va fi completat
ulterior prin includerea proprietilor
dinamice ale citoscheletului
O funcie foarte importanta a citoscheletului
este cea de meninere a volumului celular n
limite normale, chiar n absena peretelui
celular.
Rol de compartimentare celular
Rol n transportul intracelular
CELULA EUCARIOT I PROCARIOT
CITOSCHELETUL ASPECT GENERAL
MICROFILAMENTELE DE ACTIN (MFA)
Provin din polimerizarea actinei G
Exist trei tipuri de actin: n fibrele musculare striate i
netede, i n celulele non-musculare
Forma de stocaj este forma G, protein cu GM 42 kDa, cu
un acid aminat rar, 3-metil-histidina
Polimerizerea actinei G formeaz actina F, un filament cu
diametrul de 7 nm
In vitro, polimerizarea poate fi iniiat prin adugarea de
sruri la o soluie de actin G
Polimerizarea are trei faze: faza de lag , prin agregarea
lent a monomerilor de actin G, faza de elongare a
filamentului n formare, faza de echilibru cand nu se mai
produc modificri la nivelul filamentelor, chiar dac
monomerii de actin G polimerizeaz i depolimerizeaz la
Polimerizarea i depolimerizarea actinei F
numai n celulele non-musculare
Polimerizarea depinde de prezena i
concentraia ionilor de Mg++ i K+, de ATP i
de actina G
Debutul se produce printr-o faz de nucleaie,
cnd trei molecule de actin se asambleaz
pentru a forma un trimer
Urmeaz asocierea reversibil a moleculelor
de actin G
Nucleaia, polimerizarea, poziia i lungimea
filamentelor de actin depind de o serie de
proteine de legtur i de hidroliza
ATP-ului
MICROFILAMENTELE DE ACTIN
(MFA)
Citochalasinele, extracte de ciuperci
microscopice, sunt inhibitori ai polimerizrii
actinei G
Phaloidele (Amanita phalloides) sunt
inhibitori ai depolimerizrii i provoac
intoxicaii mortale
Microfilamentele au o extremitate pozitiv a
crei cretere este mai rapid dect extremitatea
negativ.
Diferena vitezei de cretere depinde de
schimbarea conformaiei moleculei de actin
G
MFA FORMA CELULAR I FAGOCITOZ
MFA
MFA CELULELOR NON-
MUSCULARE
Instabilitate dinamic i durat scurt de via
Actina G - polimerizare i depolimerizare
Actina F - reticulare i de dereticulare,
fasciculat i defasciculat
Cea mai bine reprezentat protein (5% din
totalul proteinelor) n celulele eucariote
Repartizat n ntreaga citoplasm, mai ales
perinuclear, dispoziie sub form de co
La periferia celulei animale, sub membrana
plasmatic, dispunere n fascicole sau n reele
tridimensionale, formnd cortexul celular
PROTEINELE DE LEGTUR ALE
ACTINEI
ABP - actin binding protein - se asociaz
actinei G sau MFA
Intervenind n
polimerizarea/depolimerizarea MFA, n
stabilizare, organizare n fascicole/reea,
fragmentare, fixare la faa intern a
membranei plasmatice
n asociere cu MFA, constituie un
citoschelet cortical (forma celulei )
PROTEINELE DE LEGTUR ALE ACTINEI

Proteine de sechestrare de monomeri


(profilin, depactin) regleaz
polimerizarea actinei G
Proteine de blocaj ale extremitilor -
controleaz lungimea MFA
Proteine de stabilizare (tropomiozin) care
menin structura MFA
Tropomiozina are numeroase situsuri
de fixare la actin
CITOSCHELETUL I ADAPTRI ALE
SUPRAFEEI CELULARE
CITOSCHELETUL I FORMA CELULAR
FASCICULE CONTRACTILE
Sunt constituite din MFA asociate cu molecule de
miozin II
Se inser de membrana plasmatic n puncte focale de
contact (plac de adezivitate, plac de aderen)
conin integrine
Constituie inele contractile
Se asociaz cu jonciuni intermediare (centuri de
adezivitate)
n fasciculele contractile, miofilamentele de actin se
gsesc la distan de 30-60 nm unele de altele
Molecule de miozin II au o coad i dou capete
globulare
Favorizeaz glisarea celor doua filamente de actin,
determinnd contracie fr modificarea lungimii
MFA I PUNCTELE FOCALE DE CONTACT
- ancorarea celulelor la substrat
- controlul locomoiei celulare
- controlul formei celulare
- stabilitatea legturii intercelulare
- rspunsul citoplasmatic la factorii de
cretere sau la ali stimuli.
Fasciculele contractile se pot organiza
n inele contractile sau centuri de
adezivitate
FASCICULELE STRNSE

MFA paralele, legate prin proteine de


asociere (fimbrina sau vilina), la
distan de 10-20 nm unele de altele
Aceste fascicule nu sunt contractile
Expansiunile filiforme (filopode,
lamelipode) - n deplasarea
fibroblatilor sau n microviloziti
DEPLASAREA ORGANITELOR
Miozina este una dintre cele mai abundente proteine din
organism. Exist n jur de paisprezece clase de
miozine. Clasificarea se face in funcie de domeniile
capetelor miozinice.
Structural, moleculele de miozin au fost mprite n dou
grupe mari: miozine convenionale (tip II) i
neconvenionale (tip I i tip III-XV)
Miozina tip II este un dimer, format din dou lanuri grele i
dou perechi de lanuri uoare.
Miozina I care are un singur cap i o coad, este
responsabil de micarea de deplasare de-a lungul MFA
Miozina se fixeaz prin coada sa pe organit i prin capul
su de un MFA care este ancorat la membrana plasmatic
Migrarea de la extremitatea negativ la extremitatea
pozitiv a MFA
REELE DE MICROFILAMENTE

Microfilamentele controleaz vscozitatea


citoplasmei organizndu-se n reele
Filamina, un dimer din 2 subuniti de 270
kDa, este un factor gelificator al citoplasmei
Gelsolina, n prezena calciului,
fragmenteaz microfilamentele i
transform un gel citoplasmatic ntr-un sol
(rol fundamental n exocitoz sau
endocitoz)
MICROFILAMENTELE I FORMA CELULAR
Hematia - celul rotund cu 2 fee biconcave
Interaciunea dintre spectrin i
microfilamente, proteinele de legtur sau
proteinele membranare
Proteina de banda 4.1 conecteaz
complexele joncionale cu domeniile
transmembranare ale glicoforinelor
Ankrina, care este principala protein de
legtur a eritrocitelor, leag tetramerii
spectrinei de proteina membranar de
band 3
MFA I MIOZINA CELULELOR MUSCULARE
STRIATE
n FMS actina F se gsete sub form
stabil n structuri contractile,
miofibrilele
Miofibrilele - structuri difereniate, asocierea
MFA i miozin
Formate din filamente de titin care menin
miofilamentele de miozin pe loc i din
filamente de nebulin care regleaz
asamblarea microfilamentelor de actin
SARCOMERELE
FMS are mai multe mii de miofibrile cu
diametrul ntre 1 i 2 m, care parcurg
longitudinal fibra muscular de la un capt
la altul, desprite de o cantitate sczut de
sarcoplasm
Miofibrilele constituie partea esenial a
muchiului, aproximativ 100 de milioane
/cm de muchi uman
INTERACIUNEA MFA MIOZIN 1
SARCOMERELE
Structur heterogen (alternane de zone sau discuri)
- discurile A (anizotrope n lumin polarizat) ntunecate, cu
o lungime de 1,5 m: ele sunt mprite n dou semidiscuri
printr-o zon clar H (Hensen) care prezint n mijloc o linie
ntunecat, linia M (Mittelmembran)
- discurile I (Isotrope), cu o grosime de 0,8 m, prezentnd
pe mijloc o striaie Z (Zwichenscheibe) - desmin
Fiecare segment de miofibril cuprins ntre dou striaii Z
constituie un sarcomer.
Un sarcomer are dou semidiscuri I i un disc A.
Repetarea acestor uniti dispuse cap la cap constituie o
miofibril.
Sarcomerele tuturor miofibrilelor unei fibre sunt situate la
acelai nivel -aspect striat miocitelor
ORGANIZAREA MIOFILAMENTELOR N
MIOFIBRILE
Miofibrilele asocierea a dou tipuri principale
de microfilamente
Filamentele de miozin (miozina II) au un
diametru de 10 nm i o lungime de 1,5 m i
extremiti conice
MFA au un diametru de 5-7 nm i n jur de
1 lungime i se inser pe striaiile Z
Aceste dou tipuri principale de miofilamente
se asociaz cu titina care este una dintre
cele mai voluminoase molecule fibrilare
cunoscute astzi (3000 kDa) i cu filamente
de nebulin
ORGANIZAREA MIOFILAMENTELOR
N MIOFIBRILE
Filamentele de miozin i MFA sunt paralele ntre
ele i longitudinale
Filamentele de miozin ocup n totalitate discul A
MFA din fiecare sarcomer pleac de la striaia Z, la
marginea discului H.
Semidiscurile I ale fiecrui sarcomer nu conin
dect MFA
Semidiscurile A situate de o parte i de alta a
discului H conine att microfilamente de actin
ct i filamente de miozin.
Discul H are n partea median filament de
miozin, uor umflat la mijloc.
Linia M corespunde ansamblului tuturor acestor
umflturi ale miozinei.
FILAMENTELE DE MIOZIN II
Sunt bipolare, GM de 450 kDa i este alctuit din 6 lanuri
polipeptidice : 2 lanuri grele i 2 perechi de lanuri uoare
Lanurile grele sunt identice o regiune helicoidal cu o
lungime de 30 nm, numit coad i o regiune globular
carboxi-terminal, cu diametrul de 4 nm numit cap.
Miozina poate fi scindat la nivelul punctelor de flexiune
sub aciunea unor enzime proteolitice
Chimiotripsina scindeaz miozina n dou domenii
Primul domeniu, meromiozina grea (HMM), conine capul
bilobat i un segment din coada lanurilor grele,
Al doilea domeniu, meromiozina uoar (LMM), cuprinde
segmentul aminoterminal al cozii
Prin tratarea domeniului HMM cu papain, segmentul de
coad este eliberat i rezult fragmentele S1, ce conin
cte un cap globular i perechea de lanuri asociate
acestuia.
Fragmentele S1 prezint activitate ATP-azic
INTERACIUNEA ACTIN-MIOZIN
n procesul de micare, energia necesar acestui proces, este
dat de legatura dintre miozin i hidroliza ATP. La rndul ei,
miozina este activat de actin.
Interactiunea dintre o molecul de miozin i un filament de
actin, se desfoar n mai multe faze:
1. faza iniial cnd miozina este cuplat cu actina, iar situsul
pentru cuplarea cu ATP, de pe miozin este gol. Asa se intmpla
si in cazul rigiditii cadaverice (rigor mortis), cnd muchiul
devine rigid, fiind deposedat de ATP, iar moleculele de miozin
sunt toate cuplate cu actina.
In prima faz a ciclului contraciei, o molecul de ATP, se leag
de situsul specific de pe miozin, iar situsul de cuplare al
actinei se desface.
Miozina se desprinde de actin, ATP-ul este hidrolizat. Apoi,
situsul de legare pentru ATP se inchide, determinnd cudarea
capului miozinei.
Deja, poate ncepe un nou proces de legare a miozinei cu un
nou monomer din cadrul filamentului de actin.
INTERACIUNEA ACTIN-MIOZIN

2. Faza a doua a ciclului contraciei, se


caracterizeaz prin legarea miozinei de un
nou filament de actin,
3. n faza a treia a contraciei, se elibereaz
ADP i se reorienteaz capul miozinic, care
revine la forma iniial de rigor mortis-like.
Capul miozinic isi modific din nou
comformaia determinnd domeniile
gtului i cozii s se deplasezespre
captul + al filamentului de actin.
Miozinele se deplaseaz de-a lungul
filamentelor de actin
Contracia muscular
Patru proteine regleaz contracia la nivelul fibrei
musculare: tropomiozina, troponina C, troponina I,
troponina T, in prezena Ca2+
Tropomiozina este format din subunitai care
formeaz un lan continuu de-a lungul filamentului
de actin, fiecare tropomiozin avnd apte
situsuri de legare la actin.
Troponina T, se leaga la capatul terminal al
tropomiozinei i inlesneste legarea troponinelor I i
C, la aceeai tropomiozin.
Troponina I leaga actina la fel ca i troponina T
Troponina C, leaga calciul i controleaz poziia
tropomiozinei pe filamentul de actin.
FILAMENTELE INTERMEDIARE (FI)
Molecule fibrilare stabile, cu un diametru de 8-10
nm, intermediar ntre cel al MFA i cel al MT, n
nucleoplasma i citoplasma tuturor celulelor
animale
n celulele epiteliale se dispun n jurul nucleului i
sub membrana plasmatic.
Se inser de proteinele membranare cu ajutorul
proteinelor extrinseci citoplasmatice
n celulele epiteliale se fixeaz de placa
citoplasmatic a desmozomilor i au rol mecanic
n axonii celulelor nervoase formeaz o armtur
In FMS unific faa intern a membranei cu
miofibrilele - transmiterea forei n cursul
contraciei
FILAMENTELE INTERMEDIARE (FI)
FI (polimeri stabili) pot fi:
Homopolimeri : vimentina, desmina, GFA sau
GFAP, periferina
Heteropolimeri: citocheratinele,
neurofilamentele.
Unitatea de baz - un monomer cu o parte
central (identic pentru mai multe tipuri) i
dou extremiti carboxy- i amino-terminale
diferite
Partea central cuprinde 310 resturi de acizi
aminai dispui n dublu helix cu trei regiuni
n care dispoziia acestor reziduuri nu este
helicoidal
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul I i tipul II - cheratinele
Tipul I - cheratinelor acide
Tipul II familiile de cheratine neutre i bazice
Proteine fibrilare produse de cheratinocite sau celule
epiteliale
MARKER EPITELIAL CITOPLASMATIC
n cheratinocite sub form de fascicule ancorate n plcile
dense desmozomale
Citocheratinele CK5 i CK14 - stratul bazal
CK1, CK6, CK10, CK16, - corpul mucos Malpighi
CK9 - stratul granular.
n epiderm CK unesc desmozomii ntre ei
CK se inser de molecule de pacoglobulin - o plac dens
vecin i paralel cu membrana plasmatic
Moleculele de pacoglobulin se lipesc de caderinele
desmozomale transmembranare
FI CITOCHERATINA
IMUNOFLUORESCEN
FI CITOCHERATINA
IMUNOHISTOCHIMIE (IHC)
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul III - Vimentina, Desmina, GFAP i Periferina
Vimentina (54 kDa) - MARKER al celulelor
mezenchimatoase
Seroasa pleural, pericardic, peritoneal
n celulele endoteliale vasculare
n fibroblati, fibrocite, condrocite
n cursul embriogenezei, neuroblatii (neuroni
imaturi) conin VIM
Absena vimentinei n citoscheletul celulelor su
vimentin modific morfologia nucleului
n adipocite VIM formeaz un fel de cuc n jurul
grsimii
Menine pe loc nucleul i ansamblul organitelor
celulare
VIMENTINA - IHC
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul III - Vimentina, Desmina, Proteina fibrilar
glial acid(GFAP) i Periferina

Desmina (53 kDa) MARKER al fibrelor musculare


netede sau striate
FMS in cursul miogenezei sau n cursul regenerrii conin
o mare cantitate de DES
n FMS adulte DES leag striaiile Z vecine unele de
altele i de membrana plasmatic
GFAP (50 kDa) MARKER al celulelor de origine
neuroectodermic -nevroglia sistemului nervos central
(astrocite i microglie) i a sistemului nervos periferic
(celule Schwann ale fibrelor amielinice)
Periferina (57 kDa) MARKER al neuronilor n cursul
dezvoltrii embrionare i n cursul regenerrii
n esuturile adulte se gsete n cantitate mai mic
PER este indispensabil regenerrii neuronale
FI DESMINA IMUNOFLUORESCEN I IHC
GFAP - IMUNOFLURESCEN
GFAP - IHC
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul IV - neurofilamentele

NF - localizate n neuroni i se asociaz MT


axonilor
3 tipuri: NF-L (light), NF-M (medium), NF-H (heavy)
Reprezint 25% dintre proteinele axonului i
intervin mpreun cu neurotubulii n transportul
intra-axonal (flux axonal)
Menin rigiditii i rezistenei axonului precum
Prin fosforilarea NF-H i a NF-M se adaug la
microfilamente grupri fosfat (sarcina negativ)
Forele de respingere, generate prin creterea
sarcinilor negative, asigur un diametru axonal
constant.
NF - IMUNOFLUORESCEN
NF Schem i IHC
FILAMENTELE INTERMEDIARE
Tipul V - laminine nucleare
Lamininele constituie citoscheletul nucleului
Se cunosc 2 tipuri: laminine de tip I (cu subtipurile A i
C), laminine de tip II (cu subtipurile B1, B2)
Formeaz o reea tridimensional care acoper
complet, cu excepia porilor, faa intern a nveliului
nuclear
Microfilamentele de tip A i C menin forma nucleului i
servesc drept loc de ancorare pentru moleculele de
ADN
Laminina B nu are afinitate pentru nucleotide
Intervin n mitoz - lamininele A i C se fixeaz pe
siturile specifice de legtur ale cromozomilor mitotici
Lamininele intervin n momentul reconstruciei
nucleului i al nveliului nuclear
Se gsesc n toate celule
MICROTUBULII (MT)
MT sunt polimeri instabili lungi i rigizi de
heterodimeri - de tubulin
Au o extremitate pozitiv distal (apropiat
de membrana celular) i o extremitate
negativ aproape de centrul celular
Au forma unor tubi cu diametrul n jur de 25
nm, a cror polimerizare i depolimerizare
depind de hidroliza GTP
Se gsesc la vertebratele superioare, n
toate tipurile celulare (cu excepia hematiei)
Sunt mai numeroi n neuronii cerebrali
unde reprezint n jur de 20 % dintre
proteinele solubile.
Filamente intermediare vs Microtubulii
Caracteristici de difereniereale filamentelor
intermediare fa de microtubuli i
microfilamente
Filamentele intermediare sunt stabile, ele
rmnn polimerizate chiar la concentraii
saline mari, sau dup extragere de
detergeni.
Filamentele intermediare sunt structuri
.helicale care vor asambla filamente. Ele nu
pot cupla nucleotide, iar polimerizarea lor
nu depinde de ATP sau GPT
CENTROZOMUL - MTOC
MT se dispun radiar n jurul centrosomului - MTOC
(microtubule organizing center)
MTOC - doi centrioli i o mas granulo-filamentoas
pericentriolar
MT cresc plecnd din centrozom - extremitatea lor
negativ ptrunde n masa pericentriolar, dar nu intr
niciodat n contact cu centriolii.
Organizare molecular a MT
MT au un diametru extern uniform, perete dens,
ngroat, de 5 nm i o cavitate axial de 14 nm lrgime
Lungimea de mai muli microni
MT nu se ramific
Peretele are 13 protofilamente, alternan de tubuline
i de 5 nm diametru, paralele i avnd aceeai
polaritate, legate lateral unele de altele
CICLUL CELULAR MTOC FUSUL DE
DIVIZIUNE
FUNCIILE MICROTUBULILOR

Dinamica mediului extracelular


Deplasarea celulelor
Morfogeneza celulei i meninerea formei celulare
Polaritatea celular
Meninerea structurii membranei celulare
Migrarea vacuolelor de endocitoz
Eliberarea granulelor de secreie
Integritatea aparatului Golgi
Micarea cromozomilor n cursul mitozei i a meiozei
Transportul dirijat al ARN-m n citoplasm
Transportul substanelor i al materialului intracelular
CITOSCHELETUL IMUNOFLUORESCEN