CITOGENETICA CONVENCIONALY FISH

QU ES UN CARIOTIPO?
Es el ordenamiento de los cromosomas de una clula metafsica de
acuerdo a su morfologa, tales como el tamao, la relacin de los
brazos dependiendo de la constriccin primaria, presencia de
constricciones secundarias, etc.
Es caracterstico de cada especie, al igual que el nmero de
cromosomas; el ser humano tiene 46 cromosomas en el ncleo de cada
clula, organizados en 22 pares autosmicos y 1 par sexual (hombre XY
y mujer XX).
 CITOGENETICA
Es el estudio, dentro del
campo de la gentica, de los
cromosomas, su estructura,
su herencia y del lugar donde
se encuentra

CITOGENETICA
CONVENCIONAL CITOGENETICA MOLECULAR

BANDAS Q FISH CLASICO

BANDAS R
BANDAS G
M-FISH
BANDAS C SKY
BANDAS NOR CGT
BANDAS DE ALTA
RESOLUCION
TIPOS DE BANDEO CROMOSOMICOS
BANDAS G
Los cromosomas son sometidos a digestin con la enzima Tripsina de
manera controlada y posteriormente teidos con Giemsa que es un
colorante qumico que se une a ADN apareciendo regiones densamente
teidas y regiones menos densamente teidas.
Se origina un patrn de bandas claras y obscuras tpico de cada
cromosoma.
El nmero de bandas depende del grado de desespirilizacin de los
cromosomas y cada cromosoma tiene un patrn de bandas
caracterstico (, lo que hace posible identificar con mayor precisin las
distintas alteraciones .
Las Bandas G son las que de inicio utilizan la mayora de los
laboratorios.
 Corroborar alteraciones cromosmicas previstas antes por el cuadro
clnico.
Identificar cromosomas o regiones cromosmicas implicadas en
rearreglos evidentes con tincin homohnea para dar un asesoramiento
gentico adecuado.
Detectar aberraciones estructurales que podran pasar
desapercibidas con la tcnica de tincin homognea.
Hacer correlacin cariotipo-fenotipo y delinear nuevos sndromes
cromosmicos.
Localizacin y mapeo de genes en cromosomas y bandas especficas.
 bandas G plidas bandas G oscuras
DNA rico en GC DNA rico en AT
Replicacin temprana Replicacin tarda
Muchos genes Pocos genes
Cariotipo masculino con trisoma 18 (Sndrome de Edward)
con bandas G.
Se muestra al cromosoma 3 con tres diferentes niveles de bandeo.
BANDAS Q
Se tien los cromosomas con un colorante fluorescente (mostaza de Quinacrina) que
se une preferentemente a ADN abundante en AT y se observan mediante
fluorescencia ultravioleta.
Las bandas fluorescentes se corresponden con segmentos obscuros de las bandas G,
es decir se observa el mismo patrn de bandeo .
Debido a la fluorescencia de las bandas en las regiones ricas en adenina-timina, son
tiles en la identificacin de polimorfismos.
Es muy evidente la regin distal de Yq y las regiones centromricas de los
cromosomas 3 y 4, as como los satlites y regiones centromricas de los cromosomas
acrocntricos.
En la prctica actual se utilizan en la identificacin especfica del cromosoma Y y de
polimorfismos.

Un ejemplo es la identificacin de polimorfismos en muestras de lquido amnitico

hemticas con resultado del cariotipo 46,XX. Para descartar si las clulas son del
feto o de la madre, se toma muestra de sangre de la madre y del padre y se comparan
los polimorfismos con los observados en las clulas del lquido amnitico. Si son
clulas fetales deberan tener algn polimorfismo
Fue el primer mtodo de tincin
desarrollado.

Requiere un microscopio de
fluorescencia para su
observacin.

Las bandas Q brillantes

coinciden con las bandas G
oscuras.
BANDAS R
Esta tcnica produce un patrn de bandas opuesto al patrn de bandeo
G o Q as, las bandas que no son bien teidas por el bandeo G o Q , son
intensamente teidas por el proceso de bandeo R.
Para este tipo de bandeo se requiere tratar las muestras a
temperaturas elevadas. La desnaturalizacin selectiva del ADN rico en
AT es teido con naranja de acridina despus del tratamiento con
calor.
El tratamiento con calor induce la desnaturalizacin de protenas
cromosmicas, as como de las secuencias nucleotdicas enriquecidas
con AT, dejando el ADN rico en G C de las bandas R con una
configuracin natural.
Se pueden utilizar para detectar las deleciones de los extremos de los
cromosomas que son bandas brillantes
BANDAS C
La tcnica de Bandas C (Sumner 1972), produce una tincin obscura
selectiva sobre la heterocromatina constitutiva (de aqu el nombre de
bandas C), la cual est localizada en las regiones centromricas de
todos los cromosomas , en los brazos largos de los cromosomas 1, 9 y
16 en las regiones que sigue al centrmero y en la parte distal de los
brazos largos del cromosoma Y.

Un patrn de bandas C ms detallado en cada cromosoma se realiza en

prometafase mittica debido al menor grado de condensacin
cromosmica que existe en esta fase. Un ejemplo de su utilidad es la
identificacin de cromosomas dicntricos y acntricos
BANDAS NOR
Es la tcnica que identifica los organizadores nucleolares (NOR) de los cromosomas que
se localizan en los tallos o constricciones secundarias de los cromosomas acrocntricos

Los organizadores nucleolares forman y mantienen el nucleolo en ncleos en

interfase y consisten en cientos de copias de genes del ARN ribosmico 18S y 28S, se
pueden poner en evidencia con una tcnica de impregnacin de plata que identifica con
precisin los rearreglos de brazos cortos de cromosomas acrocntricos, tambin pueden
identificar cromosomas marcadores
Metafase con bandas NOR donde se muestra los organizadores
nucleolares de dos cromosomas acrocntricos.
BANDAS DE ALTA RESOLUCIN
Permiten identificar alteraciones finas con una resolucin de ms de
550 bandas.
La tcnica consiste en detener las clulas en la profase o prometafase
de la divisin celular, cuando los cromosomas no estn totalmente
condensados.
Para lograrlo, se emplean mtodos de sincronizacin del ciclo celular,
lo ms utilizado es el bloqueo en fase S por medio de un exceso de
timidina o por exposicin a metrotexate y despus de un tiempo se
desbloquea cambiando el medio con el bloqueador por medio fresco que
puede contener BrdU.
El bandeo en profase solo se utiliza cuando se sospecha una anomala
estructural de un cromosoma en particular
 El American College of Medical Genetics (ACMG) recomienda que el
bandeo de alta resolucin debe reservarse para casos donde un
sndrome de microdelecin/microduplicacin, en el cual su
diagnstico generalmente requiere de cromosomas con una
resolucin superior a 550 bandas

Adems, debido a la gran dificultad y cantidad de trabajo que

requiere el anlisis de cromosomas de alta resolucin, en la rutina
el cariotipo de Alta Resolucin de 850 bandas slo debe ser
indicado para mapear regiones cromosmicas especficas
 INTERCAMBIO DE CROMTIDAS HERMANAS
(ICH)
Con esta tcnica se evidencian en cromosomas mitticos los
intercambios que se producen entre las cromtidas de un cromosoma y
que se detectan mediante tincin diferencial de las cromtidas .

Esta tincin diferencial se logra por la incorporacin, durante la

replicacin, de un anlogo de timina del DNA como la
bromodesoxiuridina (BrdU) por dos ciclos celulares consecutivos y
despus se somete a fotodegradacin.

En la prctica mdica esta tcnica se utiliza para valorar intercambios

cromtidas hermanas en el Sndrome de Bloom as como intercambios
adquiridos por exposicin a agentes externos como radiacin,
solventes, sustancias alquilantes, etc
 VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA
CITOGENTICA CONVENCIONAL
Ventajas
1- Permite ver al genoma entero en una sola vez.
2- Conveniente cuando se sospecha una anomala especfica (ejm. Ph en
LMC) y como herramienta de Dx general para detectar el chr adicional.
Anormalidades comnmente vistos en la progresin de la enfermedad de
LMC
Desventajas
1- Detecta anormalidades estructurales grandes ( una banda = 6Mb de
DNA ~ 150 genes ).
2- Necesita mucho trabajo y alta experiencia y habilidades por el
operador
GRACIAS