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Riesgo y contencin

Clasificacin de microorganismos segn la percepcin del riesgo para la poblacin humana.

Microorganismos Nuca se han identificado como agentes causales de la enfermedad en el


hombre
Inofensivos (EFB Clase 1). No ofrecen ninguna amenaza para el medio ambiente.

Pueden causar enfermedad en el hombre y, por lo tanto, pueden


Microorganismos de bajo representar un peligro para los trabajadores de laboratorio.
riesgo (EFB Clase 2). Es poco probable que se propaguen en el medio ambiente.

Microorganismos de Son una amenaza grave para la salud de los trabajadores de laboratorio,
riesgo medio (EFB Clase pero un riesgo comparativamente pequeo para la poblacin en general.
La profilaxis est disponible y el tratamiento es efectivo.
3).

Causan enfermedades graves al hombre, y son un serio peligro para los


Microorganismos de alto trabajadores de laboratorio y la gente en general.
riesgo (EFB Clase 4). No se conoce ningn tratamiento eficaz.

Microorganismos de Son una amenaza ms severa para el medio ambiente que para el
riesgo ambiental. hombre. Pueden ser responsables de grandes prdidas econmicas.
Diseo bsico de un buque

Vidrio Acero
Buenas
caractersticas de
Placa de cabeza que es plana mezcla sin crear
Paredes rectas fuerzas de corte
Base hemisfrica excesivas

Vidrio y acero inoxidable


difieren:

construccin de las paredes del


buque
Existen dos tipos sistemas de buques de vidrio basados en el control de
la temperatura
No
Revestidos
revestidos

Ms caro, un poco ms
Ms barato, ms simple
complejo

El agua realiza la
cinta de calentamiento regulacin de la
envolvente para dar temperatura por la
calor al sistema entrada de calor y la
eliminacin.

La pared del recipiente el recipiente tiene una


est construida de una camisa externa rellena
sola capa de vidrio con agua

En trminos de su
Se requiere entrada / remocin de
Sistema calor funciona de la
estndar misma manera que el
Temperaturas sistema de vidrio
elevadas (+70 C) revestido.
Si el proceso requiere Suministro de agua
un cambio rpido de regulado externamente
temperatura para controlar la
entrada / eliminacin
de calor

Recipiente de acero
inoxidable de pequea escala
RELACION DE ASPECTO
Relacin de aspecto La relacin entre la altura y el
dimetro

1 a 1 en el volumen Da una superficie relativamente


de trabajo para grande a travs de la cual el gas
puede difundir.
cultivo celular

2.2 a 1 en el volumen
de trabajo para
el gas permanece en el lquido ms largo,
dando as ms oportunidad para que sistemas
ocurra la transferencia de oxgeno. microbianos.
Configuracin del buque
Fisiologa de las clulas que se cultivan

Los procesos de cultivo de mamferos


Son tpicamente de mayor
Sistema bacteriano
duracin STR
Son mucho ms sensibles a las Tendr una mezcla de alta
fuerzas de cizallamiento que velocidad utilizando los
Es muy flexible
los sistemas bacterianos. propulsores Rushton y
deflectores, para asegurar el Puede adaptarse a varios tipos de
El motor utilizado para cultivo
impulsar los impulsores ser nivel ms alto posible de
transferencia de oxgeno. La adicin de una cubierta de
un diseo de baja velocidad. papel de aluminio permitir el
cultivo de un organismo sensible a
la luz, mientras que la adicin de
una fuente de luz facilitar el
crecimiento de un organismo que
requiere luz a una longitud de
onda particular.
Configuracin del proceso
Proceso por lotes (Batch Process)

Ms simple Ms barato

El recipiente se prepara
Se inocula
Proceso queda en marcha.
El proceso se detendr cuando se acabe un nutriente clave o se
acumulen productos de desechos metablicos

El sistema requiere:
Oxgeno disuelto
pH
Temperatura
control de mezcla y monitoreo.
Porcesos -Lote alimentado (Fed Batch)

Ms sofisticado

El recipiente se prepara
Se inocula
los nutrientes concentrados se aaden
con el tiempo.

En trminos de hardware, el proceso por lotes


requiere :
Todo lo que un proceso por lotes requiere
junto con una bomba de alimentacin.
Asegurar un mtodo de deteccin de nivel
para asegurarse de que el recipiente nunca
se llena excesivamente.
Perfusin / Quimiostat
Las clulas se eliminan
como parte del proceso.
Quimiostat Organismos de
crecimiento rpido tales
como las bacterias

Las clulas se retienen


dentro del vaso. clulas
de crecimiento ms
lento, como las clulas
Perfusin
de mamfero

Sistema de perfusin
La diferencia clave en un proceso de perfusin es que el medio tambin
se retira del recipiente.

La duracin del proceso puede ser de 1 mes a 3 meses.


Se pueden conseguir densidades de clulas tan altas como 20 x
106 en un proceso de perfusin con viabilidades de + 95%
Las bombas de alimentacin y las bombas de cosecha funcionen
en sincrona.
Accesorios de la placa de cabeza
Funcionalidad

Obtener informacin temperatura, el pH o


del recipiente DO

Dos tareas bsicas:


lquido de correccin
Conseguir que el
de pH, los gases para
material que entra o
mantener DO2,
sale del recipiente
nutrientes

El puerto ms Un mayor
Los puertos grande se lo nmero de No debe estar
miden desde 6 utiliza para puertos demasiado llena
mm hasta 27 conectar el proporciona una ya que es difcil
mm. motor a los mayor de trabajar.
impulsores. versatilidad
Muestreo
Se debe hacer todo el control posible en el recipiente, como es
el caso con pH, DO y temperatura, sin necesidad de extraer una
muestra, ya que cada vez que se toma una muestra el sistema
est expuesto a una posible fuente de contaminacin

Los tipos de pruebas que se llevan a cabo de forma rutinaria


el recuento de clulas
la viabilidad celular
las comprobaciones de los componentes de los medios

Un dispositivo que permite la eliminacin asptica de muestras


es una parte vital de cualquier sistema a pequea escala o a
gran escala.
Un dispositivo de muestreo tpico en un
sistema de vidrio

Consistir en una campana de muestra


externamente en la placa de cabeza y un tubo de
muestra que se encuentra dentro del recipiente.

Se utiliza un trozo de tubo corto para conectar el


tubo de muestra del bioreactor a la campana de
muestra.

Una jeringa se conecta despus de un filtro que


se utiliza para extraer una muestra del
recipiente.

Utilizando una buena tcnica asptica es posible


fijar una botella a la campana de muestra y tomar
una muestra estril del recipiente.
La vlvula 3 se cierra y se retira y se
sustituye por la pieza de carrete.
El sistema ms complejo es requerido
para tomar una muestra
La vlvula 2 se fija entonces a una botella
de muestra a travs de una tubera y el
conjunto se esteriliza en autoclave.

Despus de autoclavar la pieza de carrete


se retira de entre las vlvulas 4 y 2 y se
reemplaza con la vlvula 3.

Las vlvulas 1 y 4 son vlvulas abiertas 2


y 3 se cierran para permitir que el vapor
esterilice la lnea desde el biorreactor a la
botella de muestra o el recipiente.

Despus de la esterilizacin, las vlvulas 1


y 4 se cierran.

A continuacin se abren las vlvulas 2 y 3


y se toma la muestra.

Una vez extrada la muestra, el proceso


de esterilizacin puede repetirse para
proteger al operador.
Rociador de entrada de aire
burbujeando en la fase lquida
Los gases para el mantenimiento del oxgeno
disuelto, y en el caso del cultivo de
mamferos, el pH superponiendo gas en el espacio
superior.
Necesitan ser introducidos

Para minimizar el riesgo de contaminacin, siempre a) Diseo convencional de "L", para


se coloca un filtro antes de la lnea de burbujeo altas velocidades de flujo de gas,
tpicamente hasta 2 volmenes de
recipiente por minuto. El gas se
dispersa a travs de agujeros de
perforacin de precisin en la base de
la tubera y las burbujas de gas
resultantes son impulsadas hacia la
fase lquida por los sistemas de
agitacin y deflexin.
b) Diseo "microporoso", para bajos
caudales de gas , hasta 0.1 volmenes
de recipiente por minuto. El gas es
empujado a travs de una punta fina
sinterizada. Cada poro es aprox. 15
mm y as el gas entra en la fase lquida
Condensador de gas de escape
El gas que no ha sido utilizado por el
proceso saldr del recipiente.
Para evitar la evaporacin excesiva y el
bloqueo del filtro de gas de salida

Condensador

El condensador es de diseo deflector aumentando


as el rea superficial y el retorno de condensado al
recipiente.
Se hace circular agua helada alrededor del
condensador para maximizar la condensacin de la
humedad del gas.
Adiciones de fluidos

Entrada triple Entrada simple Septo

Este puerto proporciona


tres puntos de entrada Mtodo rpido de conseguir
el lquido en un recipiente. El
estrechos en el un lquido necesita ir en septo consiste en un tapn de
recipiente y puede un volumen grande, es goma alojado dentro de un
usarse para lquidos de viscoso o contiene accesorio que pasa a travs de
baja viscosidad partculas. la placa de cabeza. El lquido a
aadir se coloca en una jeringa
requeridos a volmenes con una aguja.
bajos.
Intercambiadores de calor
demasiado fro y las clulas no
crecern a una velocidad ptima y el
proceso tomar ms de lo que debera

Demasiado caliente y las clulas


pueden ser destruidas o inhibidas.

recipiente de vidrio con camisa o un intercambiador


de calor interno

Para aplicaciones bacterianas, un intercambiador de


calor es vital ya que estos procesos tienden a ser
exotrmicos y si se deja sin eliminacin de calor
tienden al sobrecalentamiento.