REACCIONES

INMUNITARIAS

PROF. EDUARDO MUOZ GANOZA

 REACCIONES INMUNITARIAS

El diagnstico clnico no suele ser definitivo.

Las lesiones histolgicas pueden ser indicativas pero
pocas veces son patognomnicas.
A veces, el diagnstico microbiolgico es lento,
complicado o imposible.
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La medicin de las interacciones Ag-Ac con fines diagnsticos se realizan

en 2 vas:
Utilizacin de anticuerpos especficos para detectar el antgeno
(diagnstico directo).
Utilizacin de antgenos especficos para detectar anticuerpos
(diagnstico indirecto).
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La reaccin entre el Ag y el Ac es de naturaleza

fsica y qumica.
La fuerza que los mantiene unidos, son de tipo no
covalente como: atraccin electrosttica, puentes
de hidrgeno y fuerzas de Van der Waals y
exclusin del agua.
La reaccin es reversible.
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Especificidad; capacidad de los anticuerpos de distinguir y reaccionar

con una estructura qumica entre muchas.
Reactividad cruzada: el anticuerpo reacciona con otro antgeno, cuando
ste y el antgeno que estimul la produccin del anticuerpo especfico
comparten un eptopo idntico o muy similar.
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Afinidad de un anticuerpo: fuerza o intensidad de unin entre el

anticuerpo y un determinante antignico.
Avidez de un anticuerpo: fuerza total de la interaccin entre un
anticuerpo y un antgeno.
Ttulo de Anticuerpos: Mxima dilucin a la cual un suero contina siendo
positivo en una prueba serolgica determinada.
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CATEGORIAS DE LAS PRUEBAS INMUNODIAGNOSTICAS

PRUEBAS DE UNION PRIMARIA: Miden la unin propiamente dicha del
antgeno-anticuerpo, utilizando radioistopos, colorantes fluorescentes o
enzimas.
PRUEBAS DE UNION SECUNDARIA: La reaccin antgeno-anticuerpo va
seguida de una segunda reaccin (visualizacin de la reaccin),
precipitacin o aglutinacin.
PRUEBAS DE UNION TERCIARIA: Evalan la capacidad de los
anticuerpos de neutralizar la capacidad biolgica de un antgeno.
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TIPOS DE REACCIN:
I. REACCIN DE PRECIPITACIN :
Cuando se enfrentan antgenos solubles a los anticuerpos especficos
correspondiente.
Se forman complejos Ag-Ac insolubles, si la proporcin de ambos
componentes es la adecuada.
El exceso de uno de los reactantes provoca la disociacin del
inmunocomplejo (resolubilizacin del inmunocomplejo).
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PRECIPITACIN EN MEDIO LQUIDO:
CURVA PARABLICA DE PRECIPITACIN
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La cuantificacin de los agregados se realiza en funcin de la

dispersin de la luz que producen (nefelometra) o de la diferencia
entre la luz incidente y la luz transmitida (turbidimetra).
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PRECIPITACIN EN MEDIO
SEMISLIDO
Oudin mostr que la precipitacin
tambin poda desarrollarse en el
seno de un medio semislido.

Doble Difusin o
Mtodo de Ouchterlony
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INMUNODIFUSION RADIAL (IDR) O TECNICA DE MANCINI

Mtodo de cuantificacin de antgenos.
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INMUNOELECTROFORESIS
La inmunoelectroforesis es una tcnica que se realiza en dos fases. Primero
se separa la mezcla de Ags por electroforesis y posteriormente el antgeno
que se desea detectar se hace reaccionar por doble difusin con un
anticuerpo especfico colocado en la ranura.
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CONTRAINMUNOELECTROFORESIS:
Adaptacin de la Doble Difusin a la accin del campo elctrico.
A un pH seleccionado del agar el antgeno queda cargado negativamente y el
anticuerpo positivamente, al aplicar el campo elctrico antgeno y anticuerpo se
mueven el uno hacia el otro y precipitan formndose lnea de precipitacin entre
los dos pocillos.
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ELECTROINMUNODIFUSION (Tcnica de
Laurell):
Adaptacin de la Inmunodifusin Radial a la
accin del campo elctrico.
A un pH seleccionado se inmoviliza el anticuerpo
(carga neutra) y el antgeno queda cargado.
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II. REACCION DE AGLUTINACIN:

Agrupamiento de antgenos
particulados por la accin de
anticuerpos especficos.
Es semicuantitativa.
Es de mayor sensibilidad.
Fenmeno de zona.
Pueden producirse resultados
falsamente negativos (aglutinacin
incompleta).
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AGLUTINACIN DIRECTA
Utiliza patgenos u otras clulas como antgenos particulados, que forman
agregados mediante su unin por los anticuerpos especficos.
Puede ser semicuantitativa.
Usos: Tipado de grupo sanguneo, serotipado de bacterias, brucelosis,
leishmaniosis, toxoplasmosis, etc.
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AGLUTINACIN INDIRECTA
Transformacin de antgenos solubles en insolubles, mediante su captura
sobre la superficie de clulas (glbulos rojos) o partculas inertes (bentonita,
ltex).

Eritrocitos
con Ag Suero
pegado problema Hemoaglutinacin
 INHIBICIN DE LA HEMAGLUTINACIN

Virus hemoaglutinante
Hemoaglutinacin (HA)

Eritrocitos

Suero problema
Inhibicin de
Hemoaglutinacin (IHA)
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INMUNITARIAS

INMUNOFLUORESCENCIA:
Hace uso de anticuerpos unidos a una
sustancia fluorescente (conjugado) para
demostrar la presencia de una determinada
molcula.
Muy usado el isotiocianato de fluorescena,
rodamina.
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Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ELISA)

Ensayo por Inmunoabsorcin Ligado a Enzimas.
La unin Ag-Ac es revelada utilizando antiglobulinas conjugadas a una
enzima, que al unirse a su sustrato, desencadena una reaccin cromognica
en solucin.
Enzimas ms utilizadas: peroxidasa, fosfatasa alcalina, galactosidasa
 ELISA INDIRECTO (AC)
Reaccin cromognica
Lectura proporcional al anticuerpo
unido.

Incubacin y lavado

Incubacin y lavado

Sensibilizacin y
bloqueo
 ELISA DE EMPAREDADO (AG)

Lectura Reaccin cromognica

proporcional al antgeno
unido.

Incubacin y lavado

Incubacin y lavado

Sensibilizacin y
bloqueo
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RADIOINMUNOANALISIS (RIA)
La unin Ag Ac se revela mediante el marcado de antiglobulinas con
radioistopos (14C, 125Y).
Esta tcnica se utiliza para detectar y cuantificar sustancias que se
encuentran en cantidades muy pequeas y mezcladas con muchas otras. Es
por tanto una tcnica muy sensible y muy especfica. Utilizando anticuerpos
de gran afinidad se pueden detectar hasta picogramos de antgeno.
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Se mezcla una cantidad constante de antgeno marcado radioactivamente y

una cantidad constante de un anticuerpo para ese antgeno
Se produce la reaccin entre antgeno (Ag) y anticuerpo (Ac)
Se separa la fraccin de antgeno que se ha unido de la que permanece libre
(hay varias formas de hacerlo).
Se determina la radioactividad
Si la muestra contiene adems antgeno fro (no marcado), ste competir
con el marcado para unirse al anticuerpo, y se observar un descenso en la
medida de la radioactividad
Este descenso es proporcional a la concentracin de antgeno fro en la
muestra.