CROMATOGRAFIA

METODOS DE ANALISIS
AGROINDUSTRIAL
 ANTECEDENTES
La cromatografa es un poderoso mtodo de separacin
que tiene aplicacin en todas las ramas de la ciencia. La
cromatografa en columna fue inventada y de nominada
asi, a principios del siglo xx por el botnico ruso Mikhail
Tswett. El empleo la tcnica para separar varios
pigmentos vegetales, tales como clorofilas y xantofilas, a
travs de una columna de vidrio rellena con carbonato
de calcio finamente dividido. Las especies separadas
aparecan como bandas coloreadas en la columna, lo que
justifica el nombre que eligi para el mtodo (del griego
CHROMA que significa <<color>>, y GRAPHEIN que
significa <<escribir>>.)
 CONCEPTO
La cromatografa es una tcnica de separacin
extraordinariamente verstil que presenta distintas
variantes. En toda separacin cromatografica hay
TRES fases (slida, liquida o gas) una mvil y otra
estacionaria, que se mueven una con respecto de la
otra manteniendo un contacto intimo.
La muestra se introduce en la fase mvil y los
componentes de la muestra se distribuyen entre la fase
estacionaria y la mvil. Los componentes de la mezcla
a separar se invierten un tiempo diferente en recorrer
cada una de las fases, con lo que se produce la
separacin.
 CONCEPTO
Si un componente esta la mayor parte del
tiempo en la fase mvil el producto se mueve
rpidamente, mientras que si se encuentra la
mayor parte en la fase estacionaria, el
producto queda retenido y su salida es mucho
mas lenta. Como consecuencia de la distinta
movilidad, los componentes de la muestra se
separan en bandas o zonas discretas que
pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.
 CLASIFICACION DE LOS METODOS
CROMATOGRAFICOS
Se dividen en tres categorias:
Anlisis por elucion. Proceso por el cual el soluto es lavado por la
columna aadiendo mas disolvente se llama elucion y es la forma
mas corriente de hacer una separacin.
Anlisis frontal. En este anlisis se alimenta continuamente a la
columna con una solucin de la muestra.
Por desplazamiento. Se introduce la muestra como una solucin.
En una sola porcin pero se hacen que los componentes bajen por
la columna por la adicin continua de una solucin que por la fase
estacionaria que cualquier otro de los componentes de la muestra.
La concentracin de cada uno de los componentes puede
determinarse por las distancias del cromatograma.
CROMATOGRAFIA SOBRE PAPEL
Es un mtodo sencillo, ya que se emplea un papel
filtro en lugar de una columna de relleno. Se
acostumbra describir la trayectoria de un
soluto en particular en funcin de retardo que
se define como
Rf= distancia del movimiento soluto entre
distancia del movimiento de solvente.
INDICADO CONCEN TIEMPO EN RF
R -TRACION SEG.
NH4OH
FENOFTA- 5% 4.35 0.836
LEINA
50% 5.47 0.936
100% 7.15 0.857
ANARANJA 5% 3.25 0.436
-DO DE
50% 3.39 0.650
METILO
100% 5.52 0.634
INDICAD TEMPERA TIEMPO RF
OR - TURA EN SEG.
DE
NH4OH
FENOFTALEI
15 C 7.56 0.540
NA
29 C 4.35 0.836
37 C 4.29 0.818
ANARANJA 15 C 5.50 0.272
DO
DE METILO 29C 3.55 0.436
37 C 3.26 0.436
USOS DE LA CROMATOGRAFIA
*LA CROMATOGRAFIA ES UNA TECNICA
QUE SE EMPLEA EN EL FRACCIONAMIENTO
DE PROTEINAS.
*DETERMINA EL GRADO DE PUREZA.
*REALIZAR EL SEGUIMIENTO DE UNA
REACCION.