Se distinguen 3 periodos:

Periodo Pre microscpico.

- Se extiende desde el siglo IV hasta la mitad del
siglo XVII, es la prehistoria de la ciencia histolgica.
- El hombre primitivo conceba las enfermedades
como acciones llevadas a cabo por seres invisibles,
espritus.
- En la mente del hombre primitivo no hay limites
entre magia, religin y ciencia, la propia iglesia
catlica se encargo de que el hombre no cayera en
el pecado del conocimiento.
- Un ejemplo es Andrs Vesalio (1514-1564)
fundador de la Anatoma Cientfica, condenado a
muerte por practicar la diseccin de cadveres.
Perodo microscpico:
A mediados del siglo XVII, el bilogo y fsico
ingls R.Hooke (1665) perfeccion el
microscopio, permiti observar la estructura fina
de los tejidos.
Se inicia el segundo perodo, al observar una
rebanada de corcho, compuesta por diminutos
compartimientos separados por paredes
delgadas, denominndolas celdas o clulas.
En este perodo el anatomista Malpighi (1671), el
botnico Grez (1671) y el ptico Leenwenhoek
describieron la estructura de la piel, bazo, sangre,
msculos y el lquido espermtico.
Teora de la estructura fibrosa y granular de los
organismos.
 Teora de la epignesis, defenda la neoformacin de
los rganos, rechazando la predeterminacin.
En el siglo XVIII se agudizo la lucha contra estas
teoras, cuando Wolf present su tesis teora del
engendramiento, (1ro en ver los embriones en
animales).
A finales del siglo XVIII y principios del siglo XIX, se
creo microscopios acromticos, los cuales hicieron
autenticas las observaciones microscpicas y estudio
de tejidos.
Bauer (1862), dio la primera imagen de ncleos de
clulas vegetales y Purkinje descubri el ncleo en
clulas de tejidos animales, introduciendo el
concepto de protoplasma (citoplasma).
 La culminacin de este periodo consiste en las
investigaciones de T.Schwann que formul:
Teora celular (1838-1839) considera que los seres vivos
estn constituidos por clulas y productos celulares.
A base de la teora se estudia la composicin de
distintos rganos, tejidos y su histognesis, lo que
permiti crear los rasgos principales de la anatoma
microscpica y la clasificacin de tejidos teniendo en
cuenta su estructura microscpica.
Se perfeccionan los objetivos de inmersin en agua y
aceite, se inventa el micrtomo y se utilizan nuevos
fijadores como formalina, cido smico y crmico.
En el siglo XIX fueron descritos el centro celular
(centrosoma), el complejo laminoso, aparato reticular
intracelular, las miofibrillas, tonofibrillas, etc.
Todos estos xitos de la clula cimentaron la Citologa.
 En 1884, el mdico ruso Skvartsov propuso el mtodo
de cultivo de clulas de la sangre fuera del organismo,
otros elaboraron este mtodo para cultivar tejidos.
Los mtodos de coloracin vital, introduccin de cuerpos
extraos en el organismo permitieron el estudio de la
fisiologa de estructuras histolgicas.
En 1900, el cientfico Gaidukov propuso el mtodo de la
microscopia de los objetos vivos. Al mismo tiempo se
inventa el micromanipulador, con la que se realizan
operaciones en clulas aisladas: extraccin de ncleos,
cortes de clulas, con el fin de aclarar su funcin e
importancia vital.
En el siglo XX se dan investigaciones dirigidas al estudio
de la Citofisiologa, en especial al papel de mitocondrias
y el aparato reticular intracelular en los procesos de
secrecin, estudio del ncleo e importancia en la
transmisin de la herencia.
 Perodo de la microscopa electrnica:
Caracterizado por el desarrollo de la histologa y
aportes a la sociedad con el desarrollo de
mtodos nuevos de investigaciones histolgicas
y de mtodos microscpicos electrnicos.
Con ayuda de la microscopia electrnica se
profundiza en la ultraestructura de las clulas,
tejidos y rganos.
Hoy da la microscopia electrnica de
exploracin y el uso del mtodo de corte por
congelacin, posibilitan el estudio de las
estructuras submicroscopicas en tres
dimensiones.
 La investigacin en biomedicina ha
experimentado la clonacin (la oveja Dolly) y el
aislamiento de lneas de clulas madres a partir
de embriones humanos.
El conocimiento de las clulas madres ha
revolucionado dicho procedimiento que ya no
consiste en utilizar clulas adultas, sino en
emplear clulas capaces de diferenciarse en el
tipo celular que sea de acuerdo a la enfermedad
y sntomas del paciente.
La histologa se vincula a la Computacin y
Ciberntica, su avance influy en el desarrollo de
software especfico para morfometra de
imgenes.
 HISTOTECNOLOGA
Disciplina tecnolgica que estudia los fundamentos tericos
y las secuencias de manipulaciones tcnicas que debe sufrir
una muestra biolgica, sea animal o vegetal, para obtener
un preparado histolgico que ser analizado con
microscopios pticos o electrnicos particulares. Dicho
preparado debe ser representativo del tejido en estudio, ya
que durante su observacin deber permitir llegar a un
diagnstico sobre el estado morfo-funcional y patolgico.
El concepto de disciplina tecnolgica surge cuando
entendemos que la Histotecnologa no es una ciencia en s
por carecer de mtodo y objeto de estudio propios, sino
que se conforma de marcos tericos que ciencias como la
Qumica, Fsica, Histologa, Biologa, etc, permiten para
sustentar su prctica concreta: el Mtodo Histolgico.
 Acino mucoso. Hematoxilina y
eosina. Con esta tcnica slo
podemos inferir que son clulas
mucosas por su forma. Pero nada
podemos caracterizar de sus
productos secretorios
Acino mucoso. PAS y hematoxilina.
Aplicando PAS, no slo podemos
caracterizar a la clula sino que
tambin podemos demostrar que
produce glicoconjugados neutros o
dbilmente cidos (ambos PAS
positivos).
 TCNICAS HISTOLGICAS
ANAE
Las esterasas son un grupo de enzimas que hidrolizan esteres de cidos
carboxlicos, localizndose fundamentalmente en los lisosomas.
La tcnica utilizada en este caso revela todos los tipos de actividad
esterasa ya que se emplea como sustrato un ester simple, el alpha-naftil
acetato, por ello se denomina esterasa no especfica. Los enzimas liberan
el alpha-naftol que se revela con la sal diazoica pararrosanilina con nitrito
sdico. Como en la mayor parte de las tcnicas histoenzimticas, se
emplean tejidos congelados y cortes obtenidos en criostato, ya que el
proceso de deshidratacin e inclusin inactivara los enzimas cuya
presencia se quiere demostrar.
RESULTADOS: los puntos con actividad esterasa aparecen de color marrn
rojizo.
Imagen: ganglio linftico de rata.
 AZUL DE TOLUIDINA
Colorante que tie estructura basfilas, tales como la cromatina. Se
puede comportar como colorante ortocromtico (tie de color
azul) o metacromtico (tie de color violeta-rojo), dependiendo del
pH y de la naturaleza qumica de la sustancia teida.
Como colorante ortocromtico, se usa frecuentemente para teir
tejido nervioso, donde tie la heterocromatina y los grnulos de
Nissl (acmulos de cisternas de retculo endoplsmico rugoso de los
somas neuronales).
El azul de toluidina tie metacromticamente las estructuras ricas
en proteoglucanos sulfatados, como el heparn sulfato, presente
por ejemplo en el cartlago joven (condroblastos y matriz inmadura)
y en grnulos de las clulas cebadas.
 RESULTADOS:
Ortocromasia: las estructuras basfilas aparecen teidas de color azul.
Imagen: Soma neuronal del asta ventral de la mdula espinal de rata.

RESULTADOS:
Metacromasia. las estructuras metacromticas aparecen teidas de color
violeta.
Imagen: CSF de filamento primario branquial de trucha arco iris.
 FOSFATASAS
Grupo de enzimas hidrolticos que actan sobre los steres del
cido fosfrico. Algunas fosfatasas actan especficamente sobre
un sustrato determinado, adenosina trifosfatasa, pero la mayora
actan sobre diversos sustratos y su clasificacin se basa en el pH,
diferencindose dos grupos:
Fosfatasas alcalinas que exhiben actividad ptima a pH elevado
(8,3 9,4)
Fosfatasas cidas que presentan actividad ptima a pH bajo (4,7
5,5)
Para la demostracin histoqumica de ambos grupos, se utiliza
como sustrato el naftol-AS-BI-fosfato al pH correspondiente. A
continuacin, el naftol liberado se demuestra con una sal de
diazonio (Fast Red TR para la fosfatasa alcalina y pararrosanilina
con nitrito sdico para la fosfatasa cida). Tras la reaccin, los
ncleos se contrastan con hematoxilina.
Como en la mayor parte de las tcnicas histoenzimticas, se
emplean tejidos congelados y cortes obtenidos en criostato, ya
que el proceso de deshidratacin e inclusin inactivara los
enzimas cuya presencia queremos demostrar.
 RESULTADOS:
Fosfatasa alcalina: las clulas con actividad fosfatasa alcalina aparecen en rojo.
Imagen: pronefros de trucha arco iris.

Fosfatasa cida: las clulas con actividad fosfatasa cida aparecen en rojo-
anaranjado.
Imagen: pronefros de pez gato.
 INMUNOPEROXIDASA INDIRECTA
Las tcnicas inmunohistoqumicas se basan en la especificidad de la reaccin
antgeno-anticuerpo, que permite la identificacin de una protena (el antgeno),
cuya presencia queremos demostrar, mediante su unin a un anticuerpo especfico
(anticuerpo primario) contra ella.
En este caso se ha utilizado el mtodo de inmunodeteccin indirecta en dos
etapas. En un primer paso, lo cortes se incuban con el anticuerpo primario, que se
une a su antgeno especfico all donde est presente. En un segundo paso, se
aplica otro anticuerpo (anticuerpo secundario) contra el anticuerpo primario. El
anticuerpo secundario est unido covalentemente (se dice que est marcado), en
este caso, al enzima peroxidasa (un enzima que cataliza la formacin de perxido
de hidrgeno, altamente oxidante). Finalmente, el producto de reaccin de este
enzima es revelado utilizando como sustrato 3,3diaminobencidina (DAB) que al
oxidarse forma un producto marrn insoluble.
RESULTADOS: los puntos o clulas donde se localiza el antgeno aparecen de color
marrn.
Imagen: ganglio linftico de rata.
 HEMATOXILINA EOSINA
Esta tcnica utiliza dos colorantes: en primer lugar los cortes se
someten a la accin de la hematoxilina, colorante bsico, que se
une a cualquier sustancia que tenga grupos cidos, tales como los
grupos fosfato del ADN y a las protenas nucleares que poseen
carga negativa. A continuacin, los cortes se someten a la accin de
la eosina, colorante dbilmente cido, que colorea a las estructuras
bsicas.
RESULTADOS: las estructuras basfilas, como los ncleos, se tien
de color azul con la hematoxilina, mientras que la eosina tie de
rosa ms o menos intenso estructuras acidfilas, como las fibras de
colgeno.
Imagen: conducto de Wolff de trucha arco iris.
 PAS (REACCIN DEL CIDO PERYDICO- REACTIVO DE SCHIFF)
La reaccin de PAS nos revela todo tipo de carbohidratos
(polisacridos, como el glucgeno, mucopolisacridos, glucolpidos,
glucoprotenas etc.). Se basa en la reaccin con el reactivo de Schiff
de los grupos aldehdo liberados de los grupos vic-glicol presentes
en los carbohidratos tras su oxidacin con cido perydico. El
reactivo de Schiff contiene fucsina bsica (o pararrosanilina), que en
solucin cida y en presencia de SO2 da lugar a una forma no
coloreada (cido N-sulfnico). Este reactivo reacciona con los
grupos aldehdo libres formando un compuesto insoluble de color
prpura. Esta tcnica se utiliza sobre cortes obtenidos de tejido
incluido en parafina o de tejido congelado.
RESULTADOS: carbohidratos en color prpura.
Imagen: epidermis de trucha, Salmo trutta fario.
 PERLS
Esta tcnica sirve para detectar el hierro que se localiza en las
clulas en forma de grnulos de hemosiderina que es insoluble,
pero no detecta el hierro contenido en la ferritina que es
hidrosoluble.
La reaccin de Perls se basa en la liberacin de los iones frricos
asociados a protenas mediante la accin del cido clorhdrico, a su
vez, los iones frricos liberados reaccionan con el ferrocianuro
potsico formando un precipitado azul verdoso de ferrocianuro
frrico o azul de Prusia. Tras la reaccin, los ncleos se contrastan
con hematoxilina.
RESULTADOS: precipitados azul turquesa en los puntos donde se
han liberado los iones frricos.
Imagen: bazo de rata.
 TRICRMICO DE GOLDNER (Masson-Goldner)
Las coloraciones tricrmicas usan dos o ms colorantes para teir
diferencialmente las diversas estructuras histolgicas, segn su
basofilia / acidofilia o por su apetencia por un colorante
especfico. El mtodo del tricrmico de Goldner (conocido como
Masson-Goldner) usa hematoxilina de Groat, y los colorantes rojo
fucsina Poneau (xilidina Poneau, o Poneau 2R), naranja G (en
solucin de cido fosfomolbdico) y verde luz (solucin actica).
Diseado por Masson y modificado por Goldner para distinguir las
clulas de la matriz conjuntiva.
RESULTADOS: estructuras basfilas (como las cromatina) de color
pardo-marrn a negro, las estructuras dbilmente acidfilas de rojo
a naranja y las fuertemente acidfilas (como las fibras de colgeno)
de azul a verde.
Imagen: glndula salival de rata.
 INMUNOHISTOQUMICA
Son tcnicas de inmunotincin que permiten demostrar una
variedad de antgenos presentes en las clulas o tejidos utilizando
anticuerpos marcados.
Estas tcnicas se basan en la capacidad de los anticuerpos de unirse
especficamente a los correspondientes antgenos. Esta reaccin es
visible slo si el anticuerpo est marcado con una sustancia que
absorbe o emite luz o produce coloracin.
En las tcnicas de inmunofluorescencia se utilizan como
marcadores compuestos de fluorescena que bajo luz ultravioleta
emiten luz de longitud de onda visible, que depende de la
naturaleza del compuesto.
Estas tcnicas necesitan muestras en fresco y congeladas, sin
fijacin convencional, pues los antgenos estn presentes en
superficies celulares o son muy lbiles a la fijacin en formalina.
 La inmunofluorescencia directa, es decir con anticuerpos
conjugados con fluorescena, se aplica corrientemente en el
diagnstico de las enfermedades cutneas en donde tiene
indicacin y utilidad muy precisas como en enfermedades
ampollares, vasculitis y mesenquimopatas.

En las tcnicas de inmunoperoxidasa se utilizan como marcadores

enzimas capaces de hacer cambiar de color un sustrato incoloro.
Por ejemplo, las enzimas ms utilizadas son peroxidasa y fosfatasa
alcalina y los sustratos diaminobenzidina (color pardo),
aminoetilcarbazol (color rojo) y nitroazul de tetrazolio (color azul).
Estos marcadores pueden unirse (conjugarse) al anticuerpo
primario o indirectamente por otros anticuerpos (secundarios) o
sustancias como biotina o protena A.
EJEMPLOS DE MARCADORES INMUNOHISTOQUIMICOS
Anticuerpo Clulas/antgenos detectados
CD1a clula de Langerhans
CD4 linfocito T de auxilio
CD8 linfocito T citotxico
CD30 clula de Reed-Sternberg
CD45 leucocitos
CD68 macrfagos
S100 clulas de Schwann
HMB-45 melanocitos
AE1 citoqueratinas de bajo peso molecular
AE3 citoqueratinas de alto peso molecular
DESMINA clulas musculares
GFAP gla
CEA antgeno carcino-embrionario
AFP alfa-fetoprotena
REN receptores nucleares de estrgenos
VIM Sarcomas
 Hibridacin in situ
La tcnica de hibridacin in situ est basada en la capacidad que poseen
los cidos nucleicos para hibridarse entre s, es decir, la existencia de
determinada secuencia de ADN o ARN, que resulta complementaria con
otra secuencia.
Su utilidad reside en la capacidad de poder demostrar mediante la
utilizacin de una sonda (formada por una secuencia de ADN previamente
conocida) marcada con un istopo radiactivo, la presencia de determinada
secuencia de ADN o ARN complementaria, en la muestra a estudiar.
Lo que se produce mediante la utilizacin de esta tcnica es: La
hibridacin (unin), de la sonda marcada, con la secuencia a buscar (en el
caso de estar presente en la muestra) y posteriormente mediante tcnicas
especficas (autoradiografa o inmunohistoqumica), la transformacin de
la secuencia en algo visible.
Esta tcnica es muy til, por ejemplo, para identificar la secuencia de
nucletidos, en determinadas enfermedades de origen gentico.