Sunteți pe pagina 1din 57

Cromozomii umani

reprezint substratul morfologic al E i V;


nivelul supramolecular de organizare a materialului genetic
(ADN + proteine histone + proteine nonhistone + ARN)

reprezint structuri dinamice ca form, aspect, grad de


compactizare, activitate genetic:
crs mono sau bicromatidian;
cromatin sau cromozom;
activ pentru transcripie sau inactiv.

2
crs se autoreproduc prin replicarea ADN ce i constituie numai
n perioada S a interfazei.

crs reprezint grupuri de nlnuire a genelor:


- fiecare crs conine un numr anumit de gene;
- fiecare gen are o poziie fix pe cromozom locus;
- genele unui cromozom formeaz grupuri lincage, ce de
regul, se transmit n bloc, nlnuit

setul diploid de crs a unui individ formez cariotipul:


23 perechi: 22 perechi autozomi +
1 pereche gonozomi (XX sau XY).
Cromozomii pereche = cromozomi omologi 3
Originea gonosomilor

4
lungimea relativ i

repere de identificare a
absolut a crs

cariotipului poziia centromerului =


constricia primar - c

prezena constriciilor
secundare h

prezena sateliilor - s
Studiul cromozomilor se poate realiza n:
Metafaz prin colorare omogen sau n benzi
Prometafaz prin colorare n benzi
Interfaz prin hibridare cu sonde moleculare
marcare fluorescent

6
Cromozomii au o structur neomogen:
- Secvene codificatoare i necodificatoare;
- Segmente de eucromatin i heterocromatin,
- secvene unice i repetitive;
- Secvene bogate n GC i AT;
- Secvene transcrise i netranscrise;
- segmente bogate n proteine acide i bazice.
!!! Acestea explic originea benzilor cromozomiale

Anomaliile de numr sau de structur a crs se manifest prin


anomalii multiple de dezvoltare sindroame crs
plurimalformative
7
Structura cromozomului metafazic.
Repere cromozomiale

Forma cromozomului metafazic depinde de POZIIA


CENTROMERULUI
8
p x100
Ic p q

9
Cariotipul uman

10
CLASIFICAREA CROMOZOMILOR
Dup lungime: Dup form: Dup tip:
-Mari -Metacentrici -Autozomi
-Medii -Submetacentrici -Gonozomi
-Mici -Acrocentrici

Dup prezena altor Grupe:


repere:
A 1-3 E 16-18
-Cu h pe braul p
B 4,5 F 19,20
-Cu h pe braul q
C X, 6-12 G 21, 22, Y
-Cu satelii
D 13-15
11
Cariotipul uman i formula
cromozomial
46,XX
46,XY
47,XXY
45,X
47,XY,+21
45,XY,-21
46,XX,5p-

12
Cariotipul uman i formula
cromozomial
46,XX,13ps++
46,XY,13ph-
46,XX,16ph+
46,XX,16qh++
46,XY,16p+
46,XY,16q-

13
Cnd putem presupune o anomalie crs de NR
sau de structur ?
Anomalii de dezvoltare mutiple sindrom
plurimalformativ
Anomalii de sexualizare
Anomalii de reproducere
Nou nscut mort plurimalformat
Avorturi spontane repetate
Sterilitate primar
ETAPELE CARIOTIPRII

1. Colectarea sngelui pentru a obine celule nucleate


(!!! leucocitele sngelui periferic au nuclee n interfaz)
2. Obinerea culturii de celule n diferite perioade ale mitozei

37 Cel n

Cel C diferite
faze ale
sgelui Peste 72 ore mitozei
+ mediu 72 ore
de
cretere
3.Pregtirea cromozomilor pentru microscopie
Citostatic -
colhicin
Sol hipotonic

Celule n
diferite
faze ale
mitozei
Stoparea Sedimentarea Dispersarea
metafazei celulelor cromozomilor
4. Colorarea i microscopia preparatului cromozomic

Colorare

Lam cu cel fixate Lam cu plci metafazice


5. Analiza cariotipului

Decuparea Realizarea
Fotografierea
cromozomilor cariogramei =
plcii metafazice cariotipului
45,X
47,XX,+18
69,XXX
47,XXY
46,XX,5p-
47,XX,+13
47,XX,+21
Tehnici de citogenetic de analiz a
cariotipului:
Pentru identificarea anomaliilor de numr analiza
cromozomilor metafazici cu colorate omogen.

Pentru identificarea anomaliilor de numr i de structur


analiza cromozomilor metafazici cu colorare difereniat Q, G,
R; analiza cromozomilor prometafazici cu colorare difereniat
Q, G, R.

Pentru identificarea polimorfismului cromozomial analiza


cromozomilor metafazici cu colorare difereniat C, T.

29
Studiul cariotipului uman

Analiza crs Analiza crs Analiza crs


metafazici prometafazici interfazici

Colorare Colorare colorare n Testul Metode


uniform n benzi benzi cromatinei molecular
G,Q,R,C,T G, R sexuale citogenetice
X i Y FISH, mFISH
SKY
CGH

*** NR benzi pentru setul haploid: 300-400 m / 550 pm / 850p


Colorarea cromozomilor
Omogen Difereniat, n benzi

G Q R C T

Benzile G+ = Q+ = R
Benzile G- = Q- = R +
Nomenclatura benzilor

Cromozomul
brae
regiuni
benzi
subbenzi

4p22.2
5q13.4
9p21.3
1p35

1p22

1q23

1q41

46,XY,del(1)(p11-p34)
46,XY,del(1)(p11-p34)
46,Y,del(X)(q12.1-q24.3)
Cariotip

Normal Normal cu Aneuploid Poliploid Cu aberaii


polimorfisme cromosomiale

46,XX 46,XX,9qh+ 47,XX,+21 69,XXX 46,XX,1q-


46,XY 46,XY,16qh- 45,XY,-12 69,XXY 46,XY,16p+
46,XX,14s++ 48,XXXY 46,X,r(X)
45,X 46,XY,del(5p)
46,XX,t(12,22)
Utilizarea tehnicii
Cromosomul 4 Stabilirea crs. X i 18 Stabilirea crs. X, Y i 18

FISH n analiza
cromosomial
Stabilirea crs. 18 i 21 Stabilirea crs. 18 i 21
37
46,XX 47,XX,+21

47,XX,+21 47,XX,+21
SKY
Cariotip normal 46,XX Fenotip
46,XY normal

Polimorfisme Crs D i G variaii ph sau s: Fenotip


Crs 1,9,16,9,Y variaii qh normal

Anomalii de numr Trisomii 47,XXX; 47,XXY; 47,+21; Fenotip


47,+13; 47,+18; 47,+8 patologic
Monosomii 45,X
Anomalii de structur inv Fenotip
echilibrate t normal
rob

Anomalii de structur del Fenotip


neechilibrate dup patologic
r
i
??? polimorfisme
p i q conin segmente cromozomiale
codificatoare i necodificatoare
p+ sau p- - anomalii
q+ sau q- - anomalii
c mai mare sau mai mic polimorfism
t mai mare sau mai mic polimorfism
h+ sau h- - polimorfism
s+ sau s- - polimorfism
Testul cromatinei sexule
Testul cromatinei sexule X = testul Barr - vizualizarea crs X inactiv,
heterocomatinizat pe nucleele interfazice ale celulelor somatice

Testul cromatinei sexule Y = testul F vizualizarea a 2/3 din braul


qY pe nucleele interfazice ale celulelor somatice sau ale
spermatozoizilor
Cromozomul X ~2000 gene: Cromozomul Y ~ 300 gene:
gene structurale somatice gene reglatoare masculinizante
gene reglatoare feminizante; pseudogene
gene structurale feminizante; !!! Braul q conine heterocromatin
constitutiv
gene structurale masculinizante
!!! Important
Cromozomul X este indespensabil celulei somatice i
:
n cel 46,XX este activ numai un X
n cel 46,XY este activ i X i Y
n cel 47,XXX - este activ numai un X
n cel 47, XXY- este activ numai un X i un Y
n cel 48, XXXY- este activ numai un X i un Y
Cromozomul Y este obligator pentru
De ce? Exist o explicaie?
Dimorfismul sexual - echilibrat
Caractere sexuale primare - diferite
Caractere sexuale secundare - diferite
Caractere somatice - asemntoare
45,X 47,XXY
Regiunile crs X i Y
I regiunea pseudoautosomal (PA) cu
gene comune i pe crs X i pe crs Y:
- Xpter
- Ypter
II regiunea crs X cu gene specifice
numai X
III regiunea crs Y cu gene
masculinizante
IV regiunea crs Y (2/3Yq) cu secvene
necodificatoare heterocromatin
constitutiv
Concluzii:
La persoanele 46,XX:
Sunt active genele celor 22 perechi autosomi;
Sunt active genele unui crs X + genele regiunii PA
Xpter a celui de-a doilea crs X
La persoanele 46,XY:
Sunt active genele celor 22 perechi autosomi;
Sunt active genele unui crs X + genele regiunii PA
crs Y (Ypter) + genele de ale crs Y (Yp i 1/3Yq
pericentromeric)
Rol: controlul dozelor genelor somatice la i
+ controlul diferenierii sexuale
!!! Dimorfism sexual echilibrat

Mecanisme moleculare implicate n
lyonizare (inactivarea crs X)
X q13 - centru de inactivare a crs X (XIC) - gena XIST (450
Kb) :
gena XIST - promotor cu trei regiuni:
regiunea activatoare;
regiunea de stabilizare a ARN XIST la nivelul crs
inactiv;
regiunea inhibitoare asupra regiunii activatoare.
regiunea codificatoare - codific ARN care rmne
asociat cu crs inactivat genetic
captul 3' al genei - regleaz numrarea cromozomilor i
determin care X (sau) rmne activ.
!!! Gena XIST este o gen atipic
a pierdut potenialul de codificare proteic
Funcia genei XIST (X inactivation specific transcript)
La nivel molecular codific sinteza ARNm-XIST;
La nivel celular inactivarea unui crs X
ARNm XIST rmne ataat la crs inactiv
Dezacetilarea H1
Heterocromatinizarea crs X
La nivel de organism controlul dozelor genelor X-
lincate materne i paterne controlul dezvoltrii
organismului feminin
Amprentarea genomic
(sau imprinting-ul parental)
Mecanism de reglare a activitaii transcripionale i
expresiei fenotipice a unei gene din perechea de alele
reprezint represarea permanent, dependent de
originea parental:
a unei gene sau
a unui cromozom sau
a genomului sau
modificri epigenetice n cursul gametogenezei i/sau
embriogenezei precoce
Ex: genele X-lincate la ; diferite gene autosomale (s.
Angelman, s. Prader-Willy)
46,XX 46,XY

Crs Y
Crs X activ Crs X neactiv Crs X activ Bra p - activ
eucromatinizat heterocromatinizat eucromatinizat Bra q - inactiv

Corpuscul Barr
Corpuscul F
= 1m
= 0,25 m
Testul Barr
Cromatina sexual X:
- reprezint cromozomul X inactiv, heterocromatin facultativ,
n celulele somatice 46,XX;
- se prezint sub forma unui corpuscul Barr de 1m n nucleii
interfazici ai celulelor somatice;
- testul Barr este util n identificarea nr de crs X n celulele somatice:
NR crsX = nr corpusculilor Barr + 1 (un crs X activ).
46,XX 1 corpuscul Barr
46,XY 0
47,XXX 2
47,XXY - 1
45,X 0
48,XXXX 3
!!! Explicaia originii cromatinei X ipoteza M. Lyon (1961)
Testul F
Cromatina sexual Y:
- reprezint braul q al crs Y, heterocromatin constitutiv (2/3q), n cel.
somatice 46,XY sau n spermatozoizii 23,Y;
- se prezint sub forma unui corpuscul F (fluorescent) de 0,25m n
nucleele interfazice;
- testul F este util n identificarea crs Y (determinarea prenatal a
sexului):
NR crsY = NR corpusculilor F
46,XX 0
46,XY 1
47,XYY 2
47,XXY - 1
48,XXYY 2
46,X,i(Yp) 0
46,X,i(Yq) 1 (0,5m)