Profesorado en Educacin Secundaria en la Modalidad

Tcnico Profesional en Concurrencia con el Ttulo de

Base.
Comisin: 3 2
Integrantes:
Quispe, Noelia
Resina, Horacio
Toledo, Mara Ins
Vercellino, Luis

Cultivo de Tejidos
Vegetales
CULTIVO IN VITRO
Cultivo de Tejidos Vegetales
CULTIVO IN VITRO
PROPAGACIN DE LAS PLANTAS

SEMILLAS
Reproduccin sexual
Progenie con genotipo distinto
PROPAGACIN VEGETATIVA
Reproduccin asexual
Bulbos
Tubrculos
Rizomas
Brotes
Esquejes
METODOS BIOTECNOLGICOS
CULTIVO IN VITRO
MICROPROPAGACIN
SEMILLAS SINTTICAS
Qu es el cultivo in vitro
Pierik (1987) define cultivo in vitro de
plantas superiores como:

El cultivo en medio nutritivo,

bajo condiciones estriles, de
plantas, semillas, embriones,
rganos, tejidos, clulas y
protoplastos.
 Aplicaciones del CTV

Clonacin Micropropagacin

Sanidad Vegetal. Termoterapia

Cultivo de meristemas

Conservacin del germoplasma. Crioconservacin

Mejora gentica
Produccin de haploides
Organismos genticamente modificados (OGM)

Produccin de metabolitos secundarios.

Cultivos celulares.
Cultiv del rgano productor en bioreactores.
 Ventajas del CTV

1. Produccin de un gran nmero de plntulas que conservaran el

genotipo lite deseado.
2. Tiempo de multiplicacin breve.
3. Posibilidad de multiplicar gran cantidad de plantas en una
superficie reducida, a bajos costos y en tiempo econmicamente
ptimo.
4. Sanidad del material vegetal controlado.
5. Facilita transporte internacional.
6. Propagacin vegetativa rpida de variedades deseables presentes
en escasos individuos.
7. Extensin temporal del cultivo durante un ciclo anual bajo
condiciones de laboratorio controladas.
Desventajas
Contaminacin
Instalaciones muy especializadas
Trabajadores especializados: Capaces de trabajar en
condiciones de asepsia y tomar decisiones al dividir los
cultivos
Condiciones de micropropagacin: Mtodos
especficos para cada especie
Tamao inicial pequeo de las plntulas obtenidas
Estabilidad gentica: Las tcnicas de propagacin no
deben introducir inestabilidad gentica
Costes
Condiciones para lograrlo
Control del ambiente:

El ambiente qumico

El ambiente fsico
El ambiente qumico:
MEDIO DE CULTIVO
El medio de cultivo es la combinacin
slida o lquida de nutrientes y agua.
Incluye: sales inorgnicas,
carbohidratos
vitaminas y
aminocidos.
Se denomina Medio Basal y puede
ser suplementado con reguladores
de crecimiento y ocasionalmente con
otras sustancias
Necesidades nutricionales
y hormonales
Sales inorgnicas

Macronutrientes Micronutrientes
N Fe
P Zn
K B
Ca Mn
Mg Cu
S Ni
Co
Al
Mo
I
Necesidades nutricionales y
hormonales

SUSTANCIAS ORGANICAS
Azcares
Aminocidos
Reguladores de crecimiento:

Citocininas

Auxinas

Giberelinas
 Necesidades nutricionales y
hormonales
SUSTANCIAS ORGANICAS

MEZCLAS DE SUSTANCIAS POCO

DEFINIDAS:

Extracto de levadura
Leche de coco
Extractos vegetales
Hidrolizados de casena
Peptona y triptona
Medios de cultivo:
Control de pH:
solidificacin de los agentes gelificantes
solubilidad de algunos componentes
absorcin de determinados nutrientes
actividad de muchos enzimas

Esterilizacin:
Autoclavado de sustancias termoestables
Medios de cultivo: tipos

Lquido Slido
 Uso de Reguladores de
Crecimiento

Importancia del balance hormonal

A: Auxina / Citocinina = 1 callo

B: Auxina / Citocinina > 1 raz
C: Auxina / Citocinina < 1 brote
 El ambiente fsico
Condiciones de incubacin

Temperatura (28 2 C )
Fotoperodo (16-8 horas)
Irradiancia (50 a 200 mol/m-2seg-1)
Humedad relativa (80-90%)
 Morfognesis y Embriognesis in
vitro

Modificado a partir de Lindsey y Jones, 1989, en Plant biotechnology in agriculture. Open University Press, Wiley, Chichester, p 59
Micropropagacin

Mtodo especial de
propagacin en un medio
asptico para obtener plantas
con caractersticas genticas
iguales a la de sus
progenitores.
 Iniciacin

1. Eleccin y acondicionamiento de la planta madre

2. Eleccin del explanto inicial y de la formulacin del medio de
cultivo
Etapas de la 3. Desinfeccin superficial de los explantos
micropropagacin Establecimiento

vegetal Multiplicacin

- Multiplicacin del material stock

Enraizamiento

- Enraizamiento de los brotes obtenidos in vitro

Rusticacin

- Pasaje de las plantas crecidas in vitro a las condiciones

de maceta o a campo
Eleccin de la planta madre

ETAPA 0
GENOTIPO (ecotipo)
Edad
Estado fisiolgico
Lugar en que crece
Hbito (herbceo, leoso)
Acondicionamiento de la planta
madre
Para poder establecer el cultivo en
condiciones de asepsia, se deben obtener
explantes con un nivel nutricional y un
grado de desarrollo adecuado.

Para obtener estos explantes es

recomendable mantener a las plantas
madre un perodo de tiempo que puede
oscilar entre unas semanas o varios meses,
en un invernadero, en que se va a intentar
cultivar la planta en condiciones sanitarias
ptimas y con un control de la nutricin, del
fotoperodo y de la irradiancia recibida.
Recoleccin del los explantes

Una vez escogida la planta madre, se

extraern los fragmentos a partir de
los cuales se obtendrn los explantos.

Antes de extraer los explantes se

realizar una desinfeccin de los
fragmentos de planta madre para
eliminar los contaminantes externos.
ELECCION DEL EXPLANTE

El tipo de explante a usarse en los

procesos de micropropagacin depende
de la especie con la que se est
trabajando y de los objetivos que se
persigan.
De acuerdo a las especies se
seleccionan los explantes ms sencillos
de obtener y de mayor rendimiento
Establecimiento del cultivo
El cultivo de tejidos comienza a partir de trozos
extrados de la planta madre.
Estos pequeos rganos o trozos de tejido se
llaman explantes.
Las plantas que crecen en el medio natural
estn contaminadas por microorganismos
(bacterias y hongos).
Los explantes antes de ser introducidos en el
medio de cultivo han de ser esterilizados.
Posteriormente se introducirn en el medio a su
vez estril y se mantendrn all en condiciones
aspticas.
2. Tamao del explante
Posibilidad de contaminacin
La contaminacin aumenta con el tamao del
explanto. Explantes apropiados entre 0,5 y
1,0 milmetros (caa de azucar)

Capacidad de regeneracin
Existe un tamao mnimo de explante que
depende de la especie, y del material vegetal
Necesidad de medios complejos o
acondicionados si son muy pequeos
3. Ubicacin en la planta madre

pices/Meristemas
Secciones nodales e
internodales
Brotes axilares
Topfisis, ciclfisis
Flores, frutos, semillas
Rebrotes, brotes epicrmicos
Estabilidad

Explantes como los meristemos apicales y las yemas

axilares son genticamente muy estables, este tipo de
explantes sirve para reproducir mltiples clones.

Otros explantes como las yemas adventicias son

genticamente inestables y producen un alto grado de
variabilidad en los clones. Esta variacin seminatural,
es til para el fitomejoramiento para obtener nuevas
lneas de cultivo.
Meristemos
Los meristemas determinan el crecimiento de la planta
y dan origen a sus diferentes rganos
Posibilitan la micropropagacin
de diferentes especies vegetales.
Constituyen el explanto ideal
para liberar de patgenos in vitro
a plantas infectadas por virus,
hongos y/o bacterias.
Son ampliamente utilizados
como explantos para la
criopreservacin y conservacin
de germoplasma.
ORGANOGNESIS DIRECTA (Nicotiana
tabacum)

Caulognesis directa Rizognesis directa

ORGANOGNESIS
INDIRECTA (Nicotiana tabacum)

Formacin
de callo

Rizognesis Caulognesis
indirecta indirecta
 Embriognesis
somtica

Es un proceso en donde grupos

de clulas /tejidos somticos
logran la formacin de un
embrin somtico, igual a un
embrin zigtico contenido
en una semilla intacta y
que puede desarrollarse en una
plntula en un medio adecuado

Embriognesis somtica
en Coffea arbica cv. Rubi
A partir de explantos
foliares.
EMBRAPA (Brasilia)
Embriognesis somtica

Mantener y
Multiplicar

Establecer
Seccin e inducir
entrenudo callo embriognico

1. Desarrollar
2. Madurar y
3. Germinar embriones
Cultivo de tejidos: Embriognesis somtica
Cultivo de embriones y vulos

Embrin de lirio Ovario de Lirio

Importante para la obtencin de hbridos interespecficos e

intergenricos.
Ej.Papa, ornamentales (lirios, alstroemerias)
A modo de revisin
Estudios bsicos
Callos: cualquier rgano o tejido
Obtencin de plantas con sanidad controlada
Micropropagacin
Obtencin de hbridos interespecficos
Rescate de embriones
Obtencin de plantas haploides
Induccin de variacin somaclonal
Produccin de compuestos tiles
Obtencin de hbridos somticos
Conservacin de germoplasma
Suspensiones celulares