Sunteți pe pagina 1din 105

MICROBIOLOGIA I

DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL
INFECIILOR AEROGENE
MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL DIFTERIEI

DIFTERIA toxiinfecie acut, caracterizat


printr-o angin pseudo-membranoas
(greaca: diphthera pereche de membrane
de pergament) cu efecte toxice la distan
(miocardit, polineurit, nefroz).

2000 300.000 cazuri, 3000 decese


2014 7321 cazuri raportate
1991 2000 cazuri in fosta URSS
1998 200.000 cazuri, 5000 letale (Moldova
apr. 1000 cazuri, peste 200 decese)
1821 Bretonneau individualizeaz difteria i
demonstreaz caracterul ei contagios
1883 - Klebs descrie bacteria n membranele
false de angine difterice
1884 - Loeffler izoleaz bacteria, apoi
demonstreaz patogenitatea ei pe cobai
1888 - Roux i Yersin demonstreaz secreia
exotoxinei i inoculnd-o la animal reproduc
manifestrile difteriei
1890 - Behring i Kitasato imunizeaz animalele
cu toxin modificat
1923 - Ramon prepar anatoxina difteric, primul
vaccin antidifteric
Difteria este provocat de mi/o din genul
Corynebacterium, familia Corynebacteriaceae
(din greaca corn (nod, innodat) si bacterion
(bastonas)
Genul Corynebacterium reunete mi/o care
se caracterizeaz prin prezena n compoziia
peretelui celular a:
- acidului mezo-diaminopimelic
- acizilor micolici cu caten scurt (22-38 atomi
de C)
Coninutul GC ntre 46-74 %.
Prezint asemnri cu mi/o din genurile
Mycobacterium i Nocardia
Clasificarea genului Corynebacterium
I. Corinebacterii fitopatogene
II. Corinebacterii patogene pentru animale, care
afecteaz accidental omul:
C.pseudotuberculosis, C.ulcerans
III. Corinebacterii cu tropism uman:
- Specie patogen: C.diphtheriae (biovaruri
gravis, mitis, intermedius). Colonizeaz frecvent
rinofaringele, mai rar tegumentul. Exist i
purttori sntoi.
- Specii comensale (specii pseudodifterice,
difteroizi): C.xerosis, C.jeikeium,
C.pseudodiphthericum, etc
Caractere morfotinctoriale ale C.diphtheriae
Bacterii (bastonae) de 1-8 m x 0,3-0,8 m,
drepte sau puin ncurbate, cu extremitile
rotunjite sau ngroate (aspect de halter sau
de mciuc), datorit granulaiilor de volutin
(corpii Babe-Ernst). n frotiuri se aranjeaz
unghiular, sub forma caracterelor chinezeti,
cifre romane sau litere majuscule: Y, M, N,
V... Imobile, asporogene, necapsulate.
Se coloreaz G+, pentru evidenierea
granulaiilor de volutin - Loeffler, Albert,
Neisser
Caractere de cultur
C.diphtheriae este o specie facultativ
anaerob, exigent la cultivare, temperatura
optim de cultivare 37C, pH 7,4.

Medii de cultur elective:


- Mediul Loeffler (ser bovin coagulat): colonii
S, mici, netede, opace, albe-cenuii, apar
peste 16-24 ore de cultivare
- Geloz-snge (identic)
Medii de cultur selective difereniale
- Mediul Clauberg (geloz-snge cu telurit de
potasiu). C.diphtheriae gravis: colonii R,
mari, negre (reducerea teluritului n teluriu),
crenelate, aspect de floare de margaret,
nehemolitice; mitis: colonii S, mijlocii, negre,
bombate, cu zon de hemoliz
- Mediul Tinsdale (geloz-ser-cistin-telurit de
potasiu-tiosulfat) - colonii negre cu halou
brun
- Mediul Bucin (geloz-snge cu hinozol)
colonii albastre
Medii de transport
- Geloz-ser semilichid cu telurit de K
- Mediul OCST (ou-cistin-ser-telurit)

Activitatea biochimic a C.diphtheriae:


Proteolitic:
Ureaza- (testul Zaks), cistinaza+ (testul Pizu), indol-.
Zaharolitic:
Gravis: glucoza+, amidon+, zaharoza-
Mitis: glucoza+, amidon-, zaharoza-
Posed catalaz, oxidaza-

Se disting 22 lizotipuri de C.diphtheriae i multiple


serogrupuri (antigen O polizaharidic) i serovaruri
(antigen K proteic)
Factori de patogenitate
Toxina difteric - origine proteic, secretat de tulpinile
lizogene (fagi beta, purttori ai genei Tox), n
prezena unor cantiti reduse de Fe. Un represor
proteic bacterian controleaz expresia genei Tox.
Acest represor este activat de cantiti mari de Fe.
Exotoxin tipic (fragmente polipeptidice A i B).
Mecanismul de aciune toxina hidrolizeaz NAD i
transfer fragmentul ADP-riboz format pe factorul
de elongare EF-2, care nu mai asigur translocarea
peptidil-ARNt de la situsul acceptor la situsul donor al
ribosomului eucariot. Rezult stoparea sintezei
proteice. O singur molecul este letal pentru
celul !!!
Toxina difuzeaz n organism perturbnd funcionarea
diferitor organe (n special SNC, cord, rinichi,
suprarenale), cauznd distrofii.
Poate fi transformat n anatoxin, utilizat n vaccinare
Enzime de patogenitate: hialuronidaza,
neuraminidaza
Cord factor un glicolipid toxic din peretele celular

Patogeneza i formele clinice de difterie


Sursa de infecie: bolnavul cu difterie i purttorii
sntoi de germeni (colonizeaz rinofaringele,
rareori tegumentul sau conjunctiva).
Mecanismele i cile de transmitere:
- Direct pe cale aerogen (picturi) sau contact
cu plgi contaminate
- Indirect prin obiecte (jucrii, cri), praf sau
alimente contaminate (lactate)
La poarta de intrare bacteriile se multiplic
i provoac un focar inflamator local,
determinat de aciunea toxinei, care fiind
ulterior difuzat prin limf i snge
provoac starea de intoxicaie general.
Focarul inflamator se localizeaz n faringe
(angina difteric), mai rar n laringe (crupul
difteric), nas, urechi, conjunctiv,
mucoasa organelor genitale, plgi
cutanate.
Leziunile locale se caracterizeaz prin
inflamaie fibrinoas. Exotoxina cauzeaz
necroz, dilatarea vaselor i creterea
permeabilitii, eliminarea fibrinogenului,
care coaguleaz cu formarea unei
pseudomembrane fibrinoase. Ea conine
bacterii, hematii, PMN i celule necrozate.
Se detaeaz dificil, nu se dizolv n ap,
este reproductibil in situ n cteva ore.
Membrana are tendin s se extind.
n forma malign difteria este nsoit de
edem al gtului, semne toxice i paralizia
vlului palatin.
Intoxicaia general afecteaz SNC (disfagie,
paralizii), sistemul cardio-vascular (miocardite),
suprarenalele (insuficien a suprarenalelor),
rinichii (nefroz)
Tulpini de C.ulcerans pot produce toxin identic
cu cea difteric
Diagnosticul de laborator al difteriei
Este URGENT!!!
Prelevate n funcie de forma clinic,
(membrana fals, tampoane de la periferia
membranelor, tampoane cutanate, conjunctivale,
etc), respectnd strict regulile de prelevare i
transport.
Metode de diagnostic
Examenul microscopic (Gram, Loeffler,
Albert), microscopia imunofluorescent
Examenul bacteriologic (izolarea, identificarea
culturii pure). Studierea toxigenezei obligator.
Se efectueaz prin RN cu ser antitoxic in vivo
(cobai), in vitro (RP Elek, Ouchterlony), sau
depistarea genei Tox n prelevat sau n cultura
pur prin PCR.
Examenul serologic retrospectiv
- RA cu seruri perechi (I sptmn i a III) i
cultur de C.diphtheriae. Titrul semnificativ
1:100 sau creterea titrului de Ac.
- Evaluarea titrului de antitoxine n serul bolnavului
(RN, RHAI, RLA, ELISA). La debutul bolii
antitoxinele sunt absente sau nu depesc nivelul
de 0,5 UI/ml
Receptivitatea la difterie poate fi
determinat prin:

- Testul Schick (in vivo): i/dermic 0,1 ml


toxin difteric (1/40 DLM).
Reacie+: eritem 1cm (receptivitate la
difterie),
reacie-: lipsa eritemului (persoan imun)
- RN in vitro / RP
- RHAI
- ELISA

Titrul antitoxinelor > 0,1 UI/ml protector


Titru inferior 0,01 UI/ml lipsa proteciei
Tratamentul difteriei
1. Seroterapie precoce (ser antitoxic
antidifteric, Ig). Neutralizeaz activitatea
toxinei, blocnd fixarea ei pe receptorii
celulari.
2. Antibioterapie (macrolide, tetracicline,
cloramfenicol, aminozide, beta-lactamine).
Asigur eradicarea germenilor.
3. Tratament simptomatic
Profilaxia specific a difteriei
Vaccinarea obligatorie cu anatoxin difteric a
copiilor conform calendarului de vaccinri. Exist
vaccinuri asociate: ADT, ADTP. Vaccinarea
primar cu ADTP la 2-4-6 luni; revaccinarea la
22-24 luni cu ADTP; la 6-7 cu ADT, la 14-15 ani
cu Td, revaccinarea adultilor cu Td la fiecare 10
ani incepand cu varsta de 20 ani.
Quinvaxem pentavaccin (DTP-HepB-Hib)
Recent a fost obinut un vaccin sintetic antidifteric.
Reprezint un polipeptid antigenic situat la
jonciunea fragmentelor A i B a toxinei difterice,
o molecul peptidic purttoare i un adjuvant
sintetic.
MICOBACTERIILE. MICROBIOLOGIA I
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL
TUBERCULOZEI
Familia Mycobacteriaceae
Genul Mycobacterium
Specii:
I. Responsabile de tuberculoza uman:
M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum,
M.canetti,M.microti (tuberculosis complex)
II. Agentul leprei: M.leprae (strict uman)
III. Micobacterii atipice, condiionat patogene:
M.avium, M.ulcerans, M.fortuitum, M.kansasii,
M.marinum, etc. Cauzeaz micobacterioze la
persoane imunocompromise
IV. Micobacterii nepatogene: M.smegmatis,
M.gastri, M.phlei
Caracteristica general a micobacteriilor:
Bastonae G+ drepte sau uor ncurbate,
necapsulate, asporogene, imobile, peretele
celular este bogat n acizi micolici, acido-
alcoolorezisten la colorarea Ziehl-Neelsen.
M.tuberculosis este o bacterie patogen strict
uman, responsabil de tuberculoz. Este
sensibil la cldur, lumin solar direct, raze
UV sau X. Rezistent la frig sau desicare. Este
puin sensibil la acizi, baze (se utilizeaz n
decontaminarea prelevatelor) sau detergeni i
foarte sensibil la soluia de alcool de 70.
Tulpina M.tbc genotipurile Beijing si Ural foarte
virulente, rezistente la preparate antituberculoase
Mycobacterium tuberculosis a fost cauza "Pestei Albe"
n sec. 17 i 18 n Europa. n aceast perioad
aproape 100 % din populaia Europei a fost infectat cu
M.tbc i 25 % din aduli au decedat.
R. Koch descopera agentul tuberculozei la 24 martie
1882 (1905 - premiul Nobel n medicin)
Tuberculoza (TB) n prezent este prima cauz de
deces din lume dintre toate infeciile bacteriene (3 mln
/an). Aproximativ 1/3 din populatie este infectata, anual
apar peste 9 mln cazuri noi de tuberculoza.
RM incidena TB: 1990 49 cazuri la 100.000 (2149);
2006 132 cazuri (5461 anual),
2013 106,4 (3788),
2014 95,6 (3399),
2015 83,9 (2981)
Caractere morfotinctoriale
M.tbc este un bastona fin sau uor ncurbat,
n frotiu se observ izolat, n grmezi sau
corzi. Se coloreaz n rou prin tehnica
Ziehl-Neelsen
Caractere de cultur
M.tbc este o bacterie strict aerob, foarte
exigent la cultivare. Toate mediile de
izolare au la baz ou coagulat. Mediul de
referin Lowenstein-Jensen (ou,
glicerin, asparagin, verde de briliant).
Alte medii solide Popescu (acid
glutamic n locul asparaginei), Finn
(glutamat de Na).
Micobacteriile patogene cresc lent
(perioada de generaie 20 ore), la
37C, pH 6,8-7,0.
Coloniile de M.tbc apar peste 2-4
sptmni, sunt rugoase, friabile,
conopidiforme, opace, de culoare crem-
bej (colonii R).
M.bovis i M.africanum formeaz colonii S,
mici, netede, nepigmentate, vizibile peste
4-8 sptmni.
Medii de cultur lichide (mediul 7H9, Middlebrook
7H12, Sauton, etc).
Mediul Sauton conine sruri minerale, asparagin,
glicerin. M.tbc crete n 8-10 zile sub form de
voal. Este utilizat i pentru repicarea tulpinilor de
BCG.
Activitatea biochimic a micobacteriilor
patogene
- Toate micobacteriile patogene produc o catalaz
termolabil, distrus la 68C timp de 20 min.
Celelalte micobacterii posed catalaz
termostabil.
- M.tbs i M.bovis hidrolizeaz ureea
- M.tbc produce acid nicotinic (niacin), reduce
nitraii n nitrii. M.bovis nu manifest astfel de
activitate.
Compoziia chimic i
factorii de patogenitate ai micobacteriilor

Lipidele constituie 20-60% din masa celulei. Se


cunosc 3 componente lipidice majore:
1. Acizii micolici. Previn distrugerea
micobacteriilor n macrofage, protejeaz
micobacteriile extracelulare de complementul din
ser. Condiioneaz transformarea macrofagelor
n celule epitelioide i celule gigante Langhans.
2. Cord-factorul (sulfo-lipid) perturb respiraia n
mitocondrii i inhib migraia PMN. Induce
cultivarea n corzi (cosie) a M.tbc.
3. Cerurile.
Lipidele din peretele celular al Mycobacterium
tuberculosis sunt asociate cu urmtoarele
proprieti ale bacteriei:
Impermeabilitate la colorare
Rezisten la multe antibiotice
Rezisten la substane acide i alcaline
Rezisten la activitatea litic a complementului
Rezisten la oxidare i supravieuire n
interiorul macrofagelor
Polizaharidele joac un rol important n formarea
Ac serici, conferind specificitatea imunologic.
Proteinele reprezint suportul imunitii celulare i
al hipersensibilitii tardive.
Patogeneza i formele clinice
de tuberculoz
Sursa de infecie omul bolnav cu TB
pulmonar bacilar (M.tbc, M.africanum) sau
bovinele bolnave (M.bovis). Un bolnav cu tbc
activ infecteaz 10-15 persoane anual.
Transmiterea se efectueaz pe cale aerian
(picturi, praf). Inhalarea a cel mult 10 bacterii
poate determina infecia. Rareori este posibil
contaminarea prin obiecte, alimente (lapte
nepasteurizat) sau mini contaminate.
Receptivitatea este influenat de vrst i factorii
de mediu: carene nutritive, alcoolism, stare
imunosupresiv, etc
Primoinfecia tuberculoas,
tuberculoza latent
Reprezint un ansamblu de manifestri
clinice, umorale i anatomice care se
desfoara n organism n urma primului
contact cu agentul TB.
Dup contaminare (mai frecvent in copilrie),
bacteriile ptrund n alveolele pulmonare
(90 %), unde sunt captate de macrofage n
care se multiplic (bacterii facultativ
intracelulare, mpiedic formarea
fagolizosomei). Apare o leziune
inflamatoare exsudativ nespecific.
Peste cteva sptmni (4-12) se dezvolt o
imunitate celular i leziunea exsudativ
evolueaz n leziune granulomatoas. Sub
aciunea unor citokine secretate de limfocitele T
(n special IFN gamma, TNF) are loc activarea
macrofagelor, care devin deja capabile sa
distrug micobacteriile. n acelai timp
macrofagele activate se difereniaz n celule
epitelioide i celule multinucleate gigante. Ele
sunt nconjurate de limfocite i fibroblaste.
Acesta este granulomul tuberculos, semn
caracteristic primo-infeciei. Infecia se extinde pe
cale limfatic, cu afectarea ganglionilor regionali.
- Primoinfecia inaparent. La cca 85% leziunile se
vindec i se pot autosteriliza. Nici o expresie
clinic sau radiologic.
- Infecia primar subclinic. Dac multiplicarea
bacteriilor este masiv, n leziunile tuberculoase
se realizeaz o necroz cazeoas (tuberculom).
Frecvent are loc calcifierea tuberculomului
(leziunea este vizibil radiologic), cu
autosterilizarea spontan sau cu persistena
unor bacterii n leziune. Bacteriile rmn
inactive, dar viabile timp de muli ani. Aceast
stare este cunoscut ca infecie tuberculoas
latent (90% din cazuri).
Consecinele primoinfeciei inaparente sau
subclinice: dezvoltarea imunitii
antituberculoase i a sensibilizrii tuberculinice.
Tuberculoza primar manifest necomplicat.
Pacienii au febr, astenie, pierdere n greutate,
etc. Etapa ganglionar poate fi depit cu
diseminri hematogene i afectarea pleurei,
meningelui, mduvei osoase, parenhimei
organelor. Leziunile pot evolua fie spre spre
cicatrizare, fie spre agravare.
Tuberculoza primar cu complicaii. Rareori (10%
cazuri), evoluia este defavorabil: masele
necrotice sunt evacuate n bronii, vase sanguine,
pleur sau pericard cu formarea unei caverne,
unde bacteriile se multiplic intens. Fistulizarea
ntr-un vas sangvin disemineaz infecia sistemic
(tuberculoza miliar). Starea general este alterat,
apare febr, tuse, uneori hemoptizie. Bolnavul
este contagios, eliminnd bacterii cu sputa.
Tuberculoza secundar. Se manifest n condiii
de scdere a reactivitii imune, prin reinfecii
masive sau reactivarea unor focare latente.
Focarele noi apar n ritm lent i evolueaz cronic
fr tendin de vindecare spontan.
Alte forme clinice de tuberculoz: ganglionar,
meningean, osteo-articular, uro-genital.
Imunitatea antituberculoas este celular,
nesteril. Hipersensibilitatea tardiv nsoete
imunitatea celular. Ac circulani nu au rol
protector.
Infecia tuberculoas Tuberculoza pulmonar

M.tbc prezent n organism M.tbc prezent n organism

Testul tuberculinic pozitiv Testul tuberculinic pozitiv

Examenul radiologic
Examen radiologic normal
evideniaz leziune
Frotiurile i culturile din Frotiurile i culturile din
sput sunt negative sput sunt pozitive
Tuse, febr, scdere n
Fr simptome
greutate
Frecvent contagios pn la
Necontagios
tratament
Nu este definit ca bolnav Definit ca bolnav de
de tuberculoz tuberculoz
Diagnosticul de laborator al tuberculozei
Prelevate: n funcie de forma clinic: sputa
matinal (5-10 ml), tubaje gastrice, urin, lichid
pleural, articular, peritoneal, LCR, bioptate, etc
n caz de necesitate se efectueaz
omogenizarea /decontaminarea cu NaOH i
concentrarea (prin centrifugare) a prelevatelor.
Metode de diagnostic
1. Examenul microscopic frotiuri colorate
Ziehl-Neelsen (bastonae purpurii izolate) sau
cu auramin (bastonae galbene pe fondul
negru). Sensibilitatea 104 bacili/ml
2. Examenul bacteriologic clasic izolarea culturii
pure pe mediile speciale, identificarea ei, testarea
sensibilitii la chimioterapice (prin metoda
diluiilor n mediu solid metoda concentraiilor
absolute). Rezultat peste 2-2,5 luni
Examenul bacteriologic rapid (sistemul BACTEC,
metoda MB/BacT). Rezultat pozitiv n 3-21 zile
Sunt utilizate medii lichide. Principiul metodei se
apreciaz scderea concentraiei oxigenului din
mediu odat cu multiplicarea micobacteriilor.
Lectura este automat.
3. Metoda biologic (inocularea la cobai). Servete
uneori pentru confirmarea virulenei micobacteriei
4. PCR pentru detectarea rapid al ADN
micobacteriilor direct n prelevate. Permite
detectarea genelor de rezisten la preparate
antituberculoase
5. Intradermoreacia la tuberculin (reacia Mantoux).
Se cerceteaz starea de hipersensibilitate cutanat la
tuberculin. Tuberculina reprezint un filtrat proteic
dintr-o cultur bulionic autoclavat de M.tuberculosis.
Pe faa anterioar a antebraului se injecteaz i/dermic
2; 5 sau 10 UI de tuberculin n volum de 0,1 ml.
Lectura peste 72 ore. Reacia pozitiv se manifest
printr-o induraie i congestie cu diametrul superior sau
egal cu 5 mm. Interpretarea se efectueaz n funcie de
contextul clinic
Reacia + indic c subiectul a fost infectat cu
micobacterii (primoinfecie), a fost vaccinat cu BCG
sau este bolnav de tuberculoz (n acest caz diametrul
depete 10 mm).
Reacia negativ exclude diagnosticul de tuberculoz
i indic receptivitatea individului la tuberculoz.
Interferon- (interferon-gamma) release
assays (IGRAs).

Se bazeaza pe capacitatea unor antigene


ale M. tuberculosis de a stimula producerea
IFN- de catre gazda. Aceste Ag lipsesc la
alte micobacterii sau la tulpina vaccinanta
BCG, astfel poate fi depistata infectia
tuberculoasa latenta.
Un test ELISA este utilizat pentru
cuantificarea interferonului.
Tratamentul tuberculozei
DOTS (Directly Observed Treatment Short
Course Chemotherapie). DOTS este o
strategie a OMS implementat n 1993.

Principiile DOTS
- tratament standardizat
- tratament bifazic constituit dintr-o faz intensiv i
faza de continuare
- asocieri de medicamente antituberculoase
- supraveghere direct a regularitii administrrii
tratamentului antituberculos
Din 2005 Program Naional de Control i
Profilaxie a Tuberculozei
MDR-TB tuberculoza multidrogrezistent
(tulpini rezistente la Izoniazid i
Rifampicin)
XDR-TB tuberculoza cu rezisten extins
(tulpini rezistente la chimioterapice de
linia a 2)
OMS 500.000 de cazuri noi de TB MDR pe
an
79% din cazurile tuberculozei rezistente sunt
cauzate de tulpini XDR.
n RM prevalena MDR-TB printre cazurile noi
a constituit n 2006 19,4%, 2015 - 26%.
Rata de succes al tratamentului:
2013 80,8%, 2014 82,6%.
1. Antibiotice cu spectru larg: rifampicin,
streptomicin, kanamicin, D-cicloserin
2. Fluorochinolone
3. Chimioterapice care inhib sinteza acizilor
micolici (Izoniazida, Pirazinamida,
Etambutolul, Etionamida)
Exigenele terapiei antituberculoase: a mpiedica
selecia mutanilor rezisteni i a steriliza
definitiv focarul.
n acest scop se utilizeaz asocierea a 3-4 droguri
pe o perioad de 6-12 luni.
Profilaxia specific

Vaccinarea obligatorie cu vaccinul BCG. El


reprezint o tulpin vie avirulent de
M.bovis. A fost obinut de Calmette i
Guerin n 1921 dup multiple repicri (230
pasaje) pe mediu cu cartof, bil i
glicerin.
Vaccinul se administreaz i/dermic la vrsta
de 4-5 zile de la natere. Revaccinarea
la 7 ani, apoi peste fiecare 5 ani
(persoanele cu reacia Mantoux negativ).
MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL TUSEI CONVULSIVE

Familia Halobacteriaceae
Genul Bordetella
Specii:
1. Bordetella pertussis (agentul tusei convulsive)
2. Bordetella parapertussis (agentul parapertusei)
3. Bordetella bronhiseptica (pneumonii, bacteriemii)
4. Bordetella avium
5. Bordetella holmensii (izolat din hemoculturi)
6. Bordetella hinzii (izolat din prelevate respiratorii)
7. Bordetella trematum (infecii cutanate i auriculare)
B.pertussis agentul cauzal al tusei convulsive
Caractere morfobiologice
Cocobacterii G-, asporogene, imobile, formeaz
microcapsul, n frotiu se dispun separat, n
perechi sau lanuri scurte.
Reprezint mi/o strict aerobe, foarte pretenioase la
cultivare.
Medii speciale de izolare:
- mediul Bordet-Gengou (geloz-snge cu amidon i
glicerin)
- geloz-cazein-snge-crbune activat
Mediul de transport Kuzneov (soluie tampon
fosfat, 0,5% agar-agar, 0,2% crbune activat)
Peste 3-5 zile de incubare n atmosfer
umed la 37 C apar colonii S mici,
bombate, lucioase, cu aspect de picturi
de mercur, hemolitice (corespund
bacteriilor virulente faza I), forme R
avirulente, faza IV.
Coloniile de B.parapertussis apar n 48
ore, B.bronchiseptica n 24 ore
B.pertussis manifest activitate biochimic
redus: oxidaza+, nu fermenteaz
glucidele, ureaza-, nitrat-reductaza- .
Structura antigenic a B.pertussis este
complex: exist Ag capsulare
polizaharidice, Ag proteice, Ag fimbrial
(hemaglutinina), Ag lipopolizaharidic.
Factorii de patogenitate
1. Adezine:

- Hemaglutinina filamentoas (purtat de


pili). Permite ataarea bacteriei la celulele
epiteliale ciliate ale tractului respirator, de
asemenea se fixeaz pe macrofage i
limfocite.
- Aglutinogene. Proteine de suprafa
situate pe fimbrii. Particip la ataarea
B.pertussis la celulele epiteliale.
- Pertactina. Protein a membranei
externe, permite fixarea pe membrana
celulelor eucariote
- Subunitatea B a toxinei pertusice.
determin adeziunea bacteriei la epiteliul
traheal i celule fagocitare.
2. Toxine
- Toxina pertussis (citotoxin de tip A-B).
Poate fi fixat pe suprafaa bacteriei sau
secretat n spaiul extracelular. Acioneaz
asupra diferitor celule eucariote, mrind
concentraia intracelular de AMP ciclic
(fragmentul A este o ADP ribosil transferaz).
Provoac hiperlimfocitoz, sensibilizare la
histamin, hipersecreie de insulin,
perturbarea activitii fagocitelor.
- Adenilat-ciclaza-hemolizin. Provoac
hemoliz, perturb activitatea bactericid a
PMN, monocitelor i macrofagelor i
stimuleaz secreia sero-mucoas a cilor
respiratorii.
- Toxina dermonecrotic. Se elibereaz n urma
lizei bacteriene. Determin inflamaie i necroz
local.
- Toxina citotraheal. Glicopeptid (fragmente de
peptidoglican) care inhib sinteza ADN, provocnd
distrugerea celulelor epiteliale ciliate. Stimuleaz
eliminarea IL-1, cauznd febr.
- Endotoxina

Patogeneza tusei convulsive


Sursa de infecie omul bolnav, n special n perioada
de debut al bolii.
Mecanismul de transmitere aerogen, prin picturi
B.pertussis manifest tropism pentru mucoasa
cilor respiratorii: faringe, trahee, bronii,
bronhiole, chiar alveole. Alterarea epiteliului ciliat
mpiedic eliminarea mucusului, el fiind eliminat
doar prin tuse. Tusea survine din cauza iritaiei
mucoasei de ctre toxina bacterian. Excitaia de
lung durat a receptorilor terminali ai nervului
pneumogastric determin un flux continuu de
impulsuri n bulbul rahidian, ce duce la formarea
unui focar de excitaie dominant. El atrage
excitaii nespecifice de la ali receptori, fapt ce
determin accesele de tuse, care devin tot mai
grave i mai frecvente.
Un stimul puternic poate stinge dominanta, cu
atenuarea tusei. Focarul este foarte stabil,
persist i dup dispariia bacteriei din
organism.
n evoluia tusei convulsive se disting 4 stadii
(perioade):
I. Perioada de incubaie (3-15 zile)
II. Perioada cataral, foarte contagioas.
Caracterizat prin tuse seac, rinoree (3-14
zile)
III. Perioada convulsiv (paroxistic). Accese
de tuse spasmodic, epuizant, asociat cu
cianoz, vom, convulsii. (2-4 sptmni)
IV. Perioada de convalescen (2-4 sptmni)
Complicaii grave sunt posibile la copiii
sugari: bronho-pneumonii, encefalite.

Imunitatea este durabil, umoral i


celular. Rol protector au Ac anti-toxin
pertussis i anti-hemaglutinin
filamentoas.
Diagnosticul de laborator
al tusei convulsive
Prelevate: mucoziti nasofaringiene sau bronice,
recoltate ct mai precoce.
Metode de diagnostic
1. RIF
2. Examenul bacteriologic (nsmnare cu tamponul
sau prin tehnic plcilor tuite)
3. Tehnnici de biologie molecular (PCR)
4. Examenul serologic (RA, RFC, ELISA). Reaciile se
pozitiveaz din sptmna a II a perioadei
convulsive. Se examineaz seruri perechi prelevate
la interval de 14-21 zile. Semnificativ este o cretere
de cel puin 4 ori a titrului Ac.
Tratamentul tusei convulsive
Eritromicin sau cloramfenicol cel puin 10 zile (pn la apariia
Ac)
Imunoglobulin uman antipertussis

Profilaxia specific
- Imunizarea artificial obligatorie:
1. Vaccinul ADTP. Componentul antipertusic este reprezentat
de o suspensie de bordetele de faza I, adsorbite pe adjuvant.
2. Vaccinul acelular conine unele componente bacteriene
(anatoxina pertussis, hemaglutinina filamentoas). Este mai
bine tolerat, dar mai puin eficace.
3. Vaccinul multicomponent acelular conine anatoxina
pertussis, hemaglutinina filamentoas, pertactina i 2 tipuri
de fimbrii
- Imunoglobulin uman antipertussis