Leccin 2.

Observacin de microorganismos

1. Fundamentos del microscopio ptico

1.1 El microscopio de campo claro
1.2 Tincin de microorganismos para su observacin al
microscopio de campo claro
1.3 Microscopio de contraste de fases
1.4 Microscopio de campo oscuro
1.5 Microscopio de fluorescencia

2. Microscopio confocal de barrido con lser

3. Fundamentos del microscopio electrnico

3.1 Microscopio electrnico de transmisin
3.2 Microscopio electrnico de barrido
 Recorrido
de la luz
Aumento Imagen
visualizada
ojo

Lente ocular

Imagen intermedia
(invertida respecto
a la muestra)

Lente objetivo
Muestra

Ninguno Condensador

Fuente de luz

Microscopio ptico
 Tincin de clulas para
la observacin microscpica

Extensin de una fina capa

de clulas sobre el porta

Adicin del colorante

lavado y secado
Secado al aire

Se coloca una gota de aceite

de inmersin sobre el porta y
se observa con el objetivo de
Fijacin por flameado del porta 100X
 Tincin de Gram
Tincin del frotis
Previamente fijado al calor,
Paso 1 con cristal violeta
Durante 1 minuto.
Todas las clulas se tien
de color azul-violeta.

Aadir Lugol,
Paso 2 dejar actuar 2 minutos

Todas las clulas siguen

de color azul-violeta.
Gram +

Decolorar con alcohol

Las clulas Gram +
Paso 3 siguen de color azul-violeta.
Las Gram negativas
se decoloran.

Tincin de contraste
Con safranina 2 minutos.

Las clulas G+
se ven azul-violeta.
Paso 4
Las G- rosas o rojas.

Gram -
 Microscopio de
Campo Claro
Alga verde
(eucariota)

Microscopio de
Fluorescencia

Bacteria filamentosa
Teida con naranja
de acridina

Microscopio de Contraste
de Fases
Saccharomyces cerevisiae

Microscopa
Confocal por Lser

Cianobacteria
filamentosa
Microscopio lser
de barrido confocal
 Sonda filogentica Colorante fluorescente

Microscopio de fluorescencia
Tincin clulas con sondas filogenticas unidas a un
colorante fluorescente
FISH aplicado a bacterias nitrificantes de aguas residuales

Rojo: bacterias oxidadoras de amonio (NH3 NO2-)

Verde: bacterias oxidadoras de nitritos (NO2- NO3-)
 Oxidacin anaerobia de metano en sedimentos marinos

Agregados de bacterias metanognicas (rojo)

rodeados por bacterias reductoras de sulfato (verde)

Cada tipo celular est teido con un colorante filogentico (FISH)

diferente

Bacterias
sulfato-reductoras
Bacterias metanognicas
Micrografa Lser Confocal de una
muestra de fango de aguas residuales
Microscopio Electrnico

Transmisin

Barrido