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2.2.2. Turbidimetra
3. Determinacin de la actividad celular:
Para evitar:
- Riesgo de contaminacin
- Gasto de material excesivo
Diluyentes:
NaCl al 0,85 %
Agua peptonada al 0,1 %
Solucin Ringer al
Volmenes:
90 ml (para el homogenato)
225 ml (para el homogenato)
450 ml (para el homogenato)
9 ml (para diluciones subsiguientes decimales)
9,9 ml (para diluciones subsiguientes centecimales)
Homogenato o primera dilucin (1/10)
2 ml
= 30 colonias/10 ml = 3 colonias/ml
Lmite entre plaqueo y NMP
Muestras slidas:
10 ml del homogenato o dilucin 1/10 (= 1 g )
dividido en 5 placas (+ 2 ml en c/u)
2 ml
= 30 colonias/g
Filtracin por membrana de 0,2 m
La membrana de celulosa
retiene a los
microorganismos en su
malla con poros de 0.20-
0.45m. Esta membrana
se transfiere a un medio
de cultivo para el
desarrollo de colonias.
Nmero Ms Probable
Tambin llamada tcnica de dilucin en tubo,
proporciona una estimacin estadstica de la
densidad microbiana presente en la muestra.
Se basa en que la probabilidad de obtener
tubos con crecimiento positivo disminuye
conforme es menor el volumen de muestra
inoculado.
Caldo MacConkey
2X 1X 1X
10 ml 1 ml 0,1 ml
de muestra
Nmero Ms Probable
(< 30 microorganismos/g o < 3 microorganismos/ml)
Interpretacin de la tabla de la gua terico-prctica
N clave: son tres dgitos. El 1 corresponde al ltimo lugar en que todos los
tubos de la serie dieron positivo ms los 2 inmediatamente inferiores.
NMP en el inculo
N de Tubos Positivos en
de la serie
intermedia de
Primera serie Serie intermedia ltima serie
tubos
0 0 0 < 0.03
0 0 1 0.03
0 0 2 0.06
0 0 3 0.09
0 1 0 0.03
0 1 1 0.061
0 1 2 0.092
0 1 3 0.12
0 2 0 0.062
0 2 1 0.093
0 2 2 0.12
0 2 3 0.16
0 3 0 0.094
Etc. Etc. Etc. Etc.
3 3 2 11
3 3 3 > 24
Para determinar el NMP/g o ml de muestra se aplica la
siguiente frmula:
NMP/g o ml = Valor NMP de la tabla / cantidad de muestra inoculada en
la serie intermedia
Ejemplo:
100 ml de 10 ml de 1 ml de 0,1 ml de
10-1 10-1 10-1 10-1
= 10 g o ml = 1 g o ml = 0,1 g o ml = 0,01 g o ml
3 3 2 0
1 ml
(b)
Alternativas de clculo de ufc/g o ml:
1. ufc/g o ml = N / vol x dil
donde:
ufc: unidades formadoras de colonias
N: nmero promedio de colonias obtenidas
para una dilucin dada
vol: volumen de inculo
dil: dilucin
2. Dividir N por la cantidad de muestra inoculada,
independiente del mtodo de plaqueo utilizado
es decir superficie o profundidad
Despus de incubar (dependiendo del grupo de
microorganismos a determinar)
Psicrfilos (a 4C)
Mesfilos (a 30 35C)
Termfilos (a 55C)
Termodricos (60C, 30 min)
Esporas bacterianas aerobias (80C, 10 min
e incubacin aerobia)
Esporas bacterianas anaerobias (80C, 10
min e incubacin anaerobia)
Expresin de resultados:
b = 2 ms de 2
1 = 1.0 X 100
Resumiendo
> 30/g o > 3/ml realizo plaqueo.
= 30/g o = 3/ml plaqueo en 5 placas 2 ml de la
muestra lquida o del homogenato de la
muestra slida (total = 10 ml de la muestra
lquida 1.0 g de la muestra slida).
< 30/g o < 3/ml puedo realizar NMP o
filtracin por membrana (si lo permite la
muestra, es decir si es filtrable por ej. Agua
potable)
Realizar esquema de diluciones y cul
o cules deber sembrar para:
a. 1,5 x 106 ufc/g (siembra en superficie)
b. 3,8 x 108 ufc/ml (siembra en profundidad)
c. 8,4 x 105 ufc/g (siembra en superficie)
d. 1,0 x 104 ufc/ml (siembra en profundidad)
e. 2,8 x 107 ufc/g (siembra en superficie)
f. 9,2 x 105 ufc/ml (siembra en profundidad)