PROTEINA MONOCLONAL:

SEMNIFICAIE I EVALUARE

Ileana Funduc
 SUMAR
Introducere
Relevan clinic
Analiza proteinei monoclonale din ser
Metode calitative
Metode cantitative
Analiza proteinei monoclonale din urin
Metode calitative
Metode cantitative
Analiza proteinei monoclonale n alte
lichide umane
Concluzii
 Tulburri asociate cu prezena unei gamopatii monoclonale
Tulburri de plasmocite Asociate cu infecii*
Gamopatie monoclonal de semnificaie nedeterminat Infecie cu virus de hepatit C
Gamopatie biclonal de semnificaie nedeterminat HIV/AIDS

Proteinurie Bence Jones idiopatic Tulburri dermatologice

Mielom osteosclerotic Scleromixedem
Boala Castleman Xantomatoz difuy plan
Plasmocitom solitar Urticarie i IgM

Mielom multiplu, Mielom multiplu smoldering Dermatoz subcorneal pustular

Xantogranulom necrobiotic
Tulburri limfoproliferative ale celulei B
Pioderma gangrenoas
Limfom non-Hodgkin
Leucemie limfatic cronic Diverse tulburri*
Gamopatie monoclonal post-transplant Boal Wilebrand dobndit
Deficien de inhibitor de esteraz C1 dobndit
Boala lanurilor grele
Fasciit eozinofilic
Tulburri ale esutului conjunctiv*
Crioglobulinemie, criofibrinogenemie
Lupus eritematos sistemic
Sindrom mielodisplazic
Artrit reumatoid Leucemie neutrofilic cronic
Sindrom Sjgren Neuropatie senzorimotor cu gamopatie monoclonal
Sclerodermie de semnificaie nedeterminat
Sindromul de infiltraie capilar
Artrit psoriatic
Leucemia limfocitar granular cu celule T mari
(Polimialgia reumatic) Boala aglutininelor la rece
* Unele din tulburri pot fi asociate cu prezena unei tulburri bazate pe limfoproliferare
 Interferene cu testele de
laborator
Valori sczute a HDL colesterol
Valori crescute de bilirubin
Valori modificate ale fosfatului
anorganic
Valori modificate ale LDL, colesterol,
protein C reactiv, creatinin,
glucoz, azot ureic, fier, calciu
anorganic
PROTEINA MONOCLONAL
N SER
METODE CALITATIVE
I
ELECTROFOREZA
Protein mono- i policlonal
 Rezultate fals negative
Valori normale ale proteinemiei totale, electroforezei i ale
imunoglobulinelor.
n boala lanurilor grele , datorit polimerizrii sau a
coninutului glucidic.
n boala lanurilor grele apar bandri late, heterogene.
n boala lanurilor grele apare rar bandare.
Proteina monoclonal apare ca un model policlonal cnd :
- complexeaz cu alte componente plasmatice;
- exist polimeri de IgA, agregate de IgG, dimeri i
pentameri de IgM.
n proteinuria Bence Jones cu concentraia lanurilor
uoare serice foarte mic, datorit excreiei rapide n
urin.
Unele mieloame IgD cu protein monoclonal foarte mic.
 Rezultate fals pozitive
Bandarea discret n - datorat fibrinogenului;
dac se adaug trombin i se repet electroforeza,
bandarea dispare.
Bandare n 2 a complexului Hb-haptoglobin.
Bandare n zona a transferinei n concentraie
mare n anemia cu deficien de fier.
Bandri n 2 i n sindromul nefrotic.
Bandri n 1 a creterilor nespecifice a reactanilor
de faz acut sau a hiperlipoproteinemiei.
GAMOPATIE BI- I TRICLONAL
II
IMUNOFIXAREA
Sensibilitatea detectrii proteinei monoclonale pn la concentraia
minim de 0,02g/dL

Imunofixarea identific:
Clonalitatea (tipul) proteinelor monoclonale reale.
Tipeaz proteina monoclonal nedectat pe electroforez.
Tipeaz gamopatiile bi- sau triclonale care prezint doar un pick,
celelalte fiind omise.
Difereneaz gamopatiile monoclonale de cele policlonale.
 III
IMUNOSUBTRACIA
METODE CANTITATIVE
I
IMUNODIFUZIE RADIAL
II
TURBIDIMETRIA I NEFELOMETRIA
= 3,3 19.4
= 5,7 26,3
k / = 0,26 1,65
PROTEINA MONOCLONAL N URIN
(PROTEINA BENCE JONES)
Formele n care proteina Bence Jones apare n urin.
METODE CALITATIVE
I II
Testul cu dipstick Testul de nclzire
Schimbarea culorii unui Precipitare, dizolvare,
indicator tamponat reprecipitare la diverse
funcie de cantitatea de temperaturi.
protein legat de Rezultate fals pozitive i
acesta. fals negative, nu trebue
Nu este totdeauna sensibil, folosit.
nu trebue folosit.
III
ELECTROFOREZA
 IV
IMUNOFIXAREA
Alicotul de urin se concentreaz pn la 3g/dL; sub 100 mg/24/h se
concentreaz cel puin de 100 ori.
Sensibilitatea (limita de detecie) pentru proteinele BJ este aproximativ cci
metoda nu este cantitativ. Au coloidal d sensibilitatea cea mai mare
(1-2 mg/L), Coomasie pn la 10 mg/L, sau chiar mai puin.
 ANTISERURI DE LANURI UOARE
Antiserurile de lanuri uoare
libere sunt scumpe i deseori
nespecifice, insuficient de potente
sau cu o slab aviditate.
Antiserurile de lanuri uoare
libere se fac utile cnd se
suspecteaz proteina Bence
Jones ce comigreaz cu o Ig
monoclonal.
 DIVERSE MODELE DE SEPARARE
1. Fragment de Ig nerecunoscut de As i libere; se
folosesc As-uri pentru recunoaterea L libere i legate
(proteinurie BJ fr bandare monoclonal n ser).
2. Pe lng bandarea de lan uor a proteinei monoclonale
poate fi i o a doua bandare de acelai tip. Este vorba de
monomeri sau dimeri de lanuri uoare ai proteinei
monoclonale (fragment al Ig intacte). Aspectul nu are
relevan clinic.
3. Ladder light chain sau pseudo-oligoclonal pattern benzi multiple
discrete, care sunt L libere policlonale nrudite.
Ipoteze : - benzile comigreaz datorit varietii limitate ale
substituiilor de aminoacizi permise prin recombinarea constrns
pe genele de lan uor.
- reprezint heterogenitatea restricionat a L ce se
produc n exces i apar n urin dup leziuni glomerulare i
tubulare.
 METODE CANTITATIVE
Excreia proteinelor BJ este influenat de :
gradul de polimerizare;
funcia renal;
viteza de depozitare a proteinei n esuturi.
Cum cuantificarea nu este legat direct de masa celulelor
tumorale, pentru evaluarea cantitativ a lor s-a propus :
1. Proteinele urinei de 24h
2. Electroforeza i imunofixarea urinii concentrate
3. Scanarea densitometric a pick-ului de protein BJ i
determinarea raportului :
% pick proteine BJ / proteinele urinii de 24h
 LIMITE ALE EVALURII PROTEINELOR
BENCE JONES
Metodele de msurare a proteinelor BJ sunt inacurate.
Diferitele proteine au diferite afiniti pentru coloranii folosii la
electroforez, deci rspunsul densitometric nu este totdeauna linear.
Delimitarea densitometric a fraciunilor este grea n cazul benzilor
multiple sau n cazul comigrrilor.
Antiserul cu amestec de lanuri uoare libere i legate reacioneaz diferit
cu lanurile uoare monoclonale.
Cum masa molecular a proteinelor BJ este variabil i neprevizibil
(depinde de concentraie, tip de lan uor, pH etc), As-ul poate omite sau
recunoate parial lanurile uoare monoclonale, se influeneaz reacia imun,
se invalideaz calibrarea i cuantificarea este nereal.
Precizia metodelor cantitative la extremele domenilor dinamice este redus.
Nu exist substane de referin pentru lanul uor monoclonal, ceea ce
conduce la lips de acuratee.
Metodele de cuantificare nu sunt standardizate, exist diferene ntre ele.
PROTEINA MONOCLONAL N ALTE
LICHIDE UMANE
l.c.r.
Cnd sunt prezente plasmocitele
sau celulele limfoide, se
examineaz proteina
monoclonal prin imunofixare.
Cnd proteina monoclonal se
interpune n comunicarea
creier-snge, se efectueaz i
imunofixarea n ser.
Cnd o Ig monoclonal exist n
l.c.r. i nu n ser, este vorba de
un limfom sau plasmocitom al
sistemului nervos central.
lichid pleural
Prezena unei proteine
monoclonale, atrage
ntotdeauna dup sine i
prezena n ser.
Proteina monoclonal fiind
produs de o tumoare de
plasmocite, trebue fcut
i o examinare citologic a
lichidului pleural.
 CONCLUZII
Efectuarea succesiv a determinrilor
ncepnd cu cele calitative i finaliznd cu cele
cantitative - care se coreleaz ntre ele - este
obligatorie pentru obinerea unui diagnostic
corect.
Reluarea acestor determinri n aceleai
condiii este util pentru monitorizarea clonei n
timpul tratamentului i a corectitudinii
rezultatelor.