ANALISIS DE LEVADURA

COMERCIAL
Saccharomyces cervisiae
PARA LA REMEDIACIN DE
SUELOS CONTAMINADOS
POR HIDROCARBUROS

Presentado por:

Jorge Alejandro
Escalera Villarreal
Gmez Palacio, Dgo. Noviembre de 2016
I. Introduccin:
Descripcin del problema
Justificacin
Objetivos
Hiptesis
II. Materiales y mtodos
III. Resultados y discusin
IV.Conclusiones
Descripcin del
problema

El manejo inadecuado de los

materiales y residuos
peligrosos ha provocado un
grave problema de
contaminacin de suelos. El
problema de los suelos
contaminados con
hidrocarburos radica hace
pocos aos y no exista
conciencia del grado de
dificultad y el costo que
representa la remediacin de
estos suelos (Saval, 1995).
 Uno de los grandes
problemas que enfrentan
las actividades de una de
las empresas ms
conocidas a nivel mundial,
petrleos Mexicanos
(PEMEX) es la generacin
de residuos peligrosos los
cuales representan el 22%
de las emisiones y
descargas totales de esta
industria, as como los
derrames accidentales o
provocados en el agua,
suelos y aire (PEMEX,
2000).
Como respuesta a la creciente contaminacin tanto de suelo y
agua, generada por derrames accidentales y provocados de
hidrocarburos del petrleo, se han implementado diversos
sistemas biolgicos encaminados a la limpieza y recuperacin de
las reas impactadas por estos contaminantes orgnicos.
Estudiar la capacidad de la levadura Saccharomyces cerevisiae para
degradar hidrocarburos presentes en combustibles fsiles.

- Observar el desarrollo de la levadura

estresada a una concentracin de
hidrocarburo del 5%
La levadura oxida y degrada los compuestos
orgnicos del sustrato empleado.
 El proyecto se realiz en los
laboratorios de gentica, biotecnologa
y de bioprocesos de la Universidad
Politcnica de Gmez Palacio.
 Se consigui la muestra de la levadura a sembrar
y se prepar medio YEPD slido para un volumen
de 80mL con 0.8gr de extracto de levadura, 1.6gr
de dextrosa, 1.6gr de peptona y 1.2gr de agar
bacteriolgico con una concentracin de sustrato
del 5% (4mL) para aislar la levadura en el medio.
Dejamos incubar a 28 C durante 48 horas
(FGRS, 2010).
 Se prepar un medio
YEPD lquido para un
volumen de 300mL con
3gr de extracto de
levadura, 6gr de dextrosa
y 6gr de peptona con una
concentracin de sustrato
de 5% (15mL) para
inocular la levadura
previamente aislada, con
un palillo de dientes
esterilizado se toma una
muestra de la levadura y
se deposita el palillo en el
medio lquido. Dejamos
incubar a 28 C de 12 a
16 horas (CSH
PROTOCOLS, 2010).
 Se necesitaran 4.5gr de (NH4)2SO4, 1.8gr
de MgSO4 *7H2O, 1.8gr de K2HPO4 y
0.09gr de FeSO4 *7H2O para un volumen
de 900mL. Disolver cuidadosamente los
ingredientes en el orden indicado (Ma. De
los Angeles, et. al, 2004) .
 Diseo de reactor
Se esterilizar el reactor de
volumen de 1L junto con el
medio mnimo de sales (900mL)
a una temperatura de 121 C
durante 15 minutos. Despus de
esterilizar se agreg 5% (50mL)
del hidrocarburo y luego se
inoculo con la muestra del
preinculo (50mL), todo esto en
condiciones de esterilidad.
Posteriormente se configuro el
reactor con una agitacin de
70rpm y se dej el tratamiento
por 7 das para observar la
degradacin del hidrocarburo y
presenciar el aumento de
biomasa (Ali Ashgar N., et. al,
2015).
 Medicin de densidad ptica
Se toma una muestra del reactor de 1mL y la depositamos
en un tubo eppendorf, se toma 1mL del blanco y se deposita
en otro tubo eppendorf.

Para medir la densidad configuramos el espectrofotmetro a

600nm y vertimos el contenido de los tubos eppendorf en
dos celdillas diferentes, medimos primero el blanco y
despus introducimos la muestra. Registramos los datos
arrojados (Fquim, UNAM).
Medicin de protenas extracelulares
Las muestras previamente tomadas se meten a
centrifugar durante 10:00 min a una velocidad de
10000rpm, a 4 C (Marca: HERMLE LaborTechnik,
Modelo: Z326 K). Una vez terminado el proceso de
centrifugado se sacan las muestras con cuidado de
no homogenizar el pellet con el sobrenadante. Se
vaca el sobrenadante en otro tubo eppendorf.
 Preparamos las muestras para medirlas en
el espectrofotmetro, en una celdilla
aadimos 800L de agua destilada y 200L
de reactivo Bradford para el blanco, en una
segunda celdilla aadimos 700L de agua
destilada, 200L de reactivo Bradford y
100L de la muestra del sobrenadante del
blanco de la muestra, en una tercera celdilla
se aaden igualmente 700L de agua
destilada, 200L de reactivo Bradford y
100L del sobrenadante de la muestra D5%.
 Configuramos el espectrofotmetro a
595nm, medimos blanco, una vez
medido, introducimos nuestra primer
celdilla del blanco de la muestra y
registramos el resultado, luego se
introduce la siguiente celdilla de la
muestra D5% y registramos el resultado.
 Das O.D. (600nm)
1 0.069
2 0.091
3 0.114
4 0.128
5 0.294

0.35
O.D.
0.3
0.25
0.2
0.15 O.D.
O.D.

0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6
t (Das)
 Das Protenas extracelulares (595nm)

1 0.030

2 0.031

3 0.060

4 0.049

5 0.025

0.07
Protenas extracelulares

0.06
Protenas extracelulares (595nm)

0.05

0.04

0.03 Protenas extracelulares

0.02

0.01

0
0 1 2 3 4 5 6
t (Das)
 CONCLUSIN

La levadura comercial Saccharomyces cervisiae

M44 fue capaz de degradar satisfactoriamente
los compuestos orgnicos del hidrocarburo
utilizado, confirmado por el aumento de
densidad en el medio que tiene como nica
fuente de carbono al diesel. Con esto se puede
decir que los mtodos biolgicos siguen siendo
una arma efectiva contra la contaminacin de
suelos y mantos por el impacto antropognico.
Por su atencin

Gracias!