Actividad enzimtica

de - amilasa

INTEGRANTES:

Azaa Colchado Tany

Fabin Poma Yenny
Moreno Cisneros Karen
Paredes Narvez Tefilo
Prez Montes Mara
Polo Cabrera Estefani
Terrones Zavaleta Fernanda
1. PREPARACIN DE LA SOLUCIN STOCK

0,5 g de almidn
100 ml de agua
destilada

sustrato
 PREPARACIN DEL BUFFER ACETATO 0.1 M a pH 5

y
Extraer de:

Sol. A: 148 ml
Sol. B: 352 ml

Solucin A Solucin B Aforar:

(acido Acetico (acetato de sodio 500 ml
0,2 M) 0,2 M)
Medir:
pH 5

Disolver: 11,55 Disolver: 27,2 g de

ml de Ac. Acetato
Actico de Sodio
Aforar: 1 Litro Aforar: 1 Litro
 2. DETERMINACIN DE LA CINTICA ENZIMTICA

Extraer 4,5 ml Extraer 4,5 ml

Solucin stock
Buffer acetato
de almidn

Agregar a cada tubo

Blanco T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10

Agregar a cada tubo 20 ul a cada

tubo
Extraer 20 ul
Stock de enzima
Extraer muestras a cada 2
minutos
Blanco T0 T10
 Agregar enzima

Agregar 1 ml o 20 l
de enzimas

4,5 ml de
sustrato
4,5 ml de
buffer

Blanco T0 T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11

 Lectura con DNS

2.5 ml H2O
0.5 ml DNS destilada
Agua hirviendo Hielo

1 ml
0.5 ml
volumen
muestra

Agitar 1 a 2 Dejar 5 Dejar 5

lectura

Espectrofotmetro
(540 nm)
Simulacin de la cintica
enzimtica alfa amilasa
Concentracin de enzima
Buffer Acetato Almidn
Tubo (mL de extracto
(mL) 5%
enzimtico)
Blanco 0 4,5 4,5
0 0,02 4,5 4,5
1 0,02 4,5 4,5
2 0,02 4,5 4,5
3 0,02 4,5 4,5
4 0,02 4,5 4,5
5 0,02 4,5 4,5
6 0,02 4,5 4,5
7 0,02 4,5 4,5
8 0,02 4,5 4,5
9 0,02 4,5 4,5
10 0,02 4,5 4,5
Posibles datos obtenidos del espectrofotmetro

Tiempo Concentracin
Tubo
Blanco -- --
0 -- 0
1 0 0,117
2 2 0,258
3 4 0,328
4 6 0,479
5 8 0,563
6 10 0,656
7 12 0,782
8 14 0,898
9 16 0,984
10 18 1,032
 Tiempo vs Concentracin
1.2

1 y = 0.052x + 0.1415
R = 0.9942
0.8
[E] g/L

0.6

0.4

0.2

0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20
TIEMPO (min)

Tiempo vs Concentracion Linear (Tiempo vs Concentracion)

Valores de Vmax y Km

Vmax 7,06713781 g/L.min

Km 0,36749117 g/L