Relaii cantitative structur-

aciune
Quantitative Structure-Activity
Relationship
 QSAR

modelele QSAR studiaz relaia cantitativ ntre

structura chimic a moleculelor organice i proprietile
lor farmacologice i toxicologice
permite, folosind modele matematice i statistice,
prezicerea eficacitii unui nou compus dintr-o serie de
derivai
studiile in silico se bazeaz pe faptul c interaciunea
SA receptor are loc prin legturi chimice simple
(cunoscute) i modificarea de conformaie care are loc n
urma legrii determin efectul biologic al compusului
 QSAR

modele de tip structure-based: pornind de la

structura moleculei int (enzim, receptor) i a
situsului activ se caut structura potrivit. Practic
se caut o structur complementar tiind
caracteristicile electrochimice ale moleculei int.
modele bazate pe structura ligandului: se folosesc
cnd nu se cunoate structura moleculei int sau
efectul apare prin interaciune cu mai multe
molecule int.
 modele QSAR

1. Modele statistice: utile studiului unui compus nou

ntr-o serie de omologi (aceeai structur de baz,
cum modific substituenii efectul ?)
1.1. Analiza Hansch
1.2. Analiza Free-Wilson
2. Modele topologice: iau n calcul aranjarea steric
a moleculei i forma acesteia
 Modele QSAR
1. Modele statistice
1.1. Analiza HANSCH
relaia de energie liber a lui HANSCH
are loc o corelare matematic a efectul biologic cu
proprietile fizico-chimice caracteristicile structurii compusului

C concentraia molar a SA necesar apariiei efectului

biologic urmrit
logP logaritmul zecimal al coeficientului de partiie octanol-
ap
constanta de substituent a lui Hammet
Es constanta steric a lui Taft
k constante dependente de sistemul studiat
 Lipofilie (coeficient de partiie, logP)

coeficient de partiie octanol/ap

logP i logD
potenial de absorbie (AP)

Fnon fracie neionizat

S0 solubilitatea n ap a formei neionizate
VL volumul sucului intestinal (aprox 250ml)
Xo cantitatea de substan adminstrat
 Lipofilie (logP)
lipofilia se estimeaz prin stabilirea coeficientului de
partiie octanol-ap
logP constant a formei neionizate: adevratul
coeficient de partiie
logD constant a amestecului SA ionizat + neionizat:
constant aparent de distribuie n funcie de pH

metode de determinare: n plnie de separare (metod

direct), metode cromatografice, metode teoretice
(constanta de hidrofobicitate )
exist o corelaie parabolic ntre logP i absorbie
valoare ideal pentru absorbie 2 4
 Constanta de lipofilie - hidrofobie ()

+ hidrofob
- hidrofil

CH3 t-Bu OH CONH2 CF3 Cl Br F

0.52 1.68 -0.67 -1.49 1.16 0.71 0.86 0.14

Corelaia logP, logD, pKa i pH
 LogP - exemple
eter: 0,98; cloroform: 1,97; halotan: 2,3
efectul substanelor antialergice asupra SNC: romergan
(logP 4,4), loratadin (logP 3,8)
derivai barbiturici: logP scade n ordinea: secobarbital >
pentobarbital > fenobarbital
 1.1. Analiza HANSCH
constanta de substituent a lui Hammett ()

substituenii modific reactivitatea unor molecule prin

modificarea distribuiei electronice n molecul
(distribuia electronilor ntr-o molecul determin n
majoritatea cazurilor i efectul biologic, ex:
morfinomimetice structuri diferite efecte similare)
n cazul acizilor organici efectele electrono respingtoare
sau electrono atrgtoare modific capacitatea de
ionizare a gruprii -COOH
 1.1. Analiza HANSCH
constanta de substituent Hammett

realaia lui Hammett:

Kx constanta de disociere a acidului benzoic substituit

K0 constanta de disociere a acidului benzoic (substituent: H)
k constanta de vitez a unui proces
x substituent
constanta de substituent Hammett

>0 efect electrono atrgtor

<0 efect electrono respingtor
 1.1. Analiza HANSCH
Constanta de substituent Hammett

relaie liniar ce descrie energia liber: constanta de

disociere a acidului benzoic este corelat cu variaia de
entalpie
 1.1. Analiza Hansch
Constanta de substituent Hammett

este o relaie liniar deoarece reprezentnd logKx/K0 n

funcie de obinem o dreapt cu panta

substituent respingtor de electroni substituent electrono atrgtor

forma final a ecuaiei lui Hammett
 1.1. Analiza Hansch
Constanta vitezei de reacie
constant dependent de structura de baz. Ex: valoarea
pentru o serie de acizi nesubstituii

o valoare mare a lui arat c substituentul poate aduce o

modificare mai mare n reactivitate comparativ cu un sistem n care
valoarea este mai mic
constanta arat susceptibilitatea structurii de baz la modificri
aduse de substitueni
 1.1. Analiza HANSCH
Constanta steric a lui Taft, Es

ks constanta de hidroliz a esterului studiat

kCH3 constanta de hidroliz a esterului metilic
Es volaore 0 pentru hidrogen i - pentru restul
substituenilor
 1.1. Analiza HANSCH
Constanta steric a lui Taft, Es

Ex: hidroliza derivailor organo-fosforici

 Ali parametrii sterici
refractivitate molar: reprezint volumul real al
moleculei (n indice de refracie, MW masa
molecular, d densitatea
importan deosebit n reacia receptor - SA

(n 1) MW
2
MR 2
(n 1) d

 Exemple QSAR
analogi ai capsaicinei
X log(1/EC50) MR Es

H 4.93 1.03 0.00 0.00 0.00

Cl 5.91 6.03 0.71 0.23 -0.97
NO2 5.34 7.36 -0.28 0.78 -2.52
CN 4.58 6.33 -0.57 0.66 -0.51
C6H5 6.62 25.36 1.96 -0.01 -3.82
NMe2 5.36 15.55 0.18 -0.83 -2.90
I 6.46 13.94 1.12 0.18 -1.40
 Exemple QSAR
Analogi ai capsaicinei
X EC50(mM) log(1/EC50)

H 11.80 4.93
Cl 1.24 5.91
NO2 4.58 5.34
log(1/EC50) = -0.89 +
CN 26.50 4.58
0.019 * MR +
0.23 * p + C6H5 0.24 6.62
-0.31 * s +
NMe2 4.39 5.36
-0.14 * Es
I 0.35 6.46
 Exemple QSAR
Hidrocarburi policiclice aromate (PAH)

7,12-Dimethylbenzanthracene Benzanthracene
(structur neplanar, cancerigen) (structur plan, necancerigen)
 Exemple QSAR
Legare de receptor: agonist - antagonist

O O

O O

OH
OH
 Modele QSAR
1. modele statistice
1.2. analiza Free-Wilson
importan mai mic ca a ecuaiei lui Hansch
studiaz structura de baz i modificrile care apar sub
influena substituenilor
nu folosete parametrii fizico-chimici !!!
log 1/C = + zij xij
C concentraia necesar apariiei unui efect dat
efectul structurii de baz
zij efectul substituentului i n poziia j asupra efectului
biologic
xij valoare 1 dac substituentul i este prezent, valoare 0
dac este absent
semnul pozitiv indic o cretere a efectului, semnul negativ
indic o scdere a efectului
 Modele QSAR
2. modele topologice
2.1. Sterimol Verloop
reprezint sfericitatea moleculei
 Modele QSAR
2. modele topologice
2.2. Indexul de conectivitate KIER
utiliznd structura bidimensional a moleculei se
determin conectivitatea molecular tip KIER ()

se atribuie fiecrui atom

un nr egal cu nr de atomi vecini
(nu se iau in calcul atomnii de H)

indice de legare = produsul

indicilor atomici

concentivitate = (1/indice de legare)1/2

conectivitatea moleculei = suma

tuturor conectivitilor

conectivitate = (1/indice de legare)1/2

Permeabilitate
Factori care impedimenteaz absorbia
per os
doar o fracie din totalul de substan activ administrat
ajunge n circulaie
Ma = M0 x ff x fb x fm
Ma cantitatea de SA ajuns n circulaie
M0 cantitatea de SA administrat
ff fracia de SA ajuns n celulele membranei intestinale
fb fracia de SA nemodificat ce a traversat membrana
intestinal
fm fracia de SA ce a trecut prin ficat fr a suferi
modificri
Transport transmembranar
 Difuziune pasiv

cel mai des ntlnit mecanism n cazul SA (95%)

cel mai des are loc n intestinul subire (90%)
procesul nu necesit energie din partea organismului
fora motrice a procesului este gradientul de concentraie pe
cele 2 pri ale membranei
este un proces de difuzie simpl guvernat de legea lui Fick I
 Legea lui Fick I

J viteza de trecere prin membran (mg/s)

dM cantitatea de SA ce a travesrat membrana (g, mol)
A suprafaa membranei (cm2)
D constanta de difuzie (m/s)
C1 i C2 concentraiile de cele dou pri ale membranei
(mol/l)
h grosimea membranei (cm)
 Legea lui Fick I
constanta de distribuie (K) ~ logP

Cd conc SA n intestin
Cr conc SA n snge

Cd Cr
 Coeficient de permeabilitate

Constant de permeabilitate (cm/s)

 Factorii care influeneaz
permeabilitatea
masa molecular
dimensiunea moleculei
pKa
solubilitatea
sarcina electric a moleculei
gradul de ionizare
lipofilia
 Determinarea permeabilitii
arat capacitatea moleculei de a traversa membrana biologic
cel mai bun metod de prezicere a absorbiei gastro-
intestinale
la determinarea permeabilitii se simuleaz condiiile din
intestinul subire
P0 permeabilitate intrinsec, se refer la SA neionizat
Peff - permeabilitatea efectiv, se refer la formele ionizat + neionizat
Papp permeabilitate aparent
n caz ideal Peff=Papp
varinata ideal: determinare in vivo
 Estimarea permeabilitii
1. metode in vitro
1.1. folosirea membranelor izolate
folosirea membranelor naturale de origine animal
everted gut technique
Ussing chamber
 Estimarea permeabilitii
1. metode in vitro
1.2. folosirea membranelor artificiale
PAMPA - Parallel Artificial Membrane Permeability Assay
membran artificial:
dioleilfosfatidilcolin/fosfatidiletanolamin dizolvate n
dodecan
 Estimarea permeabilitii
1. metode in vitro
1.3. folosirea celulelor vii
Caco-2: linie de celule provenite din adenocarcinomul
uman de la nivelul colonului (human epithelial colorectal
adenocarcinoma cells)
 Estimarea permeabilitii
1. modele in vitro
1.3. folosirea celulelor CACO-2

este prezent i efluxul asigurat de P-glicoprotein

dQ/dt cantitatea de SA care a trecut membrana n timpul t

C0 concentraia iniial
A suprafaa membranei
se determin i coeficientul de recuperare (%)
Comparare PAMPA cu CACO-2
 Compararea PAMPA cu CACO-2

Punct de vedere PAMPA Caco-2

Tipul de procese Difuziune simpl + procese de

Difuziune simpl
urmrite transport active (+/-)

Rapid, uor de Lent, necesit pregtiri

Timpul de analiz
efectuat anterioare

Celulele necesit atenei

Posibilitate de
Automatizabil special, neautomatizabil,
automatizare
diferene ntre laboratoare

Tipul membranei Artificial Cultur n strat unicelular

Cost Redus Crescut

Compararea PAMPA cu CACO-2
Corelaie absorbie - Papp
 Biopharmaceutical Classification System (BCS)
Sistemul de clasificare biofarmaceutic

Clasa Solubilitate Permeabilitate

I (diazepam, lidocain,
verapamil)

II (NSAID, ketoconazol,
carbamazepin)

III (aciclovir, atenolol,

captopril, paracetamol,
tetraciclin)
IV (furosemid,
neomicin)
 Sistemul de clasificare biofarmaceutic
determinarea solubilitii: solubilitate bun: n intervalul de
pH 1-7,5 SA (n doza preconizat) se dizolv n <250 ml soluie
determinarea permeabilitii: substane model:
permeabilitate proast: atenolol, furosemid, manitol
permeabilitate bun: cafein, metoprolol

Etape care determin viteza de absorbie

I. Dezagregarea comprimatului
II. Solubilizarea
III. Trecerea prin membran
IV. Se evit administrarea per os
 Regula lui Lipinski (Lipinski's Rule of Five)
- cerine pentru o bun absorbie
Masa molecular <500 Da
numrul de legturi de H ca donor (-OH, -NH2) < 5
numrul de legturi de hidrogen ca acceptor (N, O) < 10
logP < 5
Factori fiziologici ce intervin n procesul de
absorbie
viteza de golire a stomacului
motilitatea gastro-intestinal (motilitatea
intestinal - absorbia)
prezena alimentelor: alimente bogate n grsimi,
alimente bogate n proteine (crete pH-ul), alimente
bogate n fibre, grapefruit
pH-ul
vrsta: nou-nscui pH gastric crescut, motilitate
sczut, etc