Centro

Universitario
Coyhaique

HISTOEMBRIOLOGA
Introduccin
Dra. Laura Snchez Jardn, agosto 2015
Histologa
Del griego hists "tejido" y loga "ciencia"
Histologa: f. biol. Rama de la biologa que estudia la composicin
y estructura microscpica de los tejidos orgnicos.
(Diccionario Enciclopdica Vox 1. 2009 Larousse Editorial, S.L.)
Anatoma morfolgica
Ms que la morfologa microscpica: estructura y funcin
 Histologa
Marcello Malpighi (1628-1694)
Accademia del Cimento
De viscerum structura (1666)

Identific la red pulmonar y capilar de conexin de

arteriolas con vnulas (microcirculacin)
Embriologa
Del griego embrios embrin, beb an no nacido" y
loga "ciencia"
Embriologa: f. biol. Ciencia que estudia la formacin y desarrollo
de los embriones.
(Diccionario Enciclopdica Vox 1. 2009 Larousse Editorial, S.L.)

Biologa del desarrollo

Morfognesis y desarrollo embrionario desde la gametognesis
hasta el nacimiento.
Embriognesis: formacin y desarrollo de un embrin
 Biologa molecular Bioqumica

Anatoma
Biologa celular Fisiologa
macroscpica

Medicina clnica

Histoembriologa
Conceptos bsicos
Tejidos animales
Losorganismos pluricelulares poseen clulas
especializadas que forman tejidos que forman rganos.

Tejido es una unidad morfofuncional continua,

delimitada en mayor o menor grado, formada por un
tipo o una combinacin especfica de clulas diferentes,
sus productos y derivados, que forma rganos o se
encuentra entre los rganos.
Los componentes celulares (clulas) de un mismo tejido pueden
diferenciarse por su estructura, funciones y origen.
Niveles de organizacin celular
CLULAS

TEJIDOS: Asociacin de clulas idnticas

RGANOS: Asociacin de tejidos

SISTEMAS O APARATOS: Asociacin de rganos con una funcin comn

ORGANISMO
Los rganos de los animales estn compuestos por numerosos tejidos

Existen 200 tipos diferentes de clulas en el ser humano, que se clasifican

en 4 tipos de tejidos: epitelial, conectivo o conjuntivo, muscular y nervioso
Sistemas de rganos
 Tejidos animales
Clulas
Lquido intracelular (LIC)
Matriz extracelular (MEC)
Lquido extracelular (LEC):
intravascular (IV) o plasma: 25%
Intersticial (IT): 75%
Membranas
biolgicas
 Cortes
Longitudinal
Terminologa bsica

Sagital
Eje
craneocaudal
Coronal
Posiciones anatmicas
Transversal
Craneal o rostral (superior)
/ Caudal (inferior) Oblicuo

Dorsal (posterior)
/ Ventral (frontal, anterior)
Plano coronal Eje
Eje dorsoventral
Medial / Lateral laterolateral
Plano sagital
Proximal / Distal
From Gartner LP,
Hiatt JL: Color
Textbook of
Histology, 3rd ed.
Philadelphia,
Saunders, 2007, p 4.
 Cuntos tipos de microscopios existen?

Tcnicas histolgicas
Conjunto de operaciones a que se somete una materia
organizada, a fin de facilitar su estudio al microscopio
Tcnicas histolgicas
El examen al microscopio se hace
generalmente por luz transmitida, lo
que significa que la luz debe
"atravesar" el objeto a examinar para
llegar, despus de haber pasado por
las distintas lentes del aparato, a
impresionar a nuestro punto visual.
Por esa causa, debe ser reducido a
laminas muy delgadas (casi
transparentes), las cuales lograremos
efectuando una serie de operaciones.
 Proceso
histolgico
Conjunto de mtodos y tcnicas
utilizados para estudiar las
caractersticas morfolgicas y
moleculares de los tejidos.

http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/1-proceso.php
1. Obtencin del tejido
Animales de laboratorio o humanos.
Entre los animales de observacin se eligen aquellos que por
su semejanza con el ser humano pueden sustituirlo sin
grandes diferencias, y cuya obtencin puede ser fcilmente
efectuada en el laboratorio.

Fases:
1. Muerte del animal: traumatismo,
intoxicacin (narcosis);
no aplica si se trata de una biopsia
2. Extraccin de rganos
3. Reduccin de piezas (segn fijador)
2. Fijacin
La fijacin tiene por objeto matar
las clulas y conservarlas, hasta
donde sea posible, en el estado en
que se encontraban durante la vida.

Los fijadores son sustancias

qumicas o agentes fsicos.

Fijar un tejido es como hacer una

fotografa de dicho tejido, su estructura
se mantendr hasta su observacin.
Cualidades de un fijador
Actuar con rapidez, matando y fijando las clulas antes de que
aparezcan fenmenos post-mortem (autolisis, desintegracin etc.).
Poseer alto poder de penetracin para asegurar la fijacin correcta
hasta en las capas profundas de la pieza a fijar.
Conservar, en lo posible, los detalles estructurales in vivo.
Permitir o favorecer el empleo de los procedimientos necesarios
para su observacin posterior (ejecucin de cortes, coloracin etc.).
No provocar la produccin de estructuras artificiales (artefactos).
No retraer excesivamente los tejidos ni volverlos friables
(quebradizos).
Forma de accin de un fijador
Vara con la naturaleza (composicin) de los mismos:
coagulando las protenas sin combinarse con ellas
(por ejemplo: alcohol, cido pcrico, yodo, calor)
formando combinaciones qumicas con las sustancias orgnicas
(por ejemplo: cido crmico y sus sales).

Fijadores qumicos: Fijadores fsicos:

Son los mas utilizados; pueden ser:
fijadores simples constituidos por
una sola sustancia qumica
fijadores compuestos o mezclas
fijadoras: varias sustancias
intervienen en su constitucin.
Desecacin: calor seco o hmedo
Congelacin: se emplea cuando la
fijacin qumica o los procesos
histolgicos posteriores alteran las
caractersticas de la muestra
(por ejemplo, una molcula)
Fijadores simples
a) Formol al 10%, es el ms usado. Su empleo es aconsejable en
todos los casos en que no se disponga de un fijador especial.
b) Alcohol etlico absoluto o de 96
c) Alcohol metlico, se emplea con frecuencia para fijar frotis
desecados (sangre, ganglio, bazo, lquidos de puncin, etc.).
d) cido pcrico al 1% es poco penetrante, conserva muy bien
estructuras celulares.
e) Bicromato de potasio al 3-5%.
Fijadores compuestos
En su composicin intervienen un numero variable de
fijadores simples, elegidos con el fin de completar la accin
de cada uno de ellos o atenuar sus defectos.
a) Liquido de Fleming, mezcla cromo-osmio-actico.
b) Lquido de Zenker, mezcla bicromato-sublimado.
c) Lquido de Helly, mezcla Zenker-formol.
d) Lquido de Bouin, mezcla picro-formol-actico.
Fijacin en formalina 10% Fijacin en cido pcrico

http://markstechniques.blogspot.com/
2. Deshidratacin
Las piezas al ser retiradas del fijador estn embebidas en agua
H 2O

C 2H 6O

Para evitar alteraciones provocadas por la deshidratacin brusca,

la muestra de deshidrata gradualmente utilizando soluciones de
concentracin creciente de un lquido anhidro (etanol).
3. Aclaramiento (desalcoholizacin)
Las piezas deshidratadas se sumergen en el disolvente de
la parafina; el ms utilizado es el xilol (xileno).
El xilol sustituye al etanol
El tejido se vuelve transparente

Tabla. Tiempos de exposicin del tejido a lquidos anhidros

durante las fases de deshidratacin y aclaramiento en un
procedimiento histolgico.
Sustancia Alcohol Alcohol Alcohol Alcohol- Xilol
80% 95% 100% xilol
Tiempo de 1 hora 1 hora 1 hora hora 1 hora
exposicin

Basado en: http://markstechniques.blogspot.com/

4. Inclusin (infiltracin o impregnacin)
Consiste en rellenar (infiltrar) la muestra con un medio que le
dar la dureza y homogeneidad suficiente para que se puedan
obtener cortes finos y de calidad.
Bsicamente, es la formacin de un bloque o taco que permita
realizar cortes sin distorsiones ni roturas.
Se realiza mediante sustancias lquidas que polimerizarn
(resinas) o se volvern slidas (ceras). (Medios de inclusin)
Tambin se pueden obtener cortes mediante congelacin rpida.
Inclusin en parafina
En moldes de papel o de metal ad-hoc (barras de Leuckart) se
vierte la parafina fundida (a unos 60C).
A los 15-30 minutos (a 4C) la parafina
se habr solidificado: listo para cortar.

Procesador automatizado
MOLDE LLENADO CON
PARAFINA LQUIDA de tejidos (histoquinet)
5. Cortes
El objeto de la inclusin es hacer posible la reduccin del tejido a
cortes lo suficientemente delgados como para permitir el paso de la
luz (o los electrones) para examinarlo al microscopio.

Existen diferentes instrumentos que proporcionan cortes de

diferente espesor.

Secciones ultrafinas (menos de 200 nm): microscopio electrnico

Secciones semifinas (de 0.5 a 2 m), finas (entre unas 3 y 10 m)

y gruesas (mayores a 10 m): microscopio ptico
Microtomos

Microtomo para parafina con

mecanismo de deslizamiento
Microtomo para parafina con
mecanismo de rotacin
(tipo Minot)

Fuente: http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/4-mparafina.php
 Criotomos

Criostato
Microtomo de congelacin

La congelacin de tejidos permite la mxima preservacin molecular,

y no requiere fijacin ni inclusin.
Puede ser muy rpida, con nitrgeno lquido, o rpida, utilizando una
solucin anticongelante (sacarosa o glicerol) para evitar la formacin
de cristales de hielo que deterioren la ultraestructura celular.

Fuente: http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/4-criotomos.php
Vibratomo
Cortes ms gruesos de 40 m.
No es necesario fijacin: perfusin.
No es necesaria la inclusin.

Vista lateral de la cubeta de un vibratomo

Fuente: http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/4-vibratomo.php
Ultramicrotomo

Tambin existe el ultracriotomo,

que no requiere inclusin.

Permite realizar secciones ultrafinas (entre 50 y 200 nanmetros),

para estudiar la ultraestructura celular mediante un microscopio
electrnico de transmisin.

Fuente: http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/4-ultramicrotomos.php
Cortes de parafina:
bao de flotacin de tejidos
Temperatura inferior a la
temperatura de fusin de la parafina.
Una vez se estiran los tejidos,
se capturan (pescan) con un
portaobjetos, y se dejan secar.

http://www.rafer.es/banos.html#tejidos
6. Tincin
Los colorantes son normalmente hidrosolubles, luego es necesaria
eliminar previamente la parafina y sustituir el etanol por agua.
Para ello se solubiliza la parafina utilizando xilol (desparafinacin)
y se rehidrata utilizando una serie de soluciones de concentracin
decreciente de etanol; por ejemplo:

Fuente: http://webs.uvigo.es/mmegias/6-tecnicas/5-general.php
Mtodos de tincin
Tinciones generales:
Colorantes cidos, neutros, bsicos
(segn afinidad qumica por
componentes cidos como el ADN,
o bsicos como las protenas) o
indiferentes (se disuelven)
Mtodos avanzados: Tincin bicrmica de
Hematoxilina-Eosina
Histoqumica
Seccin de un glomrulo de un rin de
Inmunocitoqumica mamfero obtenida a partir de una
Autorradiografa inclusin en parafina y teido con
hematoxilina-eosina. Los ncleos
aparecen de color violceo (hemtoxilina)
y el citoplasma rosado (eosina). Fuente:
Atlas de Histologa Vegetal y Animal

Gartner & Hiatt, 2011 (p. 2-7)

Algunas tinciones histolgicas
Reactivo Resultado
H-E Azul: ncleo, matriz de cartlago
(hematoxilina-eosina) Rosa: citoplasma, colgeno
Azul oscuro: ncleo
Tricrmica de Mason Rojo: msculo, queratina
Azul claro: colgeno
Orcena Marrn: fibras elsticas

Schiff Magenta: Glucgeno y molculas ricas en carbohidratos

Weigert Azul: fibras elsticas

Rosa: eritrocitos, eosinfilos
Giemsa
Azul: citoplasma de linfocitos

Fuente: Gartner & Hiatt, 2011 (p. 3)

7. Montaje
Blsamo de Canad: sobre el cubreobjetos y portaobjetos.
(Medio de montaje)
No afectan al tejido, ni a los colorantes
Tiene propiedades pticas excelentes.
No suele ser hidrosoluble luego previamente es necesaria una
deshidratacin final (serie de soluciones de etanol + xilol).

Se introduce en el horno: el calor hace que xilol se evapore y

que el blsamo se seque, de modo que el cubreobjetos queda
fijo en el portaobjetos.
Las secciones estn listas para observacin. Se pueden conservar as
durante aos
Bibliografa
Gartner L. y Hiatt J. (2006) Histologa: Texto y Atlas, Mxico:
McGraw-Hill Interamericana.
Ross, M. (2004) Histologa. Texto y Atlas color con Biologa Celular y
Molecular, Editorial Panamericana: Ciudad de Mxico.

Atlas de histologa vegetal y animal. Depto. de Biologa Funcional y

Ciencias de la Salud. Facultad de Biologa. Universidad de Vigo.
http://mmegias.webs.uvigo.es/6-tecnicas/protocolos/listado.php
Departamento de Biologa Celular y Tisular, Facultad de Medicina.
Universidad Nacional Autnoma de Mxico.
http://www.facmed.unam.mx/deptos/biocetis/atlas2013A/tomo1.html
Tipos de microscopios
1. Microscopio ptico de contraste de fase (de interferencia)
2. Microscopio ptico de fluorescencia
3. Microscopio ptico de polarizacin
4. Microscopio confocal
5. Microscopio electrnico de transmisin
6. Microscopio electrnico de barrido