LPEZ GMEZ MARA DE LOS NGELES

VZQUEZ ESCAMILLA MELISSA

 Definition

Blotting is the technique in which nucleic

acids or proteins are immobilized onto a
solid support, generally nylon or
nitrocellulose membranes.
 Clasificacin
Southern Blot

Northern Blot

Western Blot

Dot Blot
 Southern Blot

Es una tcnica de hibridacin

que permite identificar
fragmentos de DNA separados
por electroforesis en gel y
transferidos a una membrana de
nitrocelulosa o nylon.
 Northern Blot

Es esencialmente idntica al
mtodo de southern blot,
salvo que las molculas de
cido nucleico de la muestra,
en este caso son de ARN.
Procedimiento Blots
 Procedimiento
1. Extraccin de ADN
2. Digestin enzimtica del ADN
3. Electroforesis en gel de agarosa en ADN, y en gel de
acrilamina para ARN en condiciones
desnaturalizantes en presencia de formaldehdo
 Procedimiento
El siguiente paso es la transferencia del ADN a una
membrana de nylon o nitrocelulosa para obtener
una rplica exacta del patrn de bandas de ADN
que hay en el gel.
 Procedimiento
La hibridacin se realiza incubando la membrana
con diferentes reactivos en un tubo de hibridacin,
entre ellos la sonda o sondas marcadas
especficamente y diluidas en una solucin de
hibridacin adecuada.
 Procedimiento

Finalmente, el revelado que se realiza mediante

autorradiografa con una pelcula de rayos X, de
manera que aparecer una mancha oscura en los
puntos de la membrana en que se localicen los
hbridos sonda/secuencia diana.
 Western Blot

Es una tcnica analtica

usada para detectar
protenas especficas en una
muestra determinada
Procedimiento
 Procedimiento
1. Electroforesis con geles de poliacrilamida
2. Transferencia a la membrana de nitrocelulosa
3. Incubacin con anticuerpos
4. Revelado
5. Anlisis
 Dot Blot

LOS CIDOS NUCLEICOS SE APLICAN

DIRECTAMENTE A LA MEMBRANA SIN
SEPARARLOS, SEGN SU PESO MOLECULAR;
ES DECIR, NO SE REALIZA
ELECTROFORESIS. LA FIJACIN SE HACE
POR LO GENERAL CON VACO Y EN UN
MOLDE CUYO POCILLO PUEDE TENER
FORMA DE PUNTO (DOT BLOT) O SER
LINEAL (SLOT BLOT).
 Aplicacin

Southern Blot
Deteccin de reordenamiento de los genes que
codifican para las cadenas ligeras y pesadas de las
inmunoglobulinas, as como tambin la familia de
receptores de clulas T.
 Northern Blot
Amplificacin de expresin gentica
La variacin en el tamao de un gen puede adems
indicarnos deleciones o errores en el proceso de
transcripcin.
Alternando la sonda podemos conocer la secuencia e
incluso determinar que regin ha sido delecionada.
 Western Blots
Puede usarse para determinar en qu tejidos, o
bajo cules condiciones fisiolgicas se expresa un
gen para producir una protena.
Detecta a unin antgeno-anticuerpo por
actividad enzimtica, fluorescencia.
 Referencias

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