Microscopia de

campo escuro
 Campo escuro
Campo claro Campo escuro + filtro vermelho
 Microscopia de campo escuro
Campo escuro: bloqueio dos raios centrais,
permitindo apenas iluminao oblqua na
amostra.
Luz captada pela objetiva = refrao + reflexo

fluorescncia

refrao
absoro

LUZ reflexo
 Microscopia de campo escuro

Tipo de contraste no campo escuro

(iluminao oblqua)
1) Negativo: amostra mais clara do que o plano de fundo,
que fica escuro.

Contraste = (If - Ia) x 100

If
 Microscopia de campo escuro
Contraste com campo
escuro Plano da
ocular
imagem
- Os raios no desviados so
obliterados;
- Apenas raios desviados so Lente do tubo
captados pela objetiva.
objetiva

Distncia
Raios no desviados
focal
amostra
Raios
desviados condensador
 Microscopia de campo escuro
O que a tcnica de campo escuro faz?
1) Contraste negativo
- Bloqueia os raios no desviados centrais, permitindo
apenas a passagem de raios desviados num ngulo suficiente
para serem captados pela objetiva;
- os eventos de refrao e reflexo so responsveis pela
produo de raios desviados;
- a amostra fica clara sobre um fundo escuro;
- cria uma aparncia tridimensional da amostra;
- a resoluo a mesma do campo claro.
 Microscopia de campo escuro
Configurao Trabalha-se nos planos
da imagem conoscpica

objetiva
Luz no coletada pela objetiva
Luz difratada pela amostra
amostra

condensador

Anel de campo escuro

S entra luz na objetiva se houver material com ndice de

refrao maior que o da gua.
Microscopia de campo escuro

Sem amostra Com amostra

 Microscopia de campo escuro
Dados tcnicos
1) Acessrios obrigatrios: anel de campo
escuro para o condensador;
No h objetivas especiais para esta tcnica.

OBS: alternativamente, pode-se usar um anel

de fase para objetiva de alta AN (100x)
com uma objetiva de baixa AN.

Campo escuro pode ser usada em luz transmitida e refletida e em estereoscopia.

 Microscopia de campo escuro
Dados tcnicos: fatores que
influenciam no tamanho do anel
- Posio do anel no condensador;
- AN da objetiva e do condensador;
- O nmero de campo da ocular;
- Aumento da ocular (menor aumento requer anel mais largo);
- ndice de refrao do meio de montagem (maior IR requer
anel mais largo).
 Microscopia de campo escuro
Dados tcnicos do anis
Acessrios obrigatrios: opes de
anis de campo escuro.
 Microscopia de campo escuro
Dados tcnicos- como fazer
- realiza o alinhamento Koehler;
- seleciona o anel de campo escuro;
- movimenta-se o condensador
verticalmente at obter o campo
escuro e com a amostra brilhante.
Microscopia de campo escuro
Tcnicas e contraste

Amostra Tcnica Contraste

Transparente Campo claro 2-5%

Corada Campo claro 25%
Transparente Contraste de fase 15-20%
Transparente Contraste diferencial
de interferncia 15-20%
Transparente Campo escuro 60-75%
Transparente Fluorescncia 60-75%
 Microscopia de campo escuro
Indicaes
- Objetos muito pequenos, cuja visualizao
difcil sobre um fundo claro;
- Pode permitir a deteco de estruturas muito
menores que o poder de resoluo do
microscpio (ex.: 0.02 mm), mas isto no
significa que a tcnica aumenta a resoluo.
- Em combinao com tcnica de fluorescncia;
Exemplos: - bactria; - organelas celulares,
- polmeros, clios, flagelos, microtbulos,
filamentos de actina;
- partculas de prata e ouro usadas em tcnicas
de histoqumica.
 Microscopia de campo escuro
Limitaes

- amostras com muitos pontos de causam

espalhamento podem no produzir um
contraste adequado;
- estruturas que causam muito espalhamento
podem mascarar outras estruturas mais
delicadas que espalham pouca luz.
Microscopia de contraste de fase
Imagens
Raiz de dente humano Sal (cloreto de sdio)
Preparo por desgaste