Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
nucleici
Obiectivele:
1. Tipurile de acizi nucleici, funciile i repartizarea lor n celul.
2. Constituienii acizilor nucleici; bazele azotate, pentozele, acidul fosforic.
3. Nucleozidele i nucleotidele. 3, 5- cAMP
4. Acidul Dezoxiribonucleic (ADN): structura i funciile. Dublul helix i conformaiile
lui de tip B, A, Z.
5. Nivelurile de compactizare a moleculei de ADN la procariote (nucleoidul) i
eucariote (nucleozomii, cromatina i cromozomii).
6. Proprietile fizico-chimice ale ADN. Denaturarea i renaturarea. Hibridizarea.
7. Replicarea ADN la procariote matricea, substraturile, enzimele i factori proteici.
Mecanismul biochimic i etapele biosintezei ADN.
8. Particularitile replicrii la eucariote. Telomerele i telomeraza. Structura
telomerazei. Rolul biomedical al telomerazei.
9. Mecanismele biochimice ale reparaiei ADN. Enzimele implicate.
10. Mecanismele biochimice ale genezei mutaiilor punctiforme. Rolul biomedical al
mutaiilor
Acizi nucleici
Acizi nucleici sunt polinucleotide,
alctuite din mononucleotide, unite prin
legturi 3, 5-fosfodiesterice.
1. ADN - acidul dezoxiribonucleic;
2. ARN - acidul ribonucleic.
ADN
Localizarea:
a. 97-99% - concentrat n nucleu
b. 1-3% - situat n MC.
Rolul: deine, pstreaz i transmite
informaia genetic.
ARN
Localizarea:
11% - n nucleu
15% -n mitocondrii
50% - n ribosomi
24% - n hialoplasm
Deosebim:
1. ARN mesager
2. ARN ribozomal
3. ARN de transport
ARN nuclear heterogen
ARN nuclear cu molecul mic
ARN mesager (mARN)
Localizat -n nucleu i citozol.
prezint copia sectorului de ADN i conine
informaia despre structura catenei polipeptidice
a proteinei.
Rolul:Transmite informaia de la ADN spre
ribozomi, unde o traduce n sinteza de proteine.
ARN ribozomal (rARN)
constituie 60% din totalul ARN-ului.
Localizat- n ribozomii citoplasmei.
Rolul - formeaz scheletul ribozomilor. Joac un
rol auxiliar n procesul de asamblare a
proteinelor.
ARN de transport (tARN)
Purine:
pirimi
dine:
Structura BA minore
Proprietile BA:
1. Sunt slab solubile n H2O
2. BA pirimidinice prezint fenomenul de
tautomerie: forme lactim (enol OH)
lactam (ceto C=O)
3. Sunt responsabile de informaia genetic
4. BA purinice- au structur plan; cele
pirimidinice- aproape plan, puin plat
5. max capacitii de absorbie n ultraviolet
este ntre 260-280 nm
Bazele azotate prezint
fenomenul de tautomerie
NH
NH2 NH2
C C
N N NH
C C
HN O N OH
Rest al Nucleozid
acidului fosforic
NUCLEOTIDE
NUCLEOTIDE
1. Element structural al AN
2. Intermediari energetici (ATP-
purttorul energiei chimice n
organism)
3. Intr n componena Co
4. Servesc ca activatori ai unor
molecule (UDP-Gl; CDP-
colina)
5. Servesc ca mesageri
secunzi intracelulari ai
hormonilor (AMPc; GMPc)
AMPc
AMPc
NUCLEOTIDE
Structura primar a AN
Reprezint secvena mononucleotidelor n
lanul polinucleotidic liniar, legate ntre ele
prin legturile 3' - 5' fosfodiesterice
Catenele au dou capete:
5 nucleozid tri fosfatul;
3 gr. OH liber
Str. primar a ADN i ARN
Str. primar a ADN
Dublu helixul ADN
Watson i Crick
(1953) au postulat
modelul structural al
moleculei de DNA -
dublul helix (spiral
dubl)
Caracteristicile dublei
spirale:
1. 2 lanuri polidezoxiribonucleotidice se
rsucesc helicoidal n jurul unui ax comun,
formnd dublul helix cu orientare spre
dreapta;
2. Cilindrul ce ncadreaz dublul helix are
d=2nm
Caracteristicile dublei spirale:
3. lanurile sunt antiparalele (unul
are direcia 53, altul 35)
4. complimentaritatea (A i
corespunde T; iar G-C).
5. Stabilitatea dublului helix este
asigurat att de interaciunile
hidrofobe dintre BA, ct i de
legturile de hidrogen ntre BA
(A=T formeaz 2 legturi de
hidrogen, iar G C trei legturi).
Caracteristicile dublei spirale:
6. BA hidrofobe sunt situate n interiorul
spiralei duble i aranjate sub form de
stive, pe cnd complexul pentozofosfat este
situat la exteriorul spiralei duble, bine
interacioneaz cu apa, de aceia molecula
gigant de DNA se dizolva n ap.
Caracteristicile dublei spirale:
7. Spiraleste regulat (fiecare spir
cuprinde 10 nucleotide). Distana dintre
BA nvecinate este de 0,34 nm, perioada
de identitate (pasul) 3,4 nm.
8. La pH=7 grupele fosfat sunt ionizate,
poarta sarcini negative, deaceia DNA
prezint acid puternic.
9. Dublul helix este de tip plectonemical
(transversal n acelai plan), dar nu
paranemical (longitudional)
Caracteristicile dublei spirale:
10. nu este
simetric, avnd
adncituri mici i
mari
Asimetria
demonstreaz
orientarea steric
a ADN n replicare
i transcriere
Legitile lui Chargaff
1. Coninutul A=T, iar al G=C
2. n orice preparat de DNA, independent de
specie, suma bazelor purinice este egal cu
cea a bazelor pirimidinice (A+G=T+C)
3. Preparatele de DNA separate din diferite
esuturi a uneia i aceeiai specie de
organisme sunt absolut identice privind
componena nucleotidic.
4. Componena nucleotidic a DNA la aceeai
specie nu se modific odat cu vrst, nu
depinde de regimul alimentar i modificrile
mediului.
Legitile lui Chargaff
5.dac A+T este mai mare dect G+C avem
DNA de tip AT
6. dac G+C este mai mare dect A+T avem
DNA de tip GC
7. t de topire este mai mica cnd predomin
perechile A-T
8. t de topire este mai mare cnd predomin
perechile G-C
9. la eucariote DNA mitocondrial este
circular
Exist diferite forme de
DNA
- care sunt determinate de gradul de dehidratare a AN: A,B
i Z.
- forma A:
- conine 11 resturi la o spir,
- este rsucit spre dreapta.
- Pasul spirei este de 32 A
forma clasic B:
- conine 10,4 perechi de baze per spir.
- este rsucit spre dreapta.
- 10 nucleotide ocup 34 A (3,4 nm).
- o nucleotid cuprinde 3,4A (0,34 nm).
Conformaia Z
este rsucit spre stnga.
conine 12 baze per spir
pasul spirei este de 45 A
Caracteristicile conformaiilor
elicei ADN
Caracteristici Conformai Conformai Conformai
eB eA eZ
Sens de drept drept stng
rsucire
Perechi de baze 10,4 11 12
per spir
Pasul (nlinea 3,4nm 3,2 nm 4,5 nm
pe ax)/pe plan 0,34 nm 0,29 nm G-C -0,35 nm
de baze C-G 0,41 nm
Diametru 2 nm 2,5 nm 1,8 nm
Fosa: mare Mare i ngust i -
profund profund ngust i
mic ngust i Mare i profund
profund profund
Structura ADN B
Imaginea se bazeaz pe
studiile cu raze X realizate
pe dodecamerul
d(CGCGAATTCGCG)
Structura ADN A
r
fiecare unitate de
ADN spiralat de
1,75 ori n jurul unui
compelx histonic se
numete
nucleozom.
Histonele sunt
proteine bazice
bogate n aa bazici
(Arg pt.H2A, H2B i,
Lys pt H3, H4).
compactare a ADN n
nucleu
-Primul nivel-
r
Polinulceozomul
seamn cu nite
mrgele pe a
(=fibrile de cromatin
de 10nm ).
Mrgele de ametist
Nivelele de
compactare a ADN n
nucleu
-al doilea nivel-
Polinucleozomul se
superspiraleaz pentru a
forma structura de solenoid.
Firul de
cromatin?
~ 1,000
30 nm Solenoid ~40 / 50
Nucleosoma
= ctamer de
histone
H2a, H2b, H3, H4 Cromosoma metafazic/
146 / 200 bp DNA cromatina interfazic
Compactizare ~ 10,000
~10 ori
Nivelele de compactare
a ADN n nucleu
-nivelele 3,4 i 5-
-Fibrele de cromatin se
r compacteaz i mai mult
formnd domenii n form de
bucl.
- Aceste domenii n bucl sunt
superspiralizate i organizate
n structuri distincte numite
cromozomi.
- ADN -ul uman nuclear (
genomul) const n 23
perechi de cromozomi.
Cromozomii genomului uman
STRUCTURA ADNului
Proprietile fizico-chimice ale
acizilor nucleici
- masa molecular mare.
- proprietatile coloidale si osmotice, tipice pentru
toi compuii macromoleculari.
- proprietile lor hidrofile depind de fosfai.
- viscozitatea i densitatea nalt a soluiilor,
- capacitatea de denaturare.
- la pH fiziologic toti AN sunt polianioni (-)
Denaturarea i renaturarea
Denaturarea sub aciunea agenilor
denaturani (temperaturii, pH,
substanelor chimice) are loc ruperea
legturilor de hidrogen i forelor
hidrofobe ce stabilizeaz structura AND
-ului.
ADN i pierde proprietile biologice.
Denaturarea
ADN
Renaturarea
La rcirea treptat catenele din nou se
reunesc dup principiul complementarittii,
formnd spirala dubl nativ.
Acest fenomen se numete renaturare
(atunci cnd t e mai mic dect cea de topire).
La racirea brusc renaturarea nu are loc.
Denaturarea i renaturarea AN este nsoit
de schimbarea activittii lor optice.
Renaturarea
ADN
Hibridizarea AN
Pe capacitatea de renaturare a AN este
bazat metoda de determinare a gradului
de nrudire a AN, care poart denumirea
de hibridizare molecular.
La baza ei st mperecherea
complementar a sectoarelor unicatenare
ale AN cu formarea unui heteroduplex
Hibridizarea AN
1. AN se denatureaz separat;
2. se incubeaz mpreun ambele tipuri
de DNA (ori DNA i RNA).
3. n condiiile unui grad relativ crescut
de complementaritate a acestora se
formeaz moleculele hibride (DNA-
DNA sau DNA-RNA). Aceste
molecule constau din sectoare
spiralate i nespiralate. Cu ct gradul
de nrudire este mai nalt, cu att
hibridizarea este mai complect.
Hibridizarea AN
Hibridizarea AN
Hibridizarea AN
Aceast metod a permis descoperirea
particularitilor structurii primare a DNA.
S-a stabilit, c n componena DNA a
animalelor se afl sectoare cu o
succesiune nucleotidic identic, care de
multe ori se repet.
Hibridizarea decurge foarte repede.
Restul DNA este prezentat printr-o
succesiune unical a nucleotidelor, care nu
se dubleaz.
REPLICAREA
TRANSCRIPIA
Dogma central a
geneticei moleculare
Dogma central a geneticii
moleculare
DNA
RNA Protein
Replicarea
transmiterea informaiei genetice de la ADN
parental la ADN fiic.
Localizarea: n nucleol
Proces semiconservativ
Biderecional
Semidiscontinuu
Semi-
conservativ
Replicarea ADN este bi-direcional
(Cairns, 1963).
bidirecional
Bidirectional DNA
replication in E. coli
Replicarea este semi-discontinu
Enzima Enzima
tiere coasere
ADN
relaxare
topoizomeraza II
ADN-giraza
Introduce n molecula de ADN supertorsiuni (-), spre
stnga, n sens contrar celor create de naintarea bifurcaiei
de replicare; astfel compeseaz n avans constrngerile
impuse de desrsucirea duplexului de ADN
Necesit energie (consum de ATP)
ADN giraza nltur super-rsuricirile pozitive
care apar n mod normal la nivelul furcii de
replicare
Topoizomeraza de tip II modific topologia
ADN prin scindarea si resudarea ambelor
catene
Modelul activitii catalitice a topoizomerazei II
(ADN giraza) din E. coli
Sistemul multienzimatic
complex
4. . Primaz - sintetizeaz primerul
n direcia 5'- 3 .
Sistemul multienzimatic
complex
5. ADN polimeraza ( ADNp I, II, III)-
sinteza catenei fiice n direcia 5'3' .
- ADN p III:
aciune polimerazic (5'- 3)
- aciune exonucleazic (3'- 5)
- ADN p II - este implicat n reparea
leziunilor ADN (are activitate 3' -> 5
exonucleazic.
- ADN p I - posed activitate 5'- 3
exonucleazic, nltur primerul i-l
nlocuiete cu fragmente de ADN
REACTIA CATALIZAT DE ADN POLIMERAZ
Cap 5'
P P
P P
H20
+
P 3'
P P
P OH P Piro-
fosfat
P CH2 Base
O
5' CH2 Base
O
OH
3'
Cap 3 (n cretere)
OH
ADN polimerazele la
procariote (continuare)
ADN pol IV
- Pol IV este o ADN polimeraz predispus la erori de
mperechere (nu are activitate de proof-reading ca la pol III,
pol II i pol I)
- Pol IV este responsibil de 50% din mutaiile adaptative.
ADN pol V
- Pol V aparine unei ci speciale de reparare (un fel de
ultima barier) denumit calea SOS de reparare a ADN.
- Pol V este sintetizat cnd celula este expus la doze mari
de radiaii sau de mutageni, cnd pot s apar lez. majore
ADN.
Sistemul multienzimatic
complex
6. ADN ligaza- unete fragmentele Okazaki
de pe catena ntrziat.
Catalizeaz formarea unei legturi fosfat
diesterice ntre 3'-OH a unui fragment de
ADN i extremitatea 5' monofosfat al altuia.
Enzimele implicate n replicarea ADN
Dezrsucirea mediat de
ctre helicaz 5 3
(denaturarea) duplexului 3 5
ADN cu fomarea ADNmc
i a bifurcaiilor de
replicare
5 3
3 5
Legarea SSB la ADNmc
5 3
Formarea primozomului 3 5
(conine i primaza)
3 5
5 3
3 5
5 3
3 5
5 3
3 5
5 3
Etapa de elongare
ADN polimeraza I exclude primerii i sintetizeaz
complementar ADN.
Fragmentele snt unite cu enzima ADN ligaza
(necesit ATP la eucariote i NAD la procariote).
Schema etapelor de iniiere i
elongare
3 5
5 3
3 5 3 5 Primase
Single strand
Laging Strand binding
5 proteins
Okazaki 5
fragment 3
5
RNA
Primers
DNA
Polymerase
5
3
Helicase
Leading Strand
5
3
3. ETAPA DE TERMINARE
Terminarea replicrii
Regiunea de terminare :
- situat la 180 grade fa de ori;
conine capcane pentru
bifurcaia de replicare
- la acest nivel bifurcaiile de TerD
replicare se ntlnesc i dezleag
catenele de ADN nc asociate. TerA
Situsurile de terminare
oriC TerC
- sunt pori care permit trecerea
TerB
bifurcaiei de replicare ntr-un
singur sens;
- conin 23 perechi de baze
Terminarea Replicarii
Un set de situsuri Ter opresc bifurcaia de replicare
care progreseaz n sensul acelor de ceasornic, al 2-lea
set blocheaz bifurcaia de replicare care avanseaz n
Invers acelor de ceasornic:
Situsurile Ter
foreaz cele dou
bifurcaii de
Cromozom replicare s se
ntlneasc ntr-un
punct specific.
TerB TerA
ELEMENTELE CHEIE ALE TERMINRII REPLICRII:
SITUSURILE TER I PROTEINA TUS
Tus: 35.8 kD
activitate de legare la Ter
Monomer
Bifurcaia de replicare
Tus
oprit ntr-o
DNA manier polar
Ter
5 3
5
5 3
5
5
3
5 3
5
5
3
5 3
5
5
Fragment Okazaki
3
5 3 5 3
5
5
Okazaki fragment
3
5 3 5 3
5
3
3 5
5
3
5 3 5 35 3
5
3
3 5
5
3
5 35 35 3
5
3
3 5
5
3
5 35 35 3
5
3
3
5
3
5 35 3
5
Bubbles Bubbles
Replicarea la eucariote
Particulariti:
ADN polimerazele:
- implicat n replicarea ADN nuclear-
responsabil de sinteza catenei ntrziate
sinteza primerilor
rspunde de sinteza catenei lider. Ea
manifest aciune exonucleazic
implicat n reparaia ADN
- implicat n replicarea ADN mitocondrial,
aciune exonucleazic
Proprietile ADN polimerazelor la
eucariote
ADN pol
Sinteza Sinteza
catena caten
lagging leading
similaritate Pol I Pol II Pol II Pol III Pol II
cu enzime
de la
procariote
Tabel comparativ:
Procariote Eucariote
1 ori regiune Multiple ori regioni
2 bifurcaii de replicare per 100 bifurcaii de replicare per
cromozom cromozom
Viteza replicrii Viteza replicrii
16.000 baze pe minut 3000 baze pe minut
1. Depistarea erorii
2. nlturarea BA; nucleotidului sau
fragmentului ADN.
3. nlocuirea corect (a BA;
nucleotidului sau fragmentului ADN).
ENZIMELE CARE PARTICIP LA
REPARAIA ADN ului
ADN -glicozidazele
Endonucleazele
Polimerazele
ADN-ligazele
Repararea prin excizia dimerilor de
pirimidin
1. este o holoenzim
2. la procariote - este oligomer din 5 protomeri
(2, , 1 i sigma ).
subunitile centre catalitice;
- fixeaz substratul;
1 se leag de ADN,
- are rol n recunoaterea secvenelor
matriei numit promotor, unde ader enzima
3. Nu necesit prezena primerului
4. Nu posed funcie nucleazic, doar
polimerazic
5. ADN polimeraza conine Zn2+ i necesit
prezena n mediu a ionilir de Mg2+, Mn2+
- ARN polimeraza
- ARN polimeraza
la eucariote:
1. RNA p I sintetizeaza RNA ribozomal
(28S si 18S)
2. RNA p II sintetizeaza RNAm
3. RNA p III sintetizeaza RNAt, RNAr
5S i molecule mai mici
Etapele transcripiei
Sinteza decurge n 3 etape:
iniierea, elongarea, terminarea.
Iniierea ncepe n anumite secvene de
ADN numite promotor (P 40 nucleotide)
recunoscut de ARN polimeraza.
k
1. subunitatea recunoate caseta -35 (TTGACA) i E se
leag
2. ARNp alunec de-a lungul ADN i n jurul casetei
-10 (TATAAT) deschide dublul helix formnd complexul
deschis de iniiere
3. se formeaz complexul de iniiere: legarea I nucleotid
trifosfat (de regul purinic - captul 5 al ARN). CA al E se
afl n punctul de start.
4. ARNp catalizeaz formarea primei leg.
fosfodiesterice ntre nucleotidul +1 i +2
Astfel complexul de iniiere este format, sigma
subunitatea e disociat de la holoenzim i ia
parte la iniierea unui alt ciclu de transcriere
Fig. 5.4
Elongarea i Terminarea
Elongarea - alunecarea ARN polimerazei pe
matra de ADN sinteza transcriptului (50
nucleotide pe secund) . ARNp nu controleaz
catena sintetizat erorile sunt mai multe fa de
replicare. Pe msur naintrii ARNp are loc
desprinderea ARN de la ADN i refacerea
dublului helix
Terminarea semnal de terminare
ARNp recunoate secvenele nucleotidice
specifice de pe ADN, ce conin un numr mare
de G, C .
Terminare dependent de
factorul
Proteina - se asociaz la E i se mic
mpreun cu ea, ns la identificarea
semnalelor de terminare coboar de pe
matri i ncetinete aciunea
E,producnd transcriptul cu folosirea
energiei ATP. ADN-se reformeaz n
dublul helix.
Transcripia la eucariote
1. RNA p alctuit din 9-11 subuniti
2. Folosesc mai multe tipuri de ARN p:
a. ARN polimeraza I ARNr (18S, 28S,
5,8S; 45S)
b. ARN polimeraza II ARNm;
c. ARN polimeraza III ARNt i ARNr (5S)
d. ARN polimeraza IV (mitocondrial)- toate
tipurile de ARN mitocondrial
Transcripia la eucariote
3. P la eucariote:
GC casete GGGCG (-90)
CAAT casete 5-GGCCAATCT -3 (-75)
Caseta Hogness TATAT/AT (-35)
Primele 2 sunt responsabile de frecvena
transcripiei (cnd ncepe), a 3 - - implicat n
iniiere semnal (unde).
4. Secvenele alctuite din 10-20 nucleotide
enhancers i silencers cresc i scad
respectiv V transcrierii.
Procesingul la eucariote
ARN-ul mesager obinut difer la procariote fa
de eucariote.
n ARN-ul procariot molecula este continu deci
intreaga informaie de aici poate fi folosit pentru
sinteza proteinelor.
n ARN-ul eucariot s-a observat prezena unor
poriuni repetitive de nucleotide numite introni
care nu dein nici o informaie pentru sinteza
proteic.
ARN-ul mesager primar este mult mai lung dect
ARN-ul mesager folosit de ribozom.
Toi precursorii de ARNm n nucleu trec etapa de
maturizare posttranscripional. Pe parcursul
procesingului - pre-ARN se transform n ARN
matur.
Procesingul la eucariote
Procesingul nclude:
1. Modificarea fragmentelor terminale 5 i 3
ale ARN:
a. Cap-area: la captul 5 -este adiionat
guanozina metilat (5- 5 trifosfat - protejarea
mARN de atacul 5-exonucleazelor i pentru
recunoaterea de ctre ribosomi ca semnal de
iniiere);
b. la captul 3 se adaug o secven mare de
poli A (200 A -coad). Ea servete la exportul
moleculelor de ARN din nucleu n citoplasm.
Procesingul la eucariote
Fig. 5.11
Procesingul la eucariote
2.Splisingul - excizia intronilor i sudarea
exonilor. Aa numitul splising are loc n nucleul
celulei.
Excizarea intronilor se poate face in 2 feluri:
Cu ajutorul unor enzime speciale care recunosc
capetele fiecarui intron (exemplu: ARN U1)
acestia sunt eliminati si capetele libere ale
exonilor sunt sudate.
Prin autocataliz - chiar ARN-ul ribozomal isi
autoelimina intronii printr-un proces care
genereaza o bucla (reprezentata de intron),
eliminarea acestei bucle cu ajutorul guanozinei si
coaserea exonilor.
a.
a. ARN nuclear (ARN U1-U6): identific secvenele de baze la
jonciunea intron exon(5 -GU, iar la 3 - AG),
b. se fixeaz complementar la ele, bucleaz intronul, astfel apropiind
capetele exonilor.
c. Are loc scindarea legturilor fosfodiesterice dintre exoni i introni,
capetele exonilor sunt juxtapuse, apoi sudate de RNA ligazele
Mecanismul
ARN U1 se leag la GU a intronului
ARN U2 se unete la A din interiorul intronului
ARN U4,U5, U6 se asociaz cu U1 i U2 formnd
bucla (5 al intronului cu 2 al A)
Eliberarea lui U4 din complex duce la clivarea
captului 3 al intronului. Intronul se nltur
mpreun cu U2,U5, U6
Formarea legturilor 3-5fosfodiesterice ntre
capetele exonilor
Fig. 5.13
e.g., Fig. 5.13
PROCESINGUL ARN t
Eucariotici 80S:
subunitatea 40S ARNr 18S i 33 proteine.
subunitatea 60S ARN r 5S, 5,8S, 28S i 49 proteine. ARNr
se formeaz n nucleol.
Ribozomul va avea constanta de sedimentare 70S la
procariote si 80S la eucariote.
S este coeficientul de sedimentare Svedberg, care depinde
de forma, densitatea i dimensiunea particulelor.
Prokaryotic Ribosome Structure
Eukaryotic Ribosome
Structure
Centrele catalitice ale
ribosomilor
Situsul A - aminoacil responsabil de unirea
complexului aminoacil- ARNt
Situsul P peptidil gzduiete ARNt legat de un
lan polipeptidic deja sintetizat
Situsul E e responsabil de eliminarea ARNt
n starea complet nedisociat ribozomii sunt activi.
Deplasarea lber a ribozomilor n diferite sectoare ale
celulei, sau combinarea lor n diferite locuri cu
membranele reticulului endoplasmatic ofer
posibilitatea de asamblare a proteinei n celul.
POLIRIBOZOMUL
Mai muli ribozomi pot
citi simultan acela ARN
mesager pe care il
parcurg in acela sens.
Se constituie astfel un
poliribozom, structur ce
permite accelerarea
sintezei proteice.
Translaia
Translaia sau biosinteza proteinelor propriu zis.
Bazele moleculare ale translaiei:
1. m-RNA ca matri genetic (determin succesiunea AA
n protein);
2. aminoacil ARNt;
3. ribozomii ca maini moleculare pentru unirea
succesiv a AA n catena polipeptidic conform
programului mRNA;
4. GTP ca surs de energie;
5. factorii proteici;
6. ca cofactori - unii ioni (Mg 2+, K+).
Etapele
se realizeaza in 5 etape:
Activarea AA.
Iniierea lanului polipeptidic.
Elongarea lanului polipeptidic.
Terminarea lanului polipeptidic si eliberarea
acestuia.
Prelucrri post traducere ale proteinei sintetizate.
Activarea AA
are loc n citozol
Sunt necesare:
1. AA (procariote Nformil-Met; la eucariote Met)
2. ARNt
3. ATP, Mg, K
4. E aminoacil ARNt sintetaza
a. Posed 4 centre: pentru AA, ATP, ARNt, H2O
b. Specificitatea E e determinat de structura ARNt
c. Fidelitatea e asigurat de capacitatea de autocontrol
d. Conine grupri libere sulfhidrilice
e. sunt ligazele, care au o specificitate absolut.
Activarea AA
Se desfoar n dou etape:
ATP PPi
1. NH2-CH-COOH NH2-CH-CO O-AMP
I I
R R Aminoacil Adenilat
Aminoiacil ARNt
sintetaza
2. NH2-CH-CO O-AMP+ARNt NH2-CH-CO O-RNAt +AMP
I I
R R
Aminoacil RNAt
I etap - AA reacioneaz cu ATP rezultnd aminoacil-AMP. PP eliberat este hidrolizat
i in acest fel reacia ireversibil.
II etap - complexul cedeaz AA moleculei de ARNt, specific acelui AA
Aminoacyladenylate Formation
NH2
N
N
N
N O O O
O P O P O P O-
O
H H O- O- O-
NH2
H
H OH OH
O N
N
O C
N
CH H N O
PPi
NH2 O P O-
O
H H O
H
H OH OH O C
CH H
NH2
Aminoacyl-tRNA Synthetase Rxn
NH2 NH2
N N
N N
5' tRNA
N N N
N O
O P O- O
O O
H H O H H
H H H
H OH OH O OH
O C
H
CH H NH2
NH3+
N
N
5' tRNA
AMP N N
O
O
H H
H H
O OH
O C
CH H
NH3+
Activarea AA
Esena procesului este fixarea AA la ARNt n zona
acceptorie la 3' CCA OH
Activarea AA consum 2 legturi macroergice
E recunoate AA greit fixat pe ARNt
- l elimina i l nlocuiete cu AA
corespunztor (prezint i un locus
hidrolitic).
Translaia propriu zis
Citirea ARNm se face n direcia 5- 3' iar
proteina se sintetizeaz de la captul
Nterminal la C terminal
se desting trei etape:
Iniierea
Elongarea
terminarea.
Iniierea
Necesar:
1. ARNm (AUG)
2. Ribosomul cu subunitile
disociate
3. ARNt f-met (Met)
4. GTP, Mg
5. IF1, IF2, IF3
Scopul: formarea complexului de
iniiere
Formarea complexului de iniiere:
IF3 se leag de subunitatea mic
(previne reasocierea subunitilor FI2
ribosomului) FI3
La subunitate adiioneaz ARNm 30S
(AUG) (secvena Shine Dalgarno)
La complex adiioneaz IF1 legat de
formil Met-ARNt i IF2 legat de GTP P 50S A
ndat cum are loc fixarea
anticodonului fMet-ARNt cu codonul FI1
AUG (ARNm), are loc hidroliza GTP,
eliberarea FI i unirea subunitilor
Formil Met-ARNt e fixat n centrul
P
Elongarea
Necesar:
1. ARNm cu urmtorul codon
2. ARNt cu urmtorul AA
3. GTP
4. FE: Tu, Ts, G
Elongarea translaiei include trei etape:
1. Legarea aminoacil ARNt;
2. Transpeptidarea- formarea legturii peptidice,
3. Translocarea (deplasarea ARNm cu un codon).
1. Adaptarea (legarea)AA
are loc dup principiul codon-
anticodon n centrul A
a. Aminoacil-ARNt se fixeaz cu
Tu+GTP adiioneaz la complexul
de iniiere.
b. AA se fixeaz n centrul A.
Simultan are loc hidroliza GTP n
GDP i P
Tu-GDP+GTP-Ts------Tu-GTP
Legarea AA
2. Transpeptidarea
este formarea legturii peptidice ntre doi
aminoacizi.
AA din centrul P sub aciunea
peptidiltransferazei trece n centrul A.
Se formeaz dipeptida
n centrul P rmne ARNt liber
3. Translocarea
deplasarea ribosomului pe ARNm cu un
triplet n direcia 5- 3' .
Dipeptida din centrul A trece n centrul P
sub aciunea factorului G (translocazei) i
GTP
ARNt din P prsete ribosomul
Elongarea
Decurge n 3 etape :1 fixarea noului
Aminoacil ARNt
complexul: aminoacil-ARNt, factorul de FE-G
elongare T (FE-T) i GTP.
se fixeaz pe situsul A, dup ce are
loc hidroliza GTP la GDP care se 30S
elibereaz mpreun cu FE-T.
2. formarea legturii peptidice.
Enzima peptidil-transferaza catalizeaz P 50S A
formarea legturii peptidice ntre doi
AA din situsul A i P.Peptida rmne
ataat de RNAt de pe situsul A. FE-T
translocaia
ribozomul se deplaseaz la
urmtorul codon de pe ARNm i
peptidilARNt trece de pe situsul A pe E-PT
P
aceast etap necesit factorul de
elongare G (FE-G) i GTP (necesar FE-T
pentru realizarea modificrilor
conformaionale care deplaseaz
ribozomul).
Terminarea
are loc cnd sunt ntlnii codonii UAA, UGA, UAG
i factorii proteici de terminare: R1, R2, S.
Nici un tRNA nu se poate lega cu codonii de
terminare.
Factorii de terminare:
elibereaz lanul polipeptidic
Elimin ARNt din centrul P
Disocierea ribosomului n subunitile respective
Degradarea ARNm
DECI:
cAMP
(
)
-
TGTGA TCACA
ACACT AGTGT
Mecanismul de represie a sintezei
proteinei
Dac E.coli crete n mediu ce conine ca surs de azot
srurile de amoniu, atunci ea sintetizeaz toate 20 de
enzime, necesare pentru sinteza a 20 de AA.
Dac n mediu adugm un AA (de exemplu His), atunci
bacteria nceteaz de a sintetiza enzimele necesare sintezei
His.
Mecanismul represiei sintezei enzimelor, ce
particip la sinteza His
Dac n mediu lipsete histidina represorul este neactiv, nu
se poate lega la operator.
ARN polimeraza se leag la promotor are loc transcripia i
sinteza enzimelor necesare pentru sinteza His.
Mecanismul represiei sintezei enzimelor, ce
particip la sinteza His
La adugarea n mediu a His (corepresor), el se
leag de represor, l activeaz i facilitaez
legarea R la O.
Complexul R-CoR legat la operator - sisteaz
transcrierea genelor ce codific E implicate n
propria sa sintez
Ilustrarea mecanismului de
reglare a sintezei proteinei prin
represie
Reglarea transcripiei la procariote: atenuarea
Trp
Trp Trp
REZUMM:
GR controleaz exprimarea anumitor GS prin
intermediul unei proteine R
Ra suprim sinteza de ARNm, deci de
proteine; R inactivat permite transcrierea
GS i sinteza proteinei
E inductibile - cnd n mediul apare I R se
inactiveaz are loc sinteza ARNm- proteinei
E represibile R este inactiv are loc
transcripia i translaia. Cnd n mediu se
acumuleaz produsul final al cii anabolice
(CoR)- R se activeaz, formarea complexului
R-CoR i sistarea transcripiei i translaiei.
Inducia i represia (deosebiri)
Inducia Represia
Caracteristic proceselor Caracteristic proceselor
catabolice anabolice
Inductorul substrat al cilor Corepresor produs al cilor
catabolice anabolice
Represorul liber este activ Represorul liber este neactiv