FAMILIILE ORTHO- I

PARAMYXOVIRIDAE.
Patogeneza i diagnosticul
de laborator al gripei.
 FAMILIILE ORTHO- I
PARAMYXOVIRIDAE
Mixovirusurile reunesc virusuri ARN-
cu afinitate pentru mucoproteine
(myxo mucus) repartizate n 2
familii:
Orthomyxoviridae
Paramyxoviridae
FAMILIA Orthomyxoviridae Paramyxoviridae

DIMENSIUNE 100 nm 200 nm

NUCLEOCAPSIDA
Simetrie Helicoidal Helicoidal
Diametru 8 nm 16 nm

GENOMUL ARN-, transcriptaz ARN-, transcriptaz

asociat, 8 segmente asociat,
nesegmentat
SUPERCAPSIDA
Spiculi H i N Separai Asociai
Spiculi F abseni prezeni

REPLICAREA n nucleu n citoplasm

GENOMULUI
 FAMILIA ORTHOMYXOVIRIDAE
Genuri: Influenzavirus A (virusul gripal A)
Influenzavirus B (virusul gripal B)
Influenzavirus C (virusul gripal C)
Influenzavirus D (virusul gripei bovine, izolat
2012)
Isavirus
Thogotovirus (virusurile Dhori i Thogoto)

Influenzavirus - agenii cauzali ai gripei infecie

respiratorie acut cu simptome sistemice importante.

1933 prima cultur de virus gripal uman (Smith,

Andrewes i Laidlaw).
Virusul gripal A se ntlnete la om i
animale: porc, cal, psri, foci, balene,
etc.
Virusul gripal B om (foci)
Virusul gripal C om (cine, porc)
Tipul A provoac pandemii periodice (1918
20-100 mln decese, 1957, 1968, 1977)
Tipurile A i B epidemii regionale i locale.
Anual 3-5 mln cazuri grave, 300 500
mii decese.
 MORFOLOGIA, COMPOZIIA CHIMIC A
VIRUSULUI GRIPAL tipul A
Particule rotunde, 80-120 nm, sau pleomorfe,
constituite din:
Genom
Compus din 8 segmente de ARN-, care codific 11
proteine (HA, NA, NP, PA, PB1, PB1-F2, PB2, M1,
M2, NS1, NS2 (NEP)
HA hemaglutinina
NA - neuraminidaza
NP - nucleoproteina
PA, PB1, PB2 -
polimeraze
M1, M2 proteine
matrix
NS1, NS2 proteine
nestructurale
 Capsida (NC) tubular, de simetrie
helicoidal, separat pentru fiecare
segment.
Supercapsida
Deriv din MCP a celulei-gazd
1. Dublu strat lipidic extern (origine celular)
2. Strat intern proteic (matrice, proteine virale
M1, M2) asigur legtura dintre GP de
suprafa i NC; M2 - canal ionic
3. 2 tipuri de GP nserate n membran:
hemaglutinina - HA (H) i neuraminidaza -
NA (N), distincte morfologic i biologic
(virusul gripal C doar HA)
Hemaglutinina (HA, H) H1 H18
Trimer compus din 2 polipeptide HA1 i HA2
- HA1 fixarea specific a virionilor la receptori
glicopeptidici membranari (inclusiv de pe
hematii, determinnd hemaglutinarea), ce conin
acid N-acetilneuraminic/acid sialic
- HA2 fuziunea supercapsidei cu membrana
celulei-gazd
Anticorpii anti-HA:
- Inhib fixarea virusului pe celula-int
- Inhib hemaglutinarea
Neuraminidaza (NA, N) N1 N11
Tetramer, polipeptid unic
Funcii :
1. Cliveaz legtura dintre acidul sialic i glucidul alturat
(tratarea celulelor cu neuraminidaz impiedic infecia
celulei cu virus)
2. Ajut n prevenirea superinfeciei celulelor deja
infectate
3. Poate inactiva receptorii mucoproteici solubili din
secreiile respiratorii
4. Asigur detaarea virionilor nmugurii prin eliminarea
acidului sialic din receptorii celulari
Anticorpii anti-NA limiteaz diseminarea virionilor
 Se cunosc 18 varieti de HA (H1-H18) i 11
de NA (N1-N11), asociaiile lor formeaz
subtipuri de virus A.
16 subtipuri de HA i 9 subtipuri de NA au fost
identificate la psri acvatice
H1, H3 i N1, N2 la porci
H3, H7 i N7, N8 la cai
H17N10 - identificat recent la lilieci

La om H1, H2, H3 i N1, N2 (H1N1; H2N2;

H3N2)
Descrierea unei tulpini de virus gripal:
 STRUCTURA ANTIGENIC
a virusului gripal A
1. Ag interne NP i M, specifice de tip (A,B,C)
2. Ag externe HA i NA, specifice de subtip i
de variant
 VARIAII ANTIGENICE ALE VIRUSURILOR
GRIPALE TIPUL A
1. Variaii Ag minore drift (mutaii punctiforme,
modific civa AA din HA, NA sau alte proteine
virale) cu aparitia unor tulpini/varieti de subtipuri.
Mutaiile sunt cauzate de ARN-polimeraza viral
(nu are capacitate de corecie).
Determin epidemii fiecare 3-4 ani, caracteristic
pentru tipurile A i B
2. Variaii Ag majore shift (recombinaii genetice,
schimbarea complet a unui sau ctorva
segmente genomice HA, NA, P, M, etc.
Determina modificri importante, aparitia
subtipurilor noi - provoac pandemii
 PANDEMICS CAUSED BY INFLUENZA A

Major antigenic shifts associated with influenza A pandemics

Year Sub type Prototype strain

1947 H1N1 A/FM1/47

1957 H2N2 (Asian) A/Singapore/57 (1 mln)

1968 H3N2 (Hong-Kong) A/Hong Kong/68 (1 mln)

1977 H1N1 A/USSR/77

No pandemic
1987 H3N2 Various strains
circulated worldwide
 Cultivarea virusului gripal
1. Ou embrionat de gin (cavitatea
amniotic i alantoic)
2. Culturi de celule (fibroblati de pui,
culturi primare de rinichi de
maimu, linii celulare de rinichi de
cine MDCK, linii Vero)
3. Reproducerea infeciei la maimue,
dihori
 REPLICAREA
Tropism epiteliul nazal, traheo-
bronhial, plamni la mamifere, intestinele
la pasari.

Initial neuraminidaza descompune

mucusul, facilitand accesul virusului la
celulele epiteliale.
 Etapele replicrii:
ATAAREA (adsorbia) HA1+receptorul din acidul
sialic
PENETRAREA dupa ce o proteaz cliveaz HA,
virionul ptrunde n celul prin endocitoz
DECAPSIDAREA prin fuziunea supercapsidei i a
membranei vacuolei de endocitoz (HA2) i
disocierea NC (M2 determin formarea unui canal
ionic, protonii care ptrund provoac acidifierea
mediului i descompunerea NC n ARNv i proteine),
cu penetrarea ARN i a ARN-polimerazei n nucleu
prin porii membranei nucleare.
 BIOSINTEZA (eclipsa)
1. Transcrierea ARNm (transcriptaze PA,
PB1, PB2) in nucleu
2. Replicarea genomului:
ARNv..ARNc..ARNv in nucleu
3. Translaia ARNm i sinteza proteinelor
virale - citoplasm
 ASAMBLAREA
n citoplasm: HA i NA (via aparatul Golgi)
se inser n MCP, iar M1 i M2 o cptuesc
din interior
n nucleu: NP se asociaz cu segmentele
de ARN-, formnd NC, care apoi migreaz
spre zonele modificate ale MCP
ELIBERAREA: prin nmugurire
NA ajut la desprinderea virionilor de MCP
i evit formarea agregatelor. Celula
rmne aparent viabil, dar epuizat i
moare. Citoliza este determinat de
rspunsul imun citotoxic (NK, LTc).
 PATOGENEZA GRIPEI
Sursa de infecie omul bolnav (rareori
animale, psri).
Cazuri sporadice de grip aviar (H7N1, H9N2,
H5N1, H7N9) la om 1997 n Hong Kong,
2003/04 n Vietnam, 2013 China;
grip porcin (N1N1) 2009-2010
Barierele moleculare (receptori diferii) limiteaz
transmiterea interuman a virusurilor aviare
sau porcine.

Cantitatea virusului este maxim n rinofaringe

n primele 2 zile de la debutul bolii, dar poate
persista pn la 9 zile.
 Receptorul de virus gripal uman,
SA 2,6 galactoz, este dominant pe
celulele epiteliale ale mucoasei nazale,
sinusurilor paranazale, faringelui,
traheii i bronhiilor.
Receptorul de virus gripal aviar,
SA 2,3 galactoz, se gsete n
principal pe celulele bronhiolare
neciliate la jonctiunea ntre bronhiole i
alveole.
Mecanisme de transmitere
a) aerogen, prin picturi Pflugge (tuse, strnut)
b) prin contact direct cu lichidele biologice
infectate (secreii nazale, saliv, sput,
snge, masele fecale ale psrilor bolnave)
c) contact indirect cu suprafeele contaminate
bancnote, mnere, intreruptoare, etc (cu
atingerea ulterioar a mucoasei nazale, a
cavitii bucale, a conjunctivei).
Contingent de risc - copii, persoane n vrst,
cu imunosupresie, bolnavi cu maladii cronice
cardiovasculare, respiratorii, insuficien
renal, diabet.
 Virusurile gripale au o predilecie pentru tractul
respirator din cauza prezenei receptorilor lor.
Ele se nmulesc n celulele epiteliale respiratorii
ciliate, ducnd la anomalii ciliare funcionale i
structurale, iar viremia este rar detectat.
Aceste procese sunt nsoite de stoparea
sintezei proteinelor i a acidului nucleic n
celulele afectate, eliberarea enzimelor
lizozomale hidrolitice i descuamarea att a
celulelor epiteliale ciliate ct i a celor
productoare de mucus (interferen cu
mecanismul de eliberare mecanic a tractului
respirator).
 Procesul de moarte celular programat
(apoptoza) are ca rezultat activarea
componentelor complementului, conducnd la
inflamaii localizate cu edem. La nceputul
infeciei stimulul chemotactic primar este
ndreptat spre limfocite, care constituie
componenta inflamatorie celular major.
Aceste afeciuni fac gazda foarte susceptibil la
superinfecia bacterian invaziv.
Restabilirea epiteliului respirator dureaz de la 2
pn la 10 sptmni.
 Forme clinice
1. Gripa inaparent, asimptomatic (33%)
2. Gripa comun (benign, durata 4-7 zile).
Incubaia cteva ore - 2 zile. Debut brutal, cu
frison, febr, cefalee, rinoree, tuse, mialgii,
artralgii, anorexie, astenie (IFN?).
Complicaii (infecii secundare bacteriene): otit,
sinusit, bronit, bronhopneumonie, etc.
Complicaii rare: sindromul Reye (encefalit acut
cu degenerescena ficatului); sindromul Guillain-
Barre (poliradiculonevrit)
3. Gripa malign (pneumonie viral primitiv
cu edem pulmonar i insuficien respiratorie
acut)
 Situaia epidemic prin grip n RM, 2015

n anul 2015 au fost nregistrate 2003

cazuri de grip clinic (n anul 2014 523
cazuri).
Gripa n anul 2015 a fost etiologic cauzat
de trei virusuri gripale: B (47,8%), A(H1N1)
(47,0%) i A(H3N2) (4,3%).
Din 688 probe investigate la grip
virusurile gripale au fost detectate n 230
(33,4%)
 DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL GRIPEI

Prelevate: lavaje/aspiraii nazale, traheale, expectoraii

bronhice (n primele 48 ore)
1. Examenul virusoscopic microscopia electronica, RIF
1. Examenul virusologic
- Izolarea n oul embrionat de gin de 10-11
zile sau culturi de celule (MDCK).
- Indicarea virusului activitate
hemaglutinant fa de eritrocite de cobai,
gin, curcan a lichidului amniotic i alantoic,
hemadsorbia lor pe cultura de celule.
- Identificarea RIF, RIHA, RIHAds, RN
3. Detectarea Ag virale n sedimentul celular (RIF,
ELISA)
4. Detectarea genomului viral (PCR)
5. Serodiagnosticul gripei
Retrospectiv, de confirmare. Se examineaz seruri
perechi. Se determin creterea titrului de Ac de
4 ori, sau prezena Ac Ig M.
Reacii:
- RFC cu Ag NP (determinarea tipului)
- RIHA cu tulpina viral circulant
- ELISA
- RN
Imunitatea: celular (LTc, NK), umoral (Ig G, Ig
A), specific de subtip.
TRATAMENTUL GRIPEI
- Amantadin, rimantadin. mpiedic
ptrunderea NC n citoplasma celulei infectate
cu virus A (blocheaza canalul ionic). Tulpini
rezistente au fost izolate.
- Zanamivir, oseltamivir. Au structura similar
acidului neuraminic. Inhib activitatea NA,
mpiedicnd eliberarea virusurilor A i B i
diseminarea lor prin mucus, determin
agregarea virionilor.
- Arbidol (inhib fuziunea supercapsidei cu
membrana celular).
- Interferon (viferon, grippferon), unguent oxolinic
- Tratament simptomatic (antipiretice,
antibiotice)
 PROFILAXIA SPECIFIC A GRIPEI
Vaccinuri inactivate: conin 2 tulpini de virus A
(H1N1 i H3N2) i o tulpin B, cultivate in ovo i
inactivate cu beta-propiolacton. Inoculare i/m,
s/c; Ig G persist 5-6 luni.
Vaccinuri vii atenuate. Tulpinile sunt cultivate in
ovo la 25 C, atenuate prin pasaje multiple.
Administrare intranazal prin aerozol, imunitate
local (sIg A).
Vaccinuri subunitare, constituite din HA virale
n curs de cercetare vaccinuri vii/subunitare
recombinante, vaccinuri polinucleotidice.
 Oamenii de stiinta de la British Medical
Research Council (MRC), n colaborare cu
colegii din Elvetia au descoperit ca
anticorpul FI6 a fost eficace in prevenirea
si tratarea gripei la soareci si dihori (studiu
publicat n Science Express).
Este prima dat cnd un singur anticorp a
fost gsit eficient mpotriva tuturor
tulpinilor de grip A, cel mai frecvent tip
care este responsabil pentru pandemiile
globale.
 Researchers determined the crystal structure of the FI6
antibody when it was bound to H1 and H3 HA proteins. Sitting
atop the HA spike is a globular head domain that binds to
cellular receptors during viral entry and contains the major
antigenic sites targeted by the immune system. Because of
this selective pressure, the sequence in the head domain
drifts enough to require an updated seasonal vaccine most
years. A stalk domain connects the head to the viral
membrane and is responsible for fusing viral and host
membranes so that the pathogen can invade human cells.
The immune system usually does not have a strong response
to the partially hidden stalk domain, so portions of the stalk
remain highly conserved across all influenza subtypes. The
FI6 antibody makes extensive contacts with conserved parts
of the stalk, thereby blocking HA from harpooning a sticky
fusion peptide into the host membrane during viral entry.
 Infecia cu virusul gripal nou A(H1N1)

La inceputul anului 2010 OMS raporteaz

17.000 de decese din cauza gripei de tip
nou A(H1N1).
Evenimentele derulate prin apariia
brusc, rspndirea rapid i transmiterea
de la om la om a gripei noi A(H1N1), au
impus OMS s ridice faza pandemic la
nivelul 6.
pidmie de grippe A (H1N1) de 2009. Noir : morts confirmes. Rouge : infections
confirmes. Orange : cas suspects.
 S-a stabilit c virusul gripal nou A(H1N1)
conine gene ale virusului gripal de origine
porcin (tulpini americane i euro-
asiatice), gene de origine aviar i uman.
Oamenii de tiin l-au mai numit
reasortant cvadruplu. Sub aspect
antigenic virusul gripal de tip nou A(H1N1)
mult difer de acel gripal sezonier uman
A(H1N1), de aceea vaccinurile antigripale
umane sezoniere nu pot acorda protecie
contra gripei de tip nou A(H1N1).
 Epidemiologie
Virusul nou A(H1N1) se transmite de la om la om prin
aceleai mecanisme ca i virusurile gripale sezoniere.
Ele n mod obinuit se transmit de la om la om prin tuse
i strnut de la persoanele bolnave cu grip. Uneori
oamenii se pot mbolnvi indirect prin atingerea
suprafeelor, obiectelor infectate cu virusuri gripale i
ulterior atingnd mucoasele oculare, bucale i nazale.
Oamenii pot fi contagioi cu o zi naintea apariiei
simptomelor gripale i 7 zile de la debutul maladiei.
Copiii, n special cei mici, pot fi contagioi mai multe zile.
 Particularitile tabloului clinic.
Gripa cu virusul nou A(H1N1), spre deosibire de cea
sezonier, se manifest clinic preponderent la persoane
tinere, anterior sntoase. Manifestrile clinice sunt
asemntoare cu cele din gripa sezonier. Pacienii
prezint semne clinice caracteristice, ce includ cel puin
dou din urmtoarele simptome: febr, tuse, dureri n
faringe, mialgii generale, cefalee (mai des frontal),
frisoane, posibil diaree i vom. Frecvena atestrii
sindromului dispeptic (11-38%) este mai mare dect n
gripa sezonier. Durata bolii n majoritatea cazurilor este
de 4-6 zile, cu o maxim de 13 zile. Este posibil
dezvoltarea pneumoniilor, care pot evolua cu sfrit
letal.
 FAMILIA PARAMYXOVIRIDAE
FAMILIA PARAMYXOVIRIDAE
SUBFAMILII :
1. PARAMYXOVIRINAE (genurile
Paramyxovirus, Rubulavirus,
Morbillivirus)
2. PNEUMOVIRINAE (genurile
Pneumovirus, Metapneumovirus)
 GENUL SPECII GLICOPROTEINE

Virusul paragripal 1
Paramyxovirus HN, F
Virusul paragripal 3

Virusul paragripal 2
Rubulavirus Virusul paragripal 4 HN, F
Virusul parotiditei epidemice

Morbillivirus Virusul rujeolei H, F

Pneumovirus Virusul respirator sinciial G, F

 CARACTERISTICA GENERAL A
PARAMYXOVIRUSURILOR
Virusuri nvelite, sferice, uneori filamentoase, 150-400
nm.
Genomul ARN- nesegmentat (transcriptaza asociat)
Capsida de simetrie helicoidal, constituit din
proteina NP. n asociaie cu ARN formeaz NC
tubular de 18 nm diametru
Supercapsida dublu strat lipidic, proteina intern
matrice M, spiculi glicoproteici nserai n membran:
- HN asigur adeziunea la celula-int
- F asigur fuziunea supercapsidei cu membrana
celular n timpul penetrrii virusului n celul
(provoac formarea de sinciii n culturi de celule)
Reproducerea are loc n citoplasm