Universidad Autnoma de Yucatn

Desarrollo de Procesos Biotecnolgicos

Obtencin de cido Clavulnico a partir de

glicerol con Streptomyces Clavuligerus
Adriana Pacheco, Juan Pablo Martn, Zaira Estrada, Luis Snchez,
Juan Carlos Ortega, Emanuel Flores, Andrs Puc, Rub Pech

1
 Antecedentes

Crisis de los
antibiticos

(Ramos et al. 2016)

Bacterias resistentes a antibiticos -lactmicos

(Ramos et al. 2016)

3
 cido Clavulnico

El cido Clavulnico es un inhibidor de -

lactamasas producido por Streptomyces
clavuligerus
Produccin de cido Clavulnico

(Cole et al. 1978)

(Baptista-Neto et al. 2005)
 Produccin de cido Clavulnico
Las estrategias para aumentar la produccin de AC se
han concentrado en la ingeniera gentica de S.
clavuligerus

. (Li et al. 2006)

(Paradkar, 2013)
 Mercado del cido Clavulnico
Fue inicialmente comercializado en los 80s por GlaxoSmithKline en combinacin
con Amoxicilina bajo el nombre de Augmentina
Entrada de genricos luego de la expiracin de la patente
 Mercado del glicerol
La tasa de produccin habitual es del
10% de glicerina por unidad de
biodiesel
2004 y 2010 Revolucin del biodiesel.

(Baptista-Neto et al. 2005)

 Mercado del glicerol

Se estima que la produccin

mundial actual de glicerina es de
2,9 millones de toneladas por
ao.

El tamao del mercado de la

glicerina refinada se estima en 2
millones de toneladas mtricas
en 2015,.

(Baptista-Neto et al. 2005)

 Normatividad

COFEPRIS - SEMARNAT - Secretaria del trabajo y previsin social

NOM-001-STPS-2008 (Edificios, locales, instalaciones y reas en los
centros de trabajo Condiciones de seguridad.)
NOM-002-STPS-2010 (Prevencin y proteccin contra (Manejo,
transporte y almacenamiento de sustancias peligrosas
NOM-020-STPS-2011 .(Recipientes sujetos a presin y calderas)
Normatividad aplicable en materia de seguridad
NOM-010-STPS-1999(contaminantes por sustancias qumicas)
NOM-017-STPS-2008(Equipo de proteccin personal)
NOM-018-STPS-2000 (Colores y seales de seguridad)
Ingeniera Conceptual & Bsica

12
Evaluacin y seleccin de tecnologas: Upstream

13
 Upstream
Operacin Smbolo

Tanque agitado

Centrfuga de
decantacin P-20 / DC-101
Centrifugation Separacin de
Secador de Productos
bandeja P-29 / TDR-102
Tray Drying

Componentes
smosis inversa Purificacin del
del medio
+ P-40 / RO-101
glicerol
Reverse Osmosis
Glicerol
Tanque agitado Mezclado y
homogeneizado Unfiltered Filtered
glicerol glicerol

Esterilizador por Ahorro energtico y

calor esterilizacin completa
14
 Fermentacin

Reactores discontinuos Reactores continuos

Reactor por lote Reactor continuo

Tanque agitado Lote alimentado

Operacin Smbolo
Caractersticas OD
de
transferencia Biorreactor air lift
de masa
Agitacin
(Mahmood, 2015)
15
Downstream

16
 Downstream
Separacin de influente Efluente AC + impurezas
Operacin discontinua Biomasa
Operacin Smbolo
Uso en farmacutica Centrfuga de
canasta
Evita deshidratacin
Destilador por
lote
Volumen pequeo
Microfiltracin Efluente AC
Compuestos de alto valor

(Ki-Joo y Diwekar, 2005)

17
 Downstream
SOLVENTE
2etilhexanoato K

Operacin Smbolo Trazas

Extractor mixer- Fase de Fase de
settler Contacto Decantacin CALDO AC
Filtracin Dead Purificacin fina
End
Secador cnico Permite recirculacin

Sales de Clavulanato CRISTALIZACIN

Descarga de slidos de Potasio
Alta pureza
Productos farmacuticos

18
 Estudios de Alternativas de Procesos

PATENTE PATENTE
PROPUESTA PATENTE 537.160/0 PATENTE 2058029
EP0813536 EP0387178A1

Fermentacin Fermentacin Fermentacin Fermentacin

Fermentacin

Floculacin
Centrifugacin Microfiltracin
NH4Cl
Filtracin Filtracin
Destilacin smosis
Sedimentacin
AcEt inversa
Secado
Acidificacin azeotrpico al Tamices
Acidificacin vaco Acidificacin
giratorios
19
 Estudios de Alternativas de Procesos

PATENTE PATENTE
PROPUESTA PATENTE 537.160/0 PATENTE 2058029
EP0813536 EP0387178A1

Deshidratacin smosis
Microfiltracin Centrifugacin MgSO4 Secado
inversa

Cristalizacin 2- Cristalizacin 2- Secado con

Extraccin Liq-Liq amino-2,4,4- Evaporacin
et-hex-Li sulfatos
trimetilpentano
Cristalizacin 2-
Filtracin Filtracin Carbn activo Aminas
et-hex-K

Filtracin Recristalizacin Cristalizacin 2- Cristalizacin 2-

Secado al vaco 20
Dead-End 2-et-hex-K et-hex-K et-hex-K
 Estudios de Alternativas de Procesos

PATENTE PATENTE
PROPUESTA PATENTE 537.160/0 PATENTE 2058029
EP0813536 EP0387178A1

Recristalizacin Columna de gel

Destilacin Filtracin
LiCl de slice Precipitacin

Filtracin Lavado Microfiltracin

Secador cnico Filtracin
Secado al vaco Secado Ultrafiltracin

Final pureza Final pureza

Final pureza Final pureza
97% Pureza 80% 98% 21
85% 90%
 Diagrama de Tuberas e Instrumentos

Vlvulas Bombas
manuales centrfugas

Controladores
Controlador de
de temperatura
presin
y nivel

Indicador de
presin
 Ubicacin y diseo de planta
Lugar que se encontrara cerca de una
empresa que produjera mucho aceite gastado

23
 Bioproceso

S. clavuligerus

Fuente de carbono: cido clavulnico

Glicerol

Fuente de nitrgeno:
harina de soya 24
 Cintica del microorganismo

Modelo de Monod

Parmetro Valor reportado

Vel. especfica de crecimiento mx. (max) 0.046 h-1

Constante de afinidad al sustrato (Ks) 0.45 g/L
Rendimiento biomasa sustrato (p/p) 0.21 g/g
Rendimiento biomasa producto (p/p) 0.01 g/mg

Glicerol (O)
Biomasa ( )
cido clavulnico()
25
(SANCHEZ HENAO, GOMEZ GRIMALDOS & QUINTERO DIAZ,
2012)
 Bioproceso visin general
Dnde obtener el glicerol?

Transesterifica
cin

Catalizador sedimentacin Glicerol

26
Simulacin

27
 Tratamiento de Efluentes
Dos entradas: Normas implicadas:
Biomasa (amonio, urea, amonio NOM-001-SEMARNAT-1996
disuelto) NOM-002-SEMARNAT-1996
Residuos de purificacin (cidos) NOM-003-SEMARNAT-1997
Puntos importantes: NOM-073-ECOL-1994
cidos en residuos de purificacin
Generacin De amonio, urea
pH
Nitrgeno total
Fosforo total
28
 Tratamiento de residuos
Operacin Smbolo
Columna de
intercambio Eliminacin de cidos
inico P-32 / INX-101
Ion Exchange

Adsorcin por
carbn
Retener los cidos
activado P-41 / GAC-101

granular GAC Adsorption

Reactor de Degradacin de la demanda qumica de

lodos activados P-34 / AB-101
Aerobic BioOxidation oxigeno y demanda biolgica de oxigeno
Reactor
anxico P-37 / AXR-101
Eliminacin de Nitratos y nitritos
Anoxic Reaction

Clarificador
P-38 / CL-101
Separacin de la biomasa
Clarification
29
Estudio de sensibilidad

30
Evaluacin econmica y de costos

Sueldos
mexicanos

Precio de venta
de $3,780 por
cada 100 mg

Ganancias por
parte del
biodiesel y el
clavulanato de
potasio

31
 Evaluacin econmica y de costos
3A. Total Plant Direct Cost (TPDC) (physical cost)
1. Equipment Purchase Cost 984,000
2. Installation 319,000
3. Process Piping 344,000
4. Instrumentation 394,000
5. Insulation 30,000
6. Electrical 98,000
7. Buildings 443,000
8. Yard Improvement 148,000
9. Auxiliary Facilities 394,000
TPDC 3,152,000

3B. Total Plant Indirect Cost (TPIC)

10. Engineering 788,000
11. Construction 1,103,000
TPIC 1,891,000

3C. Total Plant Cost (TPC = TPDC+TPIC)

TPC 5,044,000

3D. Contractor's Fee & Contingency (CFC)

12. Contractor's Fee 252,000
13. Contingency 504,000
CFC = 12+13 757,000

3E. Direct Fixed Capital Cost (DFC = TPC+CFC)

DFC 5,801,000

32
 Concepto de biorrefinera
Instalacin industrial con uso
integral de la biomasa de
forma sostenible para la
produccin de
biocombustibles, energa,
materiales y productos
qumicos con valor agregado
Biorrefinera
Glicerol
Obtencin de glicerol por
microalgas y de igual forma,
generar biodiesel crudo, el
Obtenido a partir de cual, tras un proceso de
transesterificacin, se obtiene purificacin podra ser
como producto junto con el utilizado
biodiesel crudo.
El biodiesel crudo se puede
utilizar como fuente de
energa limpia
Alternativa
33
 Conclusin
El diseo del bioproceso se realiz, despus de una evaluacin ardua
de las tecnologas reportadas en la literatura y patentes para la
produccin de cido clavulnico.

Se obtienen aproximadamente 0.168 kg por batch de clavulanato de

potasio con una pureza del 97%, grado farmacutico.

Se requerira de una inversin incial de $6,416,000 dlares, una IRR

del 82.89%, ganancias al ao de $20,474,000 dlares y un valor neto
total despus de impuestos de 61,242,000 dlares, lo que nos hace
llegar a la conclusin de que este se trata de un proceso rentable.
34
 Bibliografa
SANCHEZ HENAO, C., & GOMEZ GRIMALDOS, N., & QUINTERO DIAZ, J. (2012). PRODUCCIN DE ACIDO CLAVULNICO POR
FERMENTACIN DE Streptomyces clavuligerus: EVALUACIN DE DIFERENTES MEDIOS DE CULTIVO Y MODELADO
MATEMTICO. Dyna, 79 (175), 158-165.
Ki-Joo Kim, Urmila Diwekar (2005). Batch Distillation, 107-117. 28/11/17
Mahmood K.H.AL-Mashhadani Stephen J.Wikilson William B. Zimmerman (2015) Airlift biorreactor for biological applications
with microbubble mediated transport processes. ELSEVIER, 137, 243-253. 28/11/17.
Baptista-Neto, ., Teodoro, J. C., Cassiano Filho, L. C. M., Badino, A. C., & Hokka, C. O. (2005). Comparisons
between continuous and batch processing to produce clavulanic acid by Streptomyces clavuligerus. Brazilian
Archives of Biology and Technology, 48(SPE), 97-104.
Cole, M., Howarth, T. T., & Reading, C. (1978). U.S. Patent No. 4,110,165. Washington, DC: U.S. Patent and
Trademark Office
Ramos, P. I. P., Custdio, M. G. F., Saji, G. D. R. Q., Cardoso, T., da Silva, G. L., Braun, G., ... & Gales, A. C.
(2016). The polymyxin B-induced transcriptomic response of a clinical, multidrug-resistant Klebsiella pneumoniae
involves multiple regulatory elements and intracellular targets. BMC genomics, 17(8), 737
Paradkar, A. (2013). Clavulanic acid production by Streptomyces clavuligerus: biogenesis, regulation and strain
improvement. The Journal of antibiotics, 66(7), 411-420
Li, R., & Townsend, C. A. (2006). Rational strain improvement for enhanced clavulanic acid production by genetic
engineering of the glycolytic pathway in Streptomyces clavuligerus. Metabolic engineering, 8(3), 240-252
35