MEDIOS DE CULTIVO

El xito en un cultivo de tejidos vegetales depende del uso del medio nutritivo
adecuado, tambin del empleo de tejidos vegetales, incubacin, calidad de reactivos
etc. Usando las sustancias qumicas necesarias y las combinaciones apropiadas de
nutrientes, ha sido posible establecer cultivos para casi todas las plantas en diversas
especies
 Los primeros medios utilizados en cultivo de clulas y tejidos vegetales fueron
semisintticos. Frecuentemente contenan extractos o complejos orgnicos como
agua de coco, hidrolizado de casena y extracto de levadura. Actualmente, la mayora
de los medios son de composicin conocida.
 El procedimiento general consiste en inocular un medio de cultivo gelificado
(generalmente con agar, Gelrite o Phytagel) con un fragmento de tejido u rgano
vegetal, llamado explante, previamente tratado para eliminar todo organismo que se
encuentre en su superficie (desinfestacin).
 El cultivo se incuba bajo condiciones ambientales de luz, temperatura y humedad
controladas, que junto con las fisicoqumicas y nutricionales conducen el desarrollo
del explante hacia la formacin de una masa celular amorfa denominada callo, o
hacia la diferenciacin en un tejido organizado que producir rganos o embriones.
 INGREDIENTES DEL MEDIO DE CULTIVO

Sales orgnicas. Mezclas de sales

Compuestos orgnicos
Complejos naturales
Materiales inertes de soporte
Compuestos orgnicos Fuente de Carbono

Clasificacin de tres grupos: Sacarosa (ampliamente usada)

Carbohidratos Glucosa (ocasionalmente usada en medios
de cultivos de monocotiledoneas)
Sustancias hormonales
Vitaminas Fructosa

Opcionalmente: Almidn

Aminoacidos y/o amidas

Purinas y pirimidinas
Hexitoles
Acidos organicos
 AUXINAS Y GIBERELINAS

Las auxinas y giberelinas promueven el alargamiento celular pero inhiben la

diferenciacin, mientras que las citocininas estimulan la divisin mediante la cual se
producen nuevas clulas y pueden tambin evitar el envejecimiento celular.
 OTROS COMPONENTES

El etileno estimula la maduracin principalmente de frutos, el cido abscsico

operando como sistema de defensa natural contra efectos de estrs fisiolgicos.

el cido 2,4-diclorofenoxiactico (2,4-D) es la ms usada para la induccin y

mantenimiento de tejido calloso
 Sustancias hormonales
Auxinas y citocininas (concentraciones
variadas segn la especie).
Giberelinas (empleado en algunas
especies para tener plantas libre de
virus )
Aminocidos y aminas
Los requerimientos de aminocidos y/o
amidas se pueden detectar rpidamente
por medio de la adicin de hidrolizado
proteico. Cualquier efecto positivo puede
ser investigado por adicin proteica de
una mezcla de aminocidos y aminas en
lugar de hidrolizado.
Otros compuestos orgnicos Complejos naturales

Hexitoles (inositol) tienen un efecto Utilizado como ultima alternativa

estimulante muy significativo.
Pulpa de pltano
La adenina o el sulfato de adenina
frecuentemente favorecen la formacin de Endospermo de coco
tallo in vitro
Emulsin de pescado
Las bases nitrogenadas (acido citidilico y
guanilico) promueven el crecimiento de Extracto de malta
cultivos de callo Jugo de naranja
Hidrolizado proteico
Jugo de toma
Extracto de levadura
(Ejemplo de algunos complejos naturales)
 MATERIALES INERTES DE SOPORTE

El agar es el material de soporte mas usado en el cultivo de tejidos, promueve un

excelente hmedo que sirve como soporte al inoculo.
Fisiolgicamente no es inerte, puesto que es una fuente de cantidades variables de
sustancias inhibidoras o estimulantes del crecimiento.
Otros agentes gelidificantes usados es la poliacrilamida y la silicagel
 PREPARACIN DEL MEDIO DE CULTIVO
Equipo:
Balanzas (analtica y granataria )
Potenciometro
Autoclave
Refrigerador
Destilador
Deionizador
Planchas magnticas
Vasos de precipitado
Pipetas, probetas y matraces
Frascos para almecenar soluciones
Desecador
Caja Petri
 PROCEDIMIENTO

Preparacin de soluciones
madre: Ajuste de pH

Combinacin de sales inorgnicas. Los Se emplea soluiones 1.0N de NaOH y

compuestos orgnicos que son las N de HCl. Se ajusta el pH antes de
insolubles en agua requieren de un que el medio sea diluido a su volumen
codisolvente. Las diluciones madre final y antes de agregar el agar.
deben mantenerse en refrigeracin o a
temperatura ambiente si se conoce su
estabilidad.
 PROCEDIMIENTO

Disolucin del agar y

distribucin Esterilizacin del medio

Se esteriliza en el autoclave durante 15

El agar puede ser disuelto en agitadores
minutos a 121*C
con calentamiento (agitacin contante)
 Vida e anaquel del medio

Almacenamiento a temperatura
ambiente por una o dos semanas.
Puede aumentar el tiempo de vida en
refrigeracin.
GRACIAS