De Zilot Tudor i Rusu Cozma Teodor

Termenul de Inginerie genetic prea, acum ceva timp, ca fiind desprins din
domeniul tiinifico-fantastic. Astzi, a devenit o realitate bine conturat i cu
rezultate promitoare n toate domeniile vieii cotidiene.

Ingineria genetic reprezint un ansamblu de metode de lucru prin care se

manipuleaz materialul genetic la nivel molecular i celular. Astfel se obin
microorganisme, plante i animale reprogramate genetic, n al cror genom sunt
incluse gene strine, utile, exprimabile i transmisibile stabil la descendeni.
 Ingineria genetic utilizeaz metode de cultur in vitro a celulelor i esuturilor animale
i vegetale i tehnologia ADN-ului recombinat. Pe aceste metode se bazeaz hibridarea
somatic la plante i animale, haploidia prin androgenez i ginogenez experimental,
precum i clonarea.
Hibridarea somatic la plante se realizeaz cu ajutorul protoplatilor, celule n care s-a
distrus peretele celular prin tratamente enzimatice (exemple: celulaza, pectinaza). Drept
urmare, fiecare celul va fi perfect izolat de celelalte, permind efectuarea
experimentelor.
Protoplatii pot fi izolai din orice organ al plantei. Ei manifest totipoten, avnd
capacitatea s regenereze plante ntregi, prin cultivarea pe mediul artificial in vitro
(exemplu mediu solid de agar-agar).
 Fiind lipsii de perete celular, protoplatii pot fuziona spontan sub influena anumitor
substane (nitrat de sodiu, polietilenglicol, ioni de calciu). Dup fuzionarea celulelor,
fuzioneaz nucleii, se reface peretele celular i ncepe diviziunea celular. Dup circa
trei sptmni se formeaz calusuri de culoare verde, care ncep s creasc. Pentru a
regenera plantele, calusurile se transfer n medii speciale de difereniere.
n urma hibridrii somatice rezult hibrizi interspecifici asemntori cu cei obinui prin
hibridarea sexuat.
Avantajul hibridrii este acela c se pot obine hibrizi celulari ntre specii diferite care
n mod normal nu se pot ncrucia sexuat. Un exemplu este cazul amfiploizilor de tutun
(2n = 42 cromozomi) obinui din dou specii de tutun: Nicotiana glauca (2n = 24
cromozomi) i Nicotiana langsdorfii (2n = 18 cromozomi). Hibrizii obinui nglobeaz
numrul de cromozomi ai celor doi prini.
Alte avantaje ale utilizrii protoplatilor sunt: nmulirea vegetativ foarte rapid n urma
creia rezult clone; obinerea unor forme poliploide ce vor fi utilizate n ameliorare;
inducerea de mutante; transferul de gene sau cromozomi n protoplati; transferul de
cloroplaste n protoplati; obinerea unor plante rezistente la viroze, etc.
 Androgeneza const n reprogramarea inormaiei genetice a microsporilor (grunciorilor de polen), n culturi in vitro.
Ulterior, prin diviziuni repetate, rezult plante haploide (conin doar jumtate din numrul de cromozomi ai speciei).
Exist dou tipuri de androgenez:
direct, care se realizeaz prin embriogenez (din microspori se obin embrioizi, care prin diviziuni repetate formeaz
plante haploide);
indirect, care se realizeaz prin organogenez (din calus, prin difereniere, se formeaz esuturi i organe, i ulterior,
plante haploide).
Factorii cu o importan deosebit n reuita androgenezei experimentale sunt: vrsta anterelor, mediul de cultur,
hormonii, temperatura i lumina.
Plantele haploide obinute prin androgenez prezint urmtoarele avantaje: sunt pure genetic, sunt folosite pentru
obinerea liniilor izogene (sunt homozigote pentru toate genele), sunt utilizate pentru producerea de soiuri noi i de
hibrizi ce manifest fenomenul heterozis; ajut la identificarea rapid a mutaiilor recesive i la inducerea unor mutaii
artificiale.
Ginogeneza const n reprogramarea informaiei genetice a macrosporilor (sacilor embrionari) n culturi in vitro.
Astfel, dintr-un nucleu haploid, prin diviziuni repetate, se vor forma plante haploide.
Deoarece plantele haploide astfel obinute sunt sterile, ele sunt diploidizate (prin tratamente cu colchicin) i apoi
utilizate n diverse experimente.
 Primele ncercri au fost fcute n anul 1960 de ctre Georges Berski i colaboratorii si, care au folosit celule de oarece,
aparinnd la dou linii diferite, cultivate n amestec; ei au descoperit c acestea pot fuziona i forma celule hibride. Aceste
celule prezint caracteristici morfologice, fiziologice i biochimice diferite de cele ale celulelor fuzionate, dar nglobeaz
numrul total de cromozomi ai genitorilor. Hibridarea celular, la animale, reuete dac sunt rezolvate dou impedimente:
gsirea unui agent inductor care s grbeasc fuzionarea celulelor; este utilizat virusul Sendai inactivant;

selectarea celulelor hibride din cultur.

S-au gsit medii de cultur selective n care celulele hibride se multiplic, iar celulele genitorilor sunt eliminate.

O dat ndeplinite aceste condiii, are lor fuzionarea celulelor somatice diferite i formarea heterocarionului.

Ulterior, are loc fuzionarea nucleilor, urmat de diviziuni mitotice succesive. n final, se formeaz celulele hibride somatice.
Aceste celule nu pot regenera organisme animale hibride. Ele formeaz clone celulare hibride, la care sunt eliminai
preferenial cromozomii uneia dintre speciile genitoare. Astfel, n culturile celulare hibride om-oarece, se elimin o parte din
cromozomii umani. Drept urmare, n descendena hibrid exist o variaie semnificativ a numrului de cromozomi.
Importana practic a acestui fenomen const n faptul c pot fi realizate hri cromozomale umane, care permit o identificare
precis a genelor normale i mutante pe cromozomi.
Celulele hibride care conin restructurri cromozomale sunt testate ulterior, pentru prezena sau absena enzimelor specifice.
Astfel, sunt identificate cu precizie genele ce determin apariia maladiilor ereditare umane.
n prezent, se produc cibrizi, hibrizi celulare rezultai din formarea enucleate cu o celul nucleat.
 Clonarea organismelor reprezint un ansamblu de procedee prin care se cultiv o
singur celul i se obine o colonie de celule identice. n urma clonrii rezult
clone (celule i organisme pure, identice, ce provin dintr-un singur printe).

La plante (care prezint fenomenul de totipoten), clonarea se realizeaz prin

androgenez i ginogenez. La animale, se realizeaz transplantul de nuclei strini
n ovule la care s-au ndeprtat nuclei.

Metoda clonrii prezint avantajul c, de la un singur organism adult, se pot obine

copii perfect identice, din punct de vedere genetic, ale organismului donator.
 Aceast tehnologie grupeaz tehnicile care permit sinteza chimic sau izolarea genelor
unor organisme, urmat de ineria acestora n genomul unor celule aparinnd altei
specii. Gazda va copia ADN-ul strin inserat artificial i-l va transmite descendenei.
Rezult astfel organisme reprogramate genetic.

Avantajul acestei tehnici const n faptul c toate depi barierele de specie (poate
transfera ADN-ul de la o specie la alta).

Etapele acestei tehnologii sunt: izolarea ADN-ului corespunztor unei anumite gene;
multiplicarea sa; construirea unor molecule de ADN hibride; transferul de la o specie la
alta.

Pentru a obine ADN recombinat se folosesc microorganisme (colibacili, drojdie de

bere, Argobacterium sp.), enzime specifice i vectori.
 Sinteza artificial a genelor[modificare | modificare surs]
Prima realizare n domeniu, dateaz din anul 1970, cnd Har Gobind Khorana i colaboratorii si
au sintetizat artificial la drojdia de bere gena care determin sinteza de ARN-t ce transfer
aminoacidul alanina la locul sintezei proteice.

Ulterior, s-au realizat sinteze artificiale de gene att la procariote ct i la eucariote. Astfel, s-au
sintetizat artificial genele care intervin n producerea hemoglobinei la iepure, ovalbuminei la
gin, insulinei, hormonului de cretere, somatostatinei i interferonului la om.

n prezent, pentru a sintetiza artificial gene, se pornete de la ARN-m folosit ca matri pentru
sinteza ADN-ului. De exemplu, pentru artificial a genei ce determin producerea hormonului de
cretere uman s-a extras ARN-m din hipofiz i s-a introdus n Escherichia coli care s-a cultivat
industrial. Aceasta a produs cantiti crescute de hormon.

Prin programare genetic se obin substane antitumorale eficiente n terapia cancerului.