Creterea

microorganismelor n condiii
de laborator

Lucrare realizat de Cepoi Anastasia, elev la

Lucrare efectuat pe 8-12 decembrie 2017

Ustensile i utilaje

Ustensile i materiale Utilaje

Ans bacteriologic Cntar analitic
Baloane Erlenmeyer Autoclav
Cutii Petri Dulap de uscare
Lame Termostat
Spirtier Microscop
Pipete
Colorani
Componentele mediului
nutritiv
Creterea microorganismelor n
laborator include urmtoarele etape:
1. Pregtirea mediilor nutritive
2. Sterilizarea mediilor pregtite i a veselei care va fi utilizat.
3. Repartizarea mediului nutritiv n vasele destinate creterii
microorganismelor (cutii Petri)
4. Inocularea microorganismelor
5. Meninerea microorganismelor n condiii adecvate, care asigur
multiplicarea lor (termostat, t=37oC)
6. Examinarea caracterelor culturale (forma, dimensiunea, culoarea
coloniilor obinute) i morfologice (colorarea dup Gram i examen
microscopic)
 Pregtirea mediului pentru creterea
bacteriilor
Un mediu de cultur reprezint un substrat nutritiv
complex steril, care trebuie sa le furnizeze
microorganismelor cantitatea necesar de substane
nutritive si energie, necesare pentru procesele de
cretere, reproducere si ntreinere a funciilor vitale.
Mediu nutritiv Czapek-agar

Ap distilat FeSO4 0.01g

pn la 1l
K2HPO4 1g Glucoz 20g
KCl 0.5g Agar 20g
NaNO3 2g pH 7.0-7.3
MgSO4*7H2O 0.5
 Sterilizarea mediului i veselei
Mediul nutritiv se sterilizeaz n autoclav
aparat care realizeaz sterilizarea prin Dulap de
aplicarea aburilor sub presiune nalt. uscare
Regimul de sterilizare a fost 1 atmosfer,
timpul de sterilizare 30 min. Procedura
este efectuat doar de persoane
autorizate, care dein dreptul de a lucra
cu utilaje aflate sub presiune nalt.
Vesela se sterilizeaz n dulapul de uscare,
n care se aplic temperatura nalt 300
oC timp de 1 or.

Autoclav
 Plasarea mediului nutritiv pe cutie
Dup extragerea din autoclav mediul nutritiv este
lsat s se rceasc pn la temperatura de
aproximativ 40oC (este lichid inc).
Mediul nutritiv se toarn n cutiile Petri sterile n
boxa microbiologic sterilizat prealabil cu raze
UV.
n fiecare cutie se toarn aproximativ 20 ml
mediu. Se nchide capacul i se las pentru
solidificare.
 Inocularea (nsmnarea)
Am realizat inocularea din mediu
solid pe mediu solid. Pentru
aceasta se pregtete cutia Petri
cu mediu (se inscripioneaz
corespunztor). Toat informaia
relevant se noteaz pe partea
inferioar a cutiei.
Se sterilizeaz ansa microbiologic
la flacra spirtierei.
Se rcete ansa prin atingere de
agar.
Se colecteaz cultur bacterian.
Se inoculeaz cultura pe cutia
Petri pregtit aplicnd tehnica
epuizrii ansei.
 Obinerea culturii de microorganisme
Cutiile Petri inoculate se pun n termostat la
temperatura de 37oC pentru 24 ore.
Dup 24 ore cutiile sunt scoase din termostat si
examinate pentru a depista creterea. n caz c
au fost respectate toate regulile i condiiile
necesare, se obine creterea microorganismelor
pe cutie. Desenul culturii microbiene repet
traiectoria micrii ansei microbiologie. n captul
traseului se obin colonii izolate de
microorganisme.
Am inoculat cultura Bacillus cereus
Coloniile izolate sunt de culoare alb cu nuan
ivory, cu diametrul de 3-4 mm, cu marginea
neregulat i suprafaa este catifelat.
 Analiza probelor din culturi la
microscop
Pentru a examina cultura microbian la
microscop este necesar de pregti un frotiu
care apoi se va colora.
Pregtirea frotiului include urmtoarele etape:
Plasarea culturii microbiene pe lam (se pune o
pictur de ap distilat n care se trece cu
ansa cultura colectat de pe cutia Petri)
Etalarea culturii (omogenizarea prin micarea
ansei n pictura de ap)
Uscarea (la temperatura camerei)
Fixarea (prin trecerea prin flacr)
 Analiza probelor din culturi la microscop
Coloraia Gram
Etapele coloraiei Gram sunt urmtoarele:
Colorare cu Genian violet (timp de 2 min)
Splarea excesului de colorant
Fixarea colorantului cu soluie Lugol
Splarea excesului de soluie Lugol
Decolorarea preparatului n alcool etilic
Colorarea repetat a preparatului cu Fuxin
Analiza probelor din culturi la
microscop
La analiza microscopica a preparatului , la mrirea de 12x40 am depistat:
1. Dup form, microorganismele din preparat sunt bacili.
2. Dup culoare microorganismele sunt Gram +
Concluzii

Procesul de cretere a microorganismelor este complicat i necesit lucrri

de pregtire.
Culturile bacteriene se caracterizeaz prin cretere rapid 24 ore se
obine cultura pe mediu nutritiv solid.
nocularea prin metoda epuizrii permite s obinem colonii separate, care
pot fi examinate i caracterizate.
Bacillus Cereus este un microorganism gram pozitiv