Trabajo Práctico Nº 2

Estudio Cinético
de la Enzima Sacarasa
 Objetivo:

Determinar los
parámetros cinéticos
de la enzima sacarasa
 Sacarasa
Enzima que desdobla a la sacarosa en glucosa y fructosa

CH2OH
CH2OH Sacarasa HOCH2
H H H O H
O O
+
H H
O H HOCH2
H OH H
OH H H HO OH OH H H HO CH OH
O CH2OH 2
OH
OH H H OH OH H
H OH

Sacarosa Glucosa Fructosa

 Valoración Colorimétrica

El ácido pícrico (amarillo) se reduce en medio

alcalino ante la presencia de glúcidos reductores
y se convierte en ácido picrámico (naranja)

H O HO O
NO2 C NO2 C
H C OH H C OH
+ HO C H + H2O + HO C H
O2N NO2 H C OH O2N NH2 H C OH
OH H C OH OH H C OH
CH2OH CH2OH
Ác. Pícrico Glucosa Agua Ác. Picrámico Ác. Glucónico
 Curva de Calibración

Y= 0,0141X
Absorbancia

µmol Glucosa = . .Y
. . 0,0141

.
. .
.
µmol glucosa
 Materiales
Extracto Enzimático
Solución de Sacarosa 2 % p/v
Hidróxido de Sodio
Solución de Ácido Pícrico
Provee la enzima sacarasa
Provee el sustrato de la enzima
•Detiene la reacción enzimática
•Alcaliniza el medio, por lo cual
los glúcidos reductores pueden
actuar sobre el ácido pícrico
Al ser reducido se transforma
en ácido picrámico
(anaranjado), lo que permite
determinar la cantidad de
glucosa presente en la
solución
 Sc.
Extracto Enzimático
ÁcidoNaOH
Sacarosa 2%p/v
H2O destilada
Pícrico

Incubar 37 ºC por 10 minutos

Hervir durante 5’
µmol glucosa.min-1

. . .
.
.
.
Después de 5’
Conc. Sacarosa
 Resultados
Concentración de Sacarosa

Absorbancia

Concentración de Glucosa

Velocidad de Reacción

Km

Velocidad Máxima