POLIMORFISMOS AUTOSSÔMICOS

EM CIÊNCIA FORENSE (STRs)

DEFINIÇÃO
Ciência forense é toda ciência usada no tribunal (na corte
de justiça)

ou

Qualquer ciência usada para propostas legais é uma ciência

forense (American Academy of Forensic Sciences).

Por definição, a pessoa que aplica o conhecimento

científico em um contexto legal é um cientista forense.
DNA EM TERMOS FORENSES
• Qualquer pessoa que busca informações sobre DNA em termos forenses
irá se deparar com vários termos relacionados como, por exemplo,
fingerprinting genético, teste de DNA, tipagem por DNA, perfil de DNA,
etc. O importante é que todos estes termos se referem a técnicas e
procedimentos científicos que podem ser empregados para diferenciação
entre indivíduos; assim, o DNA em um contexto legal é sinônimo de
Identificação Forense.

• De acordo com o site do Projeto Genoma Humano, o processo de

Identificação Forense envolve cientistas forenses scanning 13 regiões do
DNA. Os dados obtidos são usados para criar um perfil de DNA indivíduo-
específico (também conhecido como fingerprint de DNA).
IDENTIFICAÇÃO FORENSE
• Identificar potenciais suspeitos cujo DNA possa ser compatível com
evidências físicas deixadas nas cenas de crimes;
• Inocentar pessoas erroneamente acusadas de crimes;
• Identificar vítimas de crimes e catástrofes;
• Estabelecer paternidade e outros tipos de parentesco;
• Identificar espécies em perigo de extinção ou protegidas;
• Detectar bactérias e outros organismos que possam contaminar o ar,
água, solo e alimentos;
• Associar doadores de órgãos com os receptores em programas de
transplante;
• Determinar o pedigree para plantas ou animais domesticados;
• Autenticar produtos como caviar, queijos e vinhos (denominação de
origem).
GENOMA HUMANO
POLIMORFISMO GENÉTICO
• É a coexistência de alelos múltiplos em um lócus
cromossômico; regiões do genoma onde existem variações
entre as pessoas.

• Permitem construir um perfil genético indivíduo-específico

 “DNA fingerprint”

: RFLP (restriction fragment length polymorphisms) = polimorfimsmos de

sítios de restrição
: VNTR (variable number tandem repeats) – 8 a >50 pares de base = número
variável de repetições em tandem = minisatélites; STR (short tandem
repeats) - 2 a 8 pares de bases = pequenas repetições em tandem =
microssatélites
: SNP (single-nucleotide polymorphisms) = polimorfismos de nucleotídeo
único
COMPARAÇÃO DOS MARCADORES
Alec Jeffreys – 1985 (fingerprint de DNA)
GENOMA HUMANO
CARACTERÍSTICAS DO POLIMORFISMO
PARA USO FORENSE
A escolha dos loci STR baseou-se nas características abaixo:

• Alelos distinguíveis e discretos

• Fácil interpretação dos produtos de PCR

• Grande poder de discriminação

• Ausência de ligação genética com outros lócus analisados

• Baixos níveis de formação de artefatos experimentais

• Habilidade de ser amplificado em uma PCR multiplex

FONTES DE DNA DE AMOSTRAS FORENSES
 Recuperação de DNA em amostras de tecidos e fluidos
Amostra (tecidos Quantidade
Análise de RFLP Análise de STR
e fluidos) recuperada

1mL de sangue 20 a 40 mg SIM SIM

Manchas de
sangue seco de 200 ng NÃO SIM
1cm3
150 a 300 mg por
Sêmen SIM SIM
mL
Sêmen (esfregaço 0 a 3 mg (DNA dos
SIM SIM
vaginal pós-coito) espermatozóides)
Cabelo com raiz
(contendo bulbo 1 a 750 ng por fio NÃO SIM
capilar)

Saliva 1 a 10 mg por mL SIM SIM

Retirado de “Os exames de DNA nos Tribunais”, Revista Ciência Hoje (vol. 29, nº 169 - março/2001)
 MARCADORES STR AUTOSSÔMICOS
• Consiste em pequenas seqüências repetidas (usualmente di, tri ou tetra-nucleotídeos)
que estão em um segmento de DNA com uma variação no número de cópias, definindo
uma grande quantidade de alelos dentro de uma população.

• TCCCAAGCTCTTCCTCTTCCCTAGATCAATACAGACAGAAGACAGGTG
GATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAGATAT
CATTGAAAGACAAAACAGAGATGGATGATAGATACATGCTTACAGATGC
ACAC = 12 repetições GATA (“12” relatadas)

7 repeats
8 repeats
9 repeats
O número de repetições
10 repeats consecutivas pode variar
11 repeats entre as pessoas.
12 repeats
13 repeats

Região Alvo
(short tandem repeat)
NOMENCLATURA DOS MARCADORES STR
• Se o marcador é parte de um gene ou é englobado por ele o nome do
mesmo é usado para designá-lo.
TH01
Tirosina Hidroxilase
Região de repetição localizada dentro do íntron 1 do gene TH

• Algumas vezes o prefixo HUM é incluído no começo do nome indicando

que o locus faz parte do genoma humano. Assim o locus STR TH01
poderia ser corretamente listado como HUMTH01

• Os marcadores cromossômicos localizados fora dos genes podem ser

designados por sua posição no cromossoma.
D16S539
D: DNA
16: cromossoma 16
S:single copy sequence
539: 539th locus descrito no
cromossoma 16
CATEGORIAS DE MARCADORES STR
Estrutura de
Categoria 13 CODIS Loci
Repetição
Repetições simples – (GATA)(GATA)(GATA) TPOX, CSF1PO, D5S818,
contém unidade de identico
comprimento e sequência
D13S317, D16S539

Repetições simples
com alelos sem (GATA)(GAT-)(GATA)
TH01, D18S51, D7S820
consenso
(ex., TH01 9.3)
Repetições compostas
– compreende duas ou mais VWA, FGA, D3S1358,
(GATA)(GATA)(GACA)
repetições adjacentes D8S1179
simples
Repetições complexas
– contém vários blocos de (GATA)(GACA)(CA)(CATA)
D21S11
repetição variando no
comprimento
Esta categorias foram primeiro descritas por Urquhart et al. (1994) Int. J. Legal Med. 107:13-20
SNPs (POLIMORFISMOS DE NUCLEOTÍDEO
ÚNICO)
 0,3% of genome
SNPs são a forma mais simples e mais comum de polimorfismo
genético no genoma humano (90% dos polimorfismos no DNA
humano)
COMPARAÇÃO ENTRE SNPs E STRs
STRs CODIS - Combined DNA Index System
 Multiplex PCR
• Primers compatíveis são a
chave para o sucesso da PCR
multiplex.

• 15 ou mais loci STR podem ser

amplificados simultaneamente.

Vantagens da PCR Multiplex

• Análise mais rápida e aumento do poder de discriminação
• Redução do trabalho necessário à obtenção de resultados
• Redução da quantidade de DNA molde necessário
Multiplex PCR
PCR é usada para amplificar as regiões STR e marcar os amplicons com
corantes fluorescentes usando primers locus-específico.
Eletroforese em capilar
Escada alélica – kit comercial
Amelogenina – determinação do sexo
 AmpFlSTR® Identifiler™ (Applied Biosystems)

D7S820
D8S1179 D21S11 CSF1PO

TH01
D3S1358 D13S317
D16S539 D2S1338

D19S433 VWA TPOX D18S51

AMEL D5S818
FGA
1 análise integrada (Multiplex)
X
16 corridas separadas (Single plex)
Interpretação dos resultados
Comparação com a escada alélica
Mistura de DNAs na amostra forense
Três alelos em um lócus
DNA molde degradado
DNA degradado – Mini STRs
Identificação restos mortais
Cálculo da frequência do haplótipo
Cálculo da frequência do haplótipo
Correção
q = 0.01

0.0471

0.0391