W.I.F.

“CULTIVO DE
MICROALGAS”

M.Sc. Ing. LUIS A. RIVERA CH.

 INTRODUCCION
Con el creciente desarrollo de la acuicultura
en los últimos años, los estudios e
investigaciones que abordan la producción
de fitoplancton y de zooplancton en gran
escala son muy relevantes.

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El plancton constituye una unidad básica
de producción de materia orgánica en los
ecosistemas acuáticos. El plancton fue
descubierto en el siglo XVII y XVIII fue
Johannes Muler quien dio impulso a las
técnicas de estudio de plancton.

En América de Sur el conocimiento del

plancton de agua dulce permaneció
limitado hasta el siglo XX debido a la falta
de desarrollo de la limnología en los
países latino americanos.

3
Los principales problemas del cultivo masivo de
algas para la alimentación directa e indirecta de
las larvas y alevinos de peces es el costo de los
reactivos químicos necesarios para la
preparación de los medios de cultivo.
Medios alternativos, como fertilizaciones
químicos, estiércol, son otras fuentes que sirven
de sustitutos de los medios tradicionales,
además para contribuir para el reciclaje de
residuos de productos industriales.

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Las algas deben tener tamaño y forma
que permitan su captura, manejo e
ingestión, además la espesura de la
pared celular que determina la
digestibilidad y en parte el valor
nutritivo.
Dentro de las algas, las clorofítas ó
cloroficeas son de tamaño pequeño y la
pared celular fina y son consideradas
una buena fuente de alimento.

5
Fitoplancton y Zooplancton constituyen la
mayor parte del alimento de muchas especies
cultivadas.
Con el desarrollo de la acuicultura en el
mundo y la necesidad del aumento de la tasa
de sobrevivencia de las larvas y post larvas y
alevinos de peces en los cultivos; las
investigaciones han revelado la importancia de
la producción de alimento para el desarrollo de
las especies.

6
 Importancia Nutricional del alimento vivo

Varios organismos pueden ser cultivados para alimento.

Entre las algas están las cloroficeas Chlorella vulgaris,
Scenedesmus quadricauda, Ankistrodesmus gracilis y
Monoraphidium dybowskii.

Para que un alimento sea ingerido y seleccionado de forma

satisfactoria por las larvas ella debe tener:
 Tamaño y densidad alimentaria: debe ser adecuado o
compatible al tamaño de la boca del organismo a ser
cultivado (dm de la boca varia con la especie).
 Movilidad y capacidad de fluctuación: Debe tener
movimiento, de preferencia constante y sin gran
velocidad, y fluctuar; un organismo con gran intensidad de
movimiento o que sedimente rápidamente es indeseable.

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 Importancia Nutricional del alimento vivo

 Valor nutricional: Debe atender a las exigencias

nutricionales de la especie a ser alimentada.
Fácil digestión y absorción: Debe ser digerible y fácilmente
absorbido, con baja digestibilidad o alto valor nutritivo.
 Coloración: Debe ser colorido facilitando la visualización
y captura
Las microalgas son un grupo heterogéneo de plantas que
poseen una amplia diversidad.
Las microalgas unicelulares resultaron apropiadas para una
gran variedad de tipos de cultivo.

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 Importancia Nutricional del alimento vivo

Con el método de Guillard son 6 las clases de

microalgas que son cultivadas como alimento en los
viveros de diferentes tipos de organismos acuáticos.
En España, en el cultivo de la Concha de abanico se
utiliza Isochrysis galbana y Pavlova lutheri.
En Israel los cultivos de Spirulina se realizan para
mejorar las dietas humanas.
En la India también se cultiva Spirulina y
Scenedesmus en forma masiva.

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 Importancia Nutricional del alimento vivo
En Rusia trabajan con la Chlorophyta (Dunaliella salina).
En México Lago Texcoco se cultiva masivamente Spirulina
máxima.
En Brasil, núcleo Potenjì Proyecto camarón se cultivan varias
especies: Tetraselmis chuii, Chaetoceros gracilis, Nitzschia
closterium, Skeletonema costatum, Nannochloris y otras
En el Perú en 1971 se inicio el cultivo masivo de la chlorophyta
dulceacuícola Scenedesmus acutus var. alternans en la
cooperativa casa grande estos cultivos estuvieron orientados a
enriquecer las dietas humanas.
En 1984, la U. Villarreal, Figueroa y Beuzeville iniciaron
experimentos de microalgas (Chlorella sp. Navicula sp) para la
alimentación de larvas de bivalvos.
1985, Producción masiva de Spirulina platensis (proteína 70%)
10
 Abundancia máxima de los grupos
Fito planctónicos dominantes en
Ambientes de agua dulce

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 MÉTODOS GENERALES DE CULTIVO

El desarrollo de un método de cultivo de microalgas, depende

de los requerimientos y exigencia de la calidad de estos, en
las diversas etapas en que deben ser suministrados y estos
se pueden clasificar en:
Según su naturaleza:
 Cultivos Intensivos
Son aquellos cultivos en que los factores del
crecimiento se mantienen completamente bajo control
 Cultivos Extensivos
Son aquellos cultivos en que solo se controlan las variables
mas accesibles en el manejo técnico, tales como las
características químicas del medio y la densidad del cultivo,
como reguladora de la luz.

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 MÉTODOS GENERALES DE CULTIVO
Cultivos continuos
La población, las características químicas del medio, la temperatura y
la luz, son sostenidas en un valor constante, por periodos
prolongados, manteniendo un flujo constante de entrada de
requerimientos y salida de productos.
Cultivos Batch
Se caracterizan principalmente por intermitencia del cultivo. este
se implementa de una vez y se cosecha completamente, luego que la
población ha alcanzado un nivel apropiado de densidad.
Generalmente la cosecha se realiza en fase exponencial de
crecimiento. La carga de nutrientes y luz, son proporcionadas al
inicio del ciclo (cultivo de bivalvos)
Cultivos Semi continuos
Son principalmente una combinación de los dos métodos anteriores.
En ellos se cosecha una parte del medio según la producción y se
renueva el volumen cosechado con medio de cultivo fresco.

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 MÉTODOS GENERALES DE CULTIVO

SEGÚN EL NUMERO DE ESPECIES:

Cultivos monoalgales: Son aquellos que contienen una
sola especie de alga.
Cultivos pluricelulares o mixtos: Son aquellos que
contienen varias especies
Según la Salinidad: Pueden ser marinos o de agua
dulce.
Según el volumen de cultivo:
Cerrados.-Son aquellos en que el recipiente de cultivo
esta limitado en su volumen y nutrientes-
Abiertos.- Cuando por el deposito pasa continuamente
un flujo de agua y nutrientes.

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 CULTIVOS MONOESPECÍFICOS DE MICROALGAS

Fuente de alimento indispensable para:

• Estadios de crecimiento de moluscos bivalvos

• Estadios larvales de especies de crustaceos
• Estadios tempranos de especies de peces
• Producción masiva de zooplancton
• Estabilizador de la calidad del agua del cultivo
larval y control microbiano en la técnica de
“agua verde”

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CRITERIOS DE SELECCIÓN DE MICROALGAS EN ACUICULTURA

• Potencial de cultivo masivo

• Facilidad de manejo
• Tamaño celular apropiado
• Digestibilidad celular
• Valor nutricional de la especie

Más de 40 especies, aisladas en diferentes partes del mundo

y cultivadas como cepas puras:

Chlorella spp. Skeletonema costatum

Thalassiosira pseudonana
Chaetoceros gracilis
Isochrysis spp var. tahitiana
Nannochloris atomus
16
Chaetoceros calcitrans
Isochrysis galbana
Monochrysis luthery
Nannochloropsis oculata
CONDICIONES FÍSICAS Y QUÍMICAS PARA EL CULTIVO INTENSIVO

Parámetros Rango Óptimo

Temperatura (°C) 16 a 27 18 a 24
Salinidad (ppt) 12 a 40 20 a 24
Iluminación (lux) 1.000 a 10.000 2.500 a 5.000
Fotoperiodo 16 : 8 mín. 24 : 0 máx
pH 7a9 8,2 a 8,7
Agitación Aireación Aire + CO2
(0,03% C02) (1% vol. Aire)

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VALOR NUTRICIONAL DE ALGUNAS CEPAS EMPLEADAS EN ACUICULTURA

Especie Peso seco Clorfila a Proteínas Carbohidratos Lípidos

(pg x cél) (% del peso total seco)

Ch. calcitrans 11,3 3,01 34 6,0 16,0

Ch. gracilis 74,8 1,04 12 4,7 7,2
T. pseudonana 28,4 0,95 34 8,8 19,0
D. tertiolecta 99,9 1,73 20 12,2 15,0
N. atomus 21,4 0,37 30 23,0 21,0
N. oculata 6,4 0,89 35 7,8 18,0
I. galbana 30,5 0,98 29 12,9
Iso spp var.T 29,7 0,98 23 6,0 20,0
P. lutheri 102,3 0,84 29 9,0
C. salina 122,5 0,80 29 9,1 12,0

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 EFECTOS DE LAS MICROALGAS EN EL CULTIVO
LARVAL TIPO “AGUA VERDE”

Estabiliza la calidad del Fuente directa de alimento para

agua en sistemas estáticos, las larvas. Polisacáridos de pared
remueve metabolitos y celular estimulan a sistema inmune
produce O2. no específico de la larva.

Fuente indirecta de nutriente Aumenta la tasa de ingesta

para larvas a través de presas mejorando el contraste visual y
vivas, cuyo valor nutricional se la dispersión de la luz en el
mantiene gracias a las microalgas estanque de cultivo

Control microbiano por exudado algal en el agua

de cultivo o en el estómago larval
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 MATERIALES Y EQUIPOS
 MICRO ALGAS:
a) Cepas de Producción:
• Isochrysis galbana var. Tahiti.(cepa americana).
• Pavlova lutheri.
• Chaetoceros calcitrans.
• Chaetoceros gracilis.
b) Otras cepas:
• Chaetoceros mulleri.
• Phaeodactylum tricornutum.
• Nannochloris occulata.
• Tetraselmis suecica.
• Dunaliela tertiolecta.

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 MATERIALES Y EQUIPOS
 MATERIALES:
a. REACTIVOS QUIMICOS:
• Nitrato de sodio NaNO3.
• Fosfato de sodio. NaH2PO4. H2O
• Metasilicato de sodio Na2SiO3.9H2O.
Triz (Hidroximetil amino metano) Na2SiO3.9H2O.
• EDTA (Acido etilen diamino tetraacético di sódico) Na2SiO3.9H2O.
• Cloruro férrico. FeCl3.6H2O.
• Cloruro de Manganeso. MnCl2.4H2O.
• Molibdato de sodio. Na2MoO4.2H2O.
• Sulfato de Cobre CuSO4.5H2O.
• Sulfato de Zinc. ZnSO4.7H2O.
• Cyanocobalamina (B12).
• Biotina (H).
• Thiamina Hidroclórica. (B19.
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 MATERIALES Y EQUIPOS

REACTIVOS QUIMICOS:

• Acido clorhídrico puro.(37%).

• Bayfolan (abonos foliares) estado liquido.
• Biofolka (abonos foliares) estado granulado.
b) otros.
• Formol. Cloruro de potasio.
• Lugol. Bacto agar.
• Rojo de fenol. Agar Agar.
• Aceite de inmersión. Buffer 4-7-10.
• Ortotholodine.

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 MATERIALES Y EQUIPOS
c) MATERIALES DE LIMPIEZA Y DESINFECCION.
• Hipoclorito de sodio, (lejía comercial).
• Hipoclorito de calcio al 70%.
• Alcohol 96°.
• Acido muriático.
• Avlonwill desinfectante hospitalario.
• Jabón bacteriológico.
• Detergente lavavajilla.
• Filtros para aire de 1m.
• Filtros para agua de mar, bobinados 1m, 20” de largo.
• Filtros de papel 0.45 m y 0.20 m, 47 mm de diámetro.
• Mangas de filtrar de 1 m y 16” de largo.
• Otros.
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 MATERIALES Y EQUIPOS
d) MATERIALES DE VIDRIO.
• Matraz kitasato de 4 lt. y accesorios de filtrado.
• Erlenmeyer de 2, 1, 0.5, 0.25 lt.
• Pipetas graduadas de 10, 5, 1 ml.
• Pipetas Pasteur.
• Frascos ámbar de 1, 0.5, 0.25 lt.
• Placas Petri.
• Tubos de ensayo c/s tapas.
• Beakers de 1, 0.5 lt.
• Probetas de 100, 50, 25 ml.
• Cámaras de Neubauer.
• Termómetros de temperaturas máximas y mínimas.
• Termómetros ambientales.
• Viales para obtención de muestras.
• Otros.
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 TECNICAS DE CULTIVO
 Requerimientos Fisiológicos de las Algas
• Luz: es esencial para la realización de la fotosíntesis. La luz
puede ser administrada en forma natural o artificial (tubos
fluorescentes); fotoperíodo óptimo es de 16 : 8 (luz:
oscuridad).
• Temperatura: de 19º- 20ºC. La temperatura se logra con
los equipos de luz artificial, con estufas o aire
acondicionado
• Agitación: Los cultivos tienden a sedimentar por lo que se
deben agitar. Para volúmenes pequeños agitación manual,
para volúmenes grandes con aireadores, compresores de
aire, etc.

25
 TECNICAS DE CULTIVO
• Esterilización: Se debe esterilizar tanto el agua como los
implementos que se utilizan en el cultivo. Esto se logra con
sistemas de filtración del agua (filtros de arena, cartuchos, etc.),
autoclave, luz UV.
• Dióxido de Carbono: Para acelerar el crecimiento se puede
adicionar dióxido de carbono por burbujeo, o puede bastar el CO2
que entra por los aireadores.
• pH: puede variar entre 7,5 a 8,5.
• Salinidad: se encuentra en un promedio de 36.4 UPS.
• Sales minerales: Se deben adicionar nutrientes y sales para el
desarrollo óptimo del cultivo: nitratos, fosfatos, metales, tris,
vitaminas.

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 TECNICAS DE CULTIVO

 Calidad del agua:

• Recibir agua salada pasados por filtros de 1 micra.
• Pasarla por el equipo ultravioleta.
• Usarla para el lavado de botellas y para preparar medios
de cultivo.

27
0.5ml/litro de uv
 TECNICAS DE CULTIVO
1.- LIMPIEZA Y ESTERILIZACION

 El material de vidrio debe ser lavado con abundante agua

utilizando acido muriático diluido (1:1), detergente y bien
enjuagado.
 Posteriormente se lleva a secar a 100ºCx30 min. Se prepara el
material cubriéndolo con papel kraf, amarándolo con pabilo.
Luego se esteriliza a 180ºCx 1hr.
 Se prepara el medio de cultivo en matraces de 250 ml,
utilizándose de aquí también para set de tubos, sometiéndolos
a continuación a autoclavado (125ºC a 1 bar de presión por
30min.)

28
 TECNICAS DE CULTIVO

2.- CULTIVO

El cultivo de microalgas en
un hatchery se divide en
tres etapas que son las
siguientes:

 CULTIVO EN CEPARIO
 CULTIVO INTERMEDIO
 CULTIVO MASIVO

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 TECNICAS DE CULTIVO

 CULTIVO EN CEPARIO
Para partir con un cultivo monoalgal de microalgas en un hatchery
necesitamos una cepa inicial, la cual puede ser comprada o aislada
del medio natural. El aislamiento puede realizarse por dos métodos:
• Método del pipeteo : con una pipeta pasteur, y observando una
muestra natural en un microscopio, se toma una célula microalgal y
a través de sucesivas diluciones y pipeteos se logra el aislamiento.
• Método del rayado en agar: en una placa con medio de cultivo
preparado con agar se coloca una gota de la muestra natural y con
un asa o pipeta pasteur sellada en la punta se arrastra la gota sobre
la superficie del agar.

30
 TECNICAS DE CULTIVO
Las microalgas se mantiene en volúmenes pequeños por lo
general en tubos de ensayo de 10 ml (6 días), pasando después
a matraces de 250 ml (7 días). Sin aireación.

1ml.de nutriente/lt de 1/2

31
 TECNICAS DE CULTIVO

 CULTIVO INTERMEDIO
Los cultivos intermedios se realizan en volúmenes de 1 L hasta los
20 L
Se mantienen con aireación constante
Se agrega medio de cultivo (1ml.de nutriente/lt de 1/2).

32
 TECNICAS DE CULTIVO
 CULTIVO MASIVO
Se trabaja con volúmenes de producción de 50
L a 200L en laboratorio y en algunas
empresas en piscinas de hasta 200.000 L. El
punto critico de esta etapa del cultivo es la
cosecha puede ser de dos formas:
• Cultivo continuo: se inocula un estanque
con un volumen grande de agua y se usa por
varias semanas: una fracción del cultivo se
remueve regularmente para cosecha y se
reemplaza por agua de mar enriquecida .
• Cultivo sucesivo: se sigue una secuencia
con diluciones sucesivas aumentando los
volúmenes. El cultivo en el volumen más
grande se mantiene hasta una concentración
optima se ocupa y lo sobrante se elimina.

33
 TECNICAS DE CULTIVO
3.- MEDIOS DE CULTIVO
• Se han desarrollado diferentes medios para el cultivo de
microalgas que van desde las fórmulas para enriquecer el agua
de mar natural, hasta el uso de medios artificiales .
• En términos generales son los macronutrientes como carbono,
Nitrógeno, Fósforo, Silicio, Magnesio, Potasio y Calcio, se
requieren en cantidades relativamente grandes, mientras que
los llamados micronutrientes Fierro, Manganeso, Cobre, Zinc,
Sodio, Molibdeno y Cobalto se necesitan en menores
cantidades.

34
 TECNICAS DE CULTIVO

4.- CONTEO
• Conteo de células: se saca una muestra y se cuentan las células en un
microscopio usando un hematocitómetro.
 Otros métodos menos usados son:
 • Densidad óptica donde se usa un espectrofotómetro, la relación entre
densidad óptica y concentración celular debe estar preestablecido
 • Volumen celular , se centrifugan las muestras y el volumen
sedimentado se mide; medición de peso seco, las muestras centrifugadas
se secan y se llevan a peso constante.

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 TECNICAS DE CULTIVO
DETERMINACION DE DENSIDAD POBLACIONAL:
- recolectar en viales aproximadamente de 10 a 20 ml del cultivo de microalgas a
contar.
- Adicionar de 2 a 3 gotas de lugol para los cultivos de flagelados para asi detener su
movimiento.
-Agitar para homogeneizar la muestra.
-Colocar el cubre objeto.
-Con una pipeta pasteur, sacar 1ml de muestra e introducir una gota por el borde del
cubre objeto.
-Ver que la muestra colocada sea uniforme sin burbujas u otros elementos extraños.
-Dejar de uno a dos minutos para que las microalgas se estabilicen
-Usando un contador, realizar el conteo de las microalgas en los 5 cuadrantes, 4 en
las esquinas y 1 en el centro.
-Se cuenta en los 2 campos, luego se saca un promedio.
-Para conocer la densidad, el promedio obtenido se multiplica por por 50000.
-Esto nos da el numero de microalgas por mililitro.

36
 GRACIAS POR
SU ATENCION

37
TRABAJO ENCARGADO:

BUSCAR EN INTERNET TODAS LAS ESPECIES:

Chlorella vulgaris, Scenedesmus quadricauda, Ankistrodesmus gracilis,
Monoraphidium dybowskii. Isochrysis galbana, Pavlova lutheri.
Dunaliella salina, Tetraselmis chuii, Chaetoceros gracilis, Nitzschia
closterium, Skeletonema costatum, Nannochloris

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