División celular División celular

Duplicación y
transmisión de la
información
genética
Mantenimiento de la vida

Replicación de
DNA
Reparación y
Recombinación
5´ 3´
DNA 3´ 5´

Transcripción

RNA 5´ 3´

Traducción
Proteína NH2 COOH
 Mecanismos genéticos
básicos

Replicación
Supervivencia a corto
plazo Estabilidad genética

Reparación

Recombinación

Supervivencia a largo
plazo Variabilidad genética Mutación

Transposición
 Repaso….

Ácidos nucleicos
Biopolímeros, de elevado peso
molecular, formados por monómeros,
C 5’ denominados nucleótidos.
4’ C 1’
C
3’ 2’
 Extremo 5´

G
C5 Repaso….

C3
Las bases nitrogenadas son 4: dos
A purinas, adenina y guanina y dos
pirimidinas, timina y citosina

Para formar un polímero, los

T nucleótidos se unen entre sí por
enlaces fosfodiéster (unión covalente:
Enlaces el fosfato establece un puente desde el
fosfodiéster carbono 5 de la pentosa de un
nucleótido al carbono 3 de la pentosa
C del nucleótido anterior

Extremo 3´
 Indagando sobre la estructura del DNA…

Composición de bases en el ADN de organismos y tejidos seleccionados

Existe una relación simple entre las bases del ADN independientemente
Erwin Chargaff de la fuente del ADN
1949
“las “proporciones de purinas a pirimidinas y tambien de adenina a
timina y de guanina a citosina son cercanas a 1”
 Indagando sobre la estructura del DNA…

Rosalind Franklin

La foto 51. La difracción de los rayos X a través critales de

ADN produce una característica imagen en “X”. En su
conjunto la interpretación de la foto permite deducir que el
ADN posee una estructura helicoidal y que existen tres
patrones regulares y repetidos en la molécula con
dimensiones de 0,34 nm, 3,4 nm y 2,0 nm.
 Modelo de la estructura del DNA
1953

Watson y Crick
Premios Nobel en Medicina y
Fisiología
1962
La molécula de ADN consiste en dos cadena de polinucleótido dispuestos en
una doble hélice enrollada. Los grupos azúcar fosfato forman la parte
externa y bases complementarias unidas por enlaces de puente H se
disponen en a lo largo del eje central.
Las dimensiones de 0,34 nm corresponen a la distancia entre bases, 3,4 nm a
10 bases que logran un giro completo mientras que 2,0 nm es el ancho de la
hélice.
 Estructura del DNA

Las dos cadenas de azúcar fosfato presentan

direcciones opuestas (son antiparalelas). Esta
orientación permite a las bases
complementarse en parejas.
 Estructura del DNA

Enlaces de hidrógeno entre los pares de

bases de adenina (A) y timina (T) (en la
parte de arriba) y guanina (G) y citosina
(C) (en la parte inferior). El par AT tiene
dos enlaces de hidrógeno, el par GC
tiene tres.
 Modelo de la estructura del DNA

Watson y Crick
1953
“No escapa a nuestra atención que el
apareamiento específico que
se ha postulado sugiere inmediatamente un
posible mecanismo de copiado
del material genético”.

El apareamiento y la secuencia de bases nucleótidicass en el

ADN proporcionan el fundamento para comprender tanto la
replicación del ADN como la herencia del material genético.
 Modelo de la estructura del DNA

Watson y Crick
1953
El modelo sugirió que debido a que el par de nucleótidos entre
sí se complementan, cada cadena de la molécula de ADN
podría servir como una especie de guía o plantilla para la
síntesis de la cadena opuesta.
 A partir de la estructura del DNA se constituyen las bases moleculares de la herencia:
 Como es almacenada la información genética (Código genético)
 Como es copiada dicha información

Una hebra sirve de molde para la síntesis de novo de una

Replicación nueva hebra por complementariedad de bases.
Replicación semiconservativa
La replicación es la adición sucesiva de nucleótidos (polimerización) tomando como molde una de las
hebras. La reacción es catalizada por DNA polimerasas.
La reacción de polimerización.
 Se produce por adición de un desoxirribonucleótido al extremo 3’ OH de la cadena en extensión.
 La cadena molde es la que determina que nucleótido es el incorporado.
 La dirección de la polimerización es siempre 5’ → 3’.
 La reacción es motorizada por un cambio de energía libre altamente favorable causado por la
liberación de un grupo pirofosfato y su subsecuente hidrólisis en dos moléculas de fosfato inorgánico.
DNA polimerasas bacterianas.
DNA pol I. Involucrada en procesos de reparación y en un rol subsidiario en la replicación.
DNA pol II. Involucrada en procesos de reparación.
DNA pol III. Responsable de la síntesis de novo del DNA durante la replicación.
DNA pol IV y V. Involucrada en procesos de reparación.

DNA polimerasas eucariotas.

DNA pol I (). Síntesis de primers de RNA (Primasa)
DNA pol II (). Involucrada en procesos de reparación.
DNA pol III (). Responsable de la síntesis de novo del DNA durante la replicación.
DNA pol . Involucrada en procesos de reparación.
DNA pol . Replicación de DNA mitocondrial.
 Horquilla de replicación
Se distingue una hebra sobre la que la replicación
es continua: hebra líder o adelantada (“leading
strand”) y una en la que el proceso es discontinuo:
hebra atrasada (“lagging strand”).
Replicación discontinua sobre la
hebra atrasada
 Elementos enzimáticos involucrados

 DNA polimerasas.
 DNA primasas (síntesis de primers de RNA).
 DNA helicasas ( apertura de la doble hélice).
 SSB (“single strand binding protein”, unión a la cadena simple para su estabilización).
 RNAsas (RNAsaH, limpieza de los primers de RNA).
 DNA polimerasas y ligasas resintetizan la secuencia correspondiente al primer y
sellan).
 Topoisomerasas ( descomprimen el superenrrollamiento causado por la apertura de
las hebras.
  Proceso de alta precisión y fidelidad (1 mutación por cada
109 nt por replicación)
Replicación  Proceso de alta velocidad (1000 nt/sec)
Maquinaria enzimática altamente especializada
Las enzimas de replicación forman parte de un único complejo que se desplaza a medida que
genera la horquilla.
 Algunas diferencias entre procariotas y eucariotas

 En eucariotas participan una polimerasa extra, la DNA pol  que es la que

sintetiza los primers de RNA sobre la hebra atrasada.
 Tamaño de los fragmentos de Okazaki: procariotas de 1000-2000 nt, eucariotas
de 100-200 nt (coincide con la distancia existente entre nucleosomas).
 Velocidad del proceso de replicación: procariotas 1000 nt/sec (E. coli replica su
cromosoma completo en 1 hora); en eucariotas es más lento 100 nt/sec (se
produce en la fase S del ciclo celular de aproximadamente 8 hs).
 La replicación del ADN en bacterias y eucariotas es bidireccional pero en las
primeras se produce a partir de un único origen de replicación mientras que en los
últimos los orígenes de replicación son múltiples.
  Proceso de alta precisión y fidelidad (1 mutación por cada 109 nt
por replicación)
Replicación  Proceso de alta velocidad (1000 nt/sec)
Maquinaria enzimática altamente especializada
 Sistemas de chequeo y corrección de la polimerasa

“Checking proofreading” “Exonucleolytic proofreading”

La polimerasa posee mayor afinidad por el nt
correcto que por el no correcto. Luego del
“binding” pero antes de la catálisis la
polimerasa sufre ciertos cambios
conformacionales que le permite chequear el
nt a ser unido.
Un nt mal apareado en el terminal 3´OH a ser
extendido no es buen sustrato de
polimerización. La polimerasa posee un
dominio independiente con actividad
exonucleasa que elimina los nt mal apareados
regenerando la cadena naciente.

La polimerasa funciona como una enzima que se auto corrige eliminando

sus propios errores a medida que avanza en el proceso de polimerización.
 El crecimiento de la cadena
polimerizada es en dirección 5’→
3’ debido a que en la dirección
contraria no sería posible la
actividad “proofreading”.
 Sistemas de reparación postreplicativa

Sistema de reparación de bases apareadas incorrectamente (MMRS) E.coli

CH3 CH3 CH3 CH3

MutS
exonucleasa

MutL
CH3 CH3 CH3 CH3

MutS
polimerasa
MutL

CH3 CH3 CH3 CH3

MutS ligasa
MutH

“Strand directed mismatch repair system”

 En humanos la señal para la distinción de la hebra recién
sintetizada está dada por la presencia de “nicks” o cortes de
simple cadena.
 Mecanismos genéticos
básicos

Replicación
Supervivencia a corto
plazo Estabilidad genética

Reparación

Recombinación

Supervivencia a largo
plazo Variabilidad genética Mutación

Transposición
 Accidentes metabólicos

Sustancias tóxicas Radiación

Calor

Mutagénesis

Mecanismos de reparación
Alteraciones espontáneas.
Daños oxidativos
Ataques hidrolíticos
Metilaciones no controladas.
Dimerización de
pirimidinas
Mutagénesis
 Mecanismos de reparación

La estructura en doble hélice del DNA es ideal para la

reparación ya que porta dos copias con la misma
información.

En todo proceso de reparación la cadena no dañada

sirve de molde para la reparación.
 Reparación por escisión de bases

 Adeninas y citosinas deaminadas

 Bases “alkiladas” u oxidadas.
 Bases con anillos abiertos.
 Bases en donde la unión doble C=C ha
sido cambiada por C-C.
 Reparación por escisión de nucleótidos

Distorsiones del DNA en general.

 Dímeros de pirimidinas.
 Lesiones generadas por la unión
covalente del DNA a ciertos hidrocarburos.
Reparación cortes de doble cadena