Drogas de la Biotecnología

 Parte I Conceptos Basicos

 Parte II Procesos: Calidad y Seguridad
 Parte III Una lista de chequeo para
inspección

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Porque los Productos de
Biotecnología son Diferentes de los
Compuestos Orgánicos Simples?
Drogas sintéticas Biológicos
Moléculas Pequéñas Moléculas raras y complejas
De Fácil Síntesis Fuente Animal
 Aspirina  Insulina
 Oligopeptidos  Heparinas
Hemi-Síntesis Fuente Humana necesaria
Necesidad del estero-isómero  Hormona de Crecimeinto
activo  Factores de Coagulación
 Esteroides  Albumina
 Antic{ancer
 Antimetabolitos
 ciclosporina

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Drogas de Biotecnología
Mejor Rendimineto & Mejor Seguridad
 Insulina

 Hormona de Crecimeitno Humano

Moléculas modificadas
Extraccíon imposible
 Eritropoyetina

 Interferon

 Interleuquinas

 Factores de Crecimiento

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 Los Procesos de Producción
Són Diferentes
Productos de Biotecnología Drogas Convencionales
 Producidas por purificación  Producidos por

 Materia primas varibles formulación

 Muchos test en proceso  Materia primas definidas

 Complejos test en producto  Pocos test en proceso

terminado  Test simples en producto

 Proceso específico para el terminado

producto  Procesos específicos para

 Tamaño de lote pequeño(g o el producto (posibles

Kg de producto final) generalizaciones)

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Drogas de Biotecnología
 Uso de microorganismos (procariotes o
eucariotes) geneticamente modificados
para la producción of moléculas
complejas
 Después de la purificación, se usan en
terapéutica human o animal

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Productos Medicoas Derivados
del DNA Recombinante
 Inserción de secuencias de origen
natural en un vector
 Introducción en un hospedero
adecuado para asegurar la expresión
del producto deseado

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Cinco Características de una
Droga Biotecnológica
1. Sistema de expresión del gen
2. Sistema de producción compatible con
el microorganismo
3. Sistema de purificación
4. Naturaleza del producto activo
5. Formulación Farmacéutica y
presentación

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Cinco Características de una Droga de
Biotecnología
1. Sistema de Expresión: Vector +
Hospedero

Identificar, aislar y clonar el gen que

cofifica la proteina deseada

Construir un vector que contiene:

 El gen
 Los controles de la expresión (Promotor, señal de secreción,…)
Inserte el vector en el microorganismo
seleccionado
 Escherichia coli
 Saccharomyces cerevisiae
 Células animales
 Plantas genéticamente modificadas 8
Sistema de Expresión: Contrucción
del Vector + Hospedero
Origen de replicación ADN blanco
Sitio de
restricción
Sitio de restricción
Resistencia a Tc Endonucleasa
Endonucleasa de restricción de restricción

Hibridación

DNA ligasa

Plásmido recombinante

Cromosoma
Transformación, selección de TcR
Plásmido recombinante
Cinco Características de una Droga de
Biotecnología
2. Sistema de Producción

Propósito
 Optimizar condiciones de supervivencia de
m.o. geneticamente modificado
 De tal manera que produce la proteina
deseada
 Con aceptable rendimiento

Materials & Metodos

 Selección del medio de cultivo

 Selección de las condiciones de cultivo

 Selección de los equipos de cultivop,

fermentador, citoreactor 10
Cinco Características de una Droga de
Biotecnología
3. Sistema de Purificación

Propósito
 Extraer la proteina de un medio complejo de
crecimiento
 Lograr el 100% de purece o muy cercano

 Sin alterar la proteina

Materiales & Metodos

 Secuencia de los pasas de purificcación

 Filtración/Ultrafiltración

 Precipitación/Resolubilización

 Cromatografía (Intercabio, afinidad, etc.)

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Cinco Características de una Droga de
Biotecnología
4. Naturaleza del Producto Activo

Proteinas
 Cadenas de aminoácidos

 Secuencias de aminoácidos codificadas

por genes
 Conformación tridimencional

 Para obtener actividad biológica

 Modificaciones post-transduccionales
dependientes del hospedero (azucares…)
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Cinco Características de una Droga de
Biotecnología
5. Formulación y Presentación
Farmacéutica

Propósito
 Mantener la actividad biológica
 Manteniendo la conformación activa de la
proteina en la solución
Materiales & Metodos
 Estabilización (albumina, glicerol)
 Almacenamiento a baja temperatura

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Drogas de Biotecnología

 Parte I Conceptos básicos

 Parte II Proceso: Temas de
Calidad & Seguridad
 Parte III Una lista de chequeo
para inspección

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 Diagrama de Flujo del Proceso

Fermentación-
cultivo

Cosecha
Material
de Inicio Purificación
Acabado
Farmacéutico

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Un Banco de Células
 Coleeción de viales de composición
uniforme almacenados bajo condiciones
definidas, cada una contiene una
alícuota de un “pool” de células

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Banco Celular Maestro (BCM)
 Generalmente derivado de un clone
celular que contiene el constrcuto de
expresión
 The BCM es usado para derivar todos
los Bancos Célulares de Trabajo

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Banco Celular de Trabajo del
Fabricante
 Derivado por la expansión de uno ás
viales de BMC bajo condicones definidas
de trabajo
 El BCT es usado para la producción de
los lotes

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Banco Celular Expandido
Tardío (BCET)
 Obtenido de la propagación de células
usadas para la producción de la
proteina recombinante, variso repiques
después del repique de producción
 Se usa para revelar una potencial
contaminación viral baja y para estudiar
la estabilidad genética del transgénico

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 Sistema del Banco de Ce´lulas
Linea Celular Parental Transformación
Genética

Banco Celular Maestro (BCM) Expanción

Material
de Inicio Banco Celular Expanción
de Trabajo del Fabricante (BCTF)

Sustrato de Producción Expanción

Banco Celular
Expandido Tardido (BCET) 20
 Sistema del Banco Celular
Célula Genéticamente Modificada

Hospedero

Plásmido Banco Celular Maestro

BCM

Banco Celular de
Trabajo del Fabricante
BCTF Banco Celular
Tardío Expandido
BCTE
Multiplicación

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 Diagrama de Flujo del Proceso
Fermentación-
cultivo

• Diversos de Sistemas de Propagación

(Fermentador, Botella Rodante, Matraces de
Material Fermentación, Sistemas de Cultivo de
de Inicio Células, airlift, Fibra hueca

• Diversos Medios de cultivo

(Totalmente sintéticos o que contienen
componentes de origen animal)

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 Diagrama de Flujo del Proceso

Fermentación-
cultivo

Cosecha
Material
de Inicio
• Sistema de producción discontinuo
(desde el fermentador)

• Sistemas Continuos de producción

(Varias cosechas del sobranande del cultvo)

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 Diagrama de Flujo del Proceso

Fermentación-
cultivo

Starting Cosecha
material Purificación

• Diversas estrategias de estracción

(Desde el sobrenadante o Lisis celular)
• Diversos métodos de purificación
(De acuerdo a los potenciales
contaminantes) 24
Purificación: Contaminantes
Potenciales
 Que tipo de contaminantes se pueden
encontrar?
 Cuál es la fuente de la contaminación?
 Cuán peligrosos són?
 Se pueden remover?
 Cómo podemos asegurar su remosión?

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 Purificación: Contaminantes
Potenciales
Impuresas relacionadas Impuresas
al proceso relacionadas al
 Derivadas del sustrato
producto
celular  Formas truncadas

 Derivads del cultiv o  Otras formas

celular modificadas
 Derivadas del proceso  Agregados

de recuperación

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Purificación: Contaminantes
Potenciales
Contaminación Microbiana: Agentes
Adventisios
 Prevenir en las células originales o en
los BCM
 Virus adventicios introducidos durante

la producción

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Purificación: Contaminantes
Potenciales
Riesgos:
 Toxicidad
 Metales pesados, bromuro de cianogeno, antibiíticos…
 Actividad farmacológica alterada
 Agregados, peroductos degradados
 Immunogenicidad
 Oncogenicidad
 Enfermedades Infeciosas
 Micoplasmas, levadura, virus

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 Purificación: Remosisón de
Contaminantes
Una secuencia de diversos métodos:
 Precipitación
 Filtración
 Cromatografía líquida basada en difernetes principios
físicos y químicos
 Afinidad, hidrofobicidad, peso molecular, carga
eléctrica…

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Drogas de Biotecnología

 Parte I Conceptos básicos

 Parte II Proceso: Temas de Calidad
& Seguridad
 Parte III Una lista de
chequeo para inspección

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 El Sistema de Purificción Debe
Ser:
 Apropriado
 Justificado
 Validado

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 Diagram de Fujo del Proceso

Fermentación-
cultivo

Cosecha
Starting
material Purificación
Acabado
Farmacéutico
• Estabilización
(De acuerdo a la proteina y la forma de entrega)
• Almacenamiento
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 Una Lista de Chequeo Para
Inspección
 Enfóquese en los cambios del proceso
farmacéutico
 No clasifique a priori un cambio en el proceso
como mayor o menor
 Considere las consecuencias potenciales
sobre el producto en términos de :
 Calidad
 Seguridad
 Eficacia

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Cambios en el Proceso de
Manufacturación
Principales Razones Para Introducir
Cambios
 Mejoramiento de la Calidad del Producto

 Incrementa el rendimiento de producción

 Productividad global

 Ahorro en costos

 Escalado de la producción

 Nuevos sitios de producción

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 Una Lista de Chequeo Para
Inspección
1. Sistema de Banco de Células
2. Proceso de Fermentación/Cultivo
3. Procesos de Purificación
4. Substancia
5. Formulación y Llenado
6. Producto Final

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 Guias Para Inspección:
1. Sistema de Banco de Células
 GMP Diseño de Planta
 Documentación del origen dela célula
 Establecer condiciones para Bancos
Celulares (Mastro), (Trabajo) and
(Expandidos Tardíos:
 Documentación de seguridad viral
 Documentación de condiciones de expansión
 Condiciones de almacenamineto
 Medidas tomadas contra la contaminación

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 Guias Para Inspección:
2. Procesos de Fermentación/Cultivo
 Material de inicio(celulas)
 Nuevos proveedores
 Especificaciones
 Adición/Sustitución de nuevos materiales
 Condiciones del cultivo celular
 pH, oxígeno, temperatura, tiempo, % de reactivos,
formulación del medio de cultivo…
 Escla del modo de fermentación/cultivo
 Equipo
 Cambios de los sitios de fermentación o instalaciones

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 Guias Para Inspección:
3. Procesos de Purificación
 Cambio Columnas/resinas
 Tamaño de la columna, proveedor, Condiciones de
limpieza, condiciones de almacenamiento
 Reactivos
 Nuevos proveedores, especificaciones, reemplazo de
materia prima
 Protocolos de Purificación
 Adición/sustitución/eliminación pasos específicos
 Escala del proceso de recuperación
 Equipos

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 Guias Para Inspección:
4. Principio Activo
 Definiciones del lote
 Condiciones de almacenamiento
 Estrategia de recolección o
agrupamiento

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 Guias Para Inspección: 5.
Formulación y LLenado
 Excipientes
 Equipos
 Proceso de Fabricación
 Scala
 Cambios en el sitio/Instalaciones
 Almacenamiento y Condicones de
Embarque

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 Guias Para Inspección:
6. Producto Final
Control de :
 Identificación
 Puriza
 Actividad
 Stabilidad
 Seguridad General
 Esterilidad
 Pirogenicidad

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 Guias Para Inspección: :
Resumen
 Material de Inicio limpio
 Línea Celular bien caracterizadas
 Banco de celular
 Procesos de producción y purificación
validados
 Controles (En Porceso)
 Ensayos específicos para producto final
 Cumplimiento de las GMP.

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Conclusiones
El creciente número de productos de
biotecnología requiere profesionales
altamwente calificados para
inspeccionar procesos de producción
complejos y cambientes

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