Producción de

antibióticos
Producción y extracción de Penicilina a partir del moho de la
cascara de Naranja
 Zavala Riveros Katherine

RESUMEN

• Este proyecto pretende evaluar la extracción y producción de la penicilina a

partir del moho penicillium extraído de la naranja.
• La penicilina es uno de los productos naturales que más ha cambiado el
curso de las enfermedades infecciosas, esta sustancia química tiene
propiedades sobre las bacterias infecciosas, inhibe su crecimiento.
• La penicilina se producirá mediante los procesos de sembrado y crecimiento,
lavado y separación.
• Los medios de cultivos en placa utilizados son de tipo sólidos y líquidos.
 Vilcapaza Charca Kate Elizabeth

Antibióticos
• Sustancias químicas, producidas por microorganismos, que matan o inhiben
el crecimiento de otros organismos generalmente bacterias
• Son productos del metabolismo secundario
• Producidos por hongos filamentosos y bacterias de grupo de los
actinomicetos
• Se conocen mas de sustancias antibióticas, la mayoría producidas por unos
pocos géneros:Streptomyces, Penicillium y Bacillus.
Vilcapaza Charca Kate Elizabeth
 Cumpa Pinedo Maria de los Angeles

• Uno de los productos naturales que más ha cambiado el curso de las enfermedades
infecciosas es la Penicilina, esta sustancia química es producida por el moho
Penicillium y tiene propiedades sobre las bacterias infecciosas, inhibe su crecimiento.
• El bacteriólogo británico Alexander Fleming debe su fama al descubrimiento de la
penicilina, un antibiótico que revolucionó la medicina moderna. La utilización de
esta sustancia permite tratar diversas enfermedades que, hasta bien entrado el siglo
XX, se consideraban incurables. El bacteriólogo británico descubrió el antibiótico
en 1928, al estudiar un cultivo de bacterias que presentaban un estado de lisis debido
a la contaminación accidental con un hongo, el mismo que se produce sobre las
naranjas.
 Cumpa Pinedo Maria de los Angeles

PRODUCCION DE PENICILINA
• La penicilina es una sustancia química producida por un organismo vivo que
muestra actividad inhibidora o germicida frente a microorganismos. La
actividad antibiótica se califica en ocasiones de: antibacteriana, antifúngica o
antimicrobiana.
• Los antibióticos son producidos por ciertos hongos, bacterias, actinomicetos,
algas y líquenes. Muchos mohos producen antibióticos, tales como la
penicilina que es el ejemplo más destacado producido por los mohos.
 Almanza Obregón Sherlin Dayana

Aislamiento y purificación de la penicilina

• La primera fase es el proceso de recuperación es la separación del micelio o

células por filtración o centrifugación.
• La segunda fase importante consiste en extraer el antibiótico del medio de
producción agotado, con disolventes, por adsorción, por precipitación o por
una combinación de estos métodos.
• Para la extracción se puede usar acetato de amilo, éter, cloroformo, acetona y
otros disolventes según la solubilidad del antibiótico, posibilidad práctica,
y otros factores.
 Almanza Obregón Sherlin Dayana

• La temperatura, la regulación del pH son factores

muy importantes para la consecución de elevados
rendimientos de extracción de antibióticos.
• La adsorción se puede realizar sobre carbón activo,
resinas de intercambio iónico u otros materiales.
• La purificación se realiza por extracción adicional
con disolventes, destilación, sublimación,
cromatografía en columna o por otros
procedimientos dependiendo de la naturaleza del
antibiótico.
 Almanza Obregón Sherlin Dayana

Aislamiento purificación
METABOLISMO DE
MOHO PENICILLUM
CRISOGENUM
 Quispe Montañez Manuel
Anaerobios estrictos
Quispe Montañez Manuel
Rutas metabolicas AnconeyraCristian
 AnconeyraCristian

Metabolismo :quimioorganotrofo
• Forma de obtener energía: fermentación
• Cadena respiratoria
 Cabrera Minga William

• Fermentación láctica
Fermentaciones
CH3COCOOH+NADH CH3COHCOOH+NAD+
Ácido pirúvico ácido láctico
• Fermentación alcohólica
CH3COCOOH CH3CHO
CH3CHO +NADH CH3CH2OH+NAD+etanol
• Fermentación ácido mixta
• Productos de fermentación: ácido fórmico,
acético,
láctico, etanol, CO2, H2
• Producida en hidrogenosomas
• Característica de anaerobios estrictos
MATERIALES Y EQUIPOS

MATERIALES:

o Laminas porta objetos

o Mechero

o Pizeta con agua

destilada

o Agitador y pipetas
(esterilizadas)
MATERIALES:

o Vaso precipitado(esterilizado)

o Matraz(esterilizado)

o Mortero

o 4 placas Petri

o Papel filtro

o 2 tubos de ensayo
 INSUMOS O
REACTIVOS:

 Leche
Naranja descompuesta (llena  Carbon activado
de moho)
 Cristal de Violeta
 2 gr de Agar
 Acetona
 1 gr de Azucar
 Lugol
 100 gr de papa
 Safranina
 Maiz
 Alcohol
 EQUIPOS

 Balanza

 Microscopio

 Microondas ( para
esterilización)
 PROCEDIMIEN
TO
Antes de empezar con el procedimiento se deberá esterilizar todos los
materiales a utilizar ya que se trabajara con hongos.

1. Método del medio de cultivo de maíz:

 Moler el maíz utilizando el mortero.

 Pesar 3g de maíz molido.
 Agregar agua al maíz pesado hasta obtener una masa espesa.
 Medir 5ml de lactosa (leche) y agregar a la masa espesa (maíz y agua).
 Con las placas Petri ya esterilizados, verter la solución en toda el área
circular.
 Extraer el hongo del fruto (naranja) con ayuda del asa de Coli y sembrar en el
medio de cultivo de maíz.
 Esperar evolución y crecimiento del hongo.
Método del medio de cultivo de Papa Dextrosa Agar
(PDA)
 Resumen y Explicación del Producto

El Agar Papa Dextrosa (Potato Dextrose Agar, PDA, por sus siglas en inglés) es un
medio de propósito general para levaduras y mohos que puede ser suplementado
con ácidos o antibióticos para inhibir el crecimiento bacteriano.
Es recomendado para uso con métodos de conteo en placa para alimentos,
productos lácteos4-6 y pruebas realizadas en cosméticos.
El Agar Papa Dextrosa (PDA) puede ser usado para el cultivo de levaduras y mohos
clínicamente significativos. La base (infusión de papa) nutricionalmente rica,
estimula la esporulación de los mohos y la producción de pigmentos en algunos
dermatofitos.
 Principios del Procedimiento

El Agar Papa Dextrosa está compuesto por Infusión de Papa deshidratada y

Dextrosa que fomentan el crecimiento exuberante de los hongos. El agar es
adicionado como agente solidificante.
 Fórmula / Litro
• Infusión de Papa (Potato Infusion) ............................................ 20 g
• Dextrosa (Dextrose)....................................................................... 2 g
• Agar ................................................................................................. 2 g
• Agua destilada ..............................................................................100 ml
 procedimiento
1. Lavar, cortar 20gr de papa y hacerlas hervir en 100 ml de agua destilada
por 5 minutos.
 procedimiento
• Colar; disolver en el líquido 2gr de dextrosa (azúcar) y 2gr de agar,
manteniendo la temperatura de 60 °C.
 procedimiento
• Dejar que baje la temperatura y vaciar la solución a las placas Petri en toda el
área circular.
 procedimiento
• Extraer el hongo del fruto (naranja).
 procedimiento
• Sembrar los hongos en el medio de cultivo PDA
con ayuda del asa de Coli.

• Esperar evolución y crecimiento del hongo.

MÉTODO PARA EL AISLAMIENTO DE LA
PENICILINA (PARA LOS DOS MEDIOS DE
CULTIVO)
Calsina Marron Efrain
• Se procede a destapar todas las cajas de Petri, y hacer un
raspado para obtener el hongo.
• En un vaso precipitado con agua, poner el raspado de
los hongos.
• Preparar papel filtro dentro de un embudo.
• Encima del papel filtro colocar el carbón activado.
• Utilizando el embudo de separación se filtra la solución
de agua con el raspado de los hongos.
• Luego el carbón activado que absorbe el antibiótico se
separa por medio de un solvente la acetona al 80%.
• Y finalmente en un montaje de destilación y por medio
de la elusión el cual por evaporación deja al antibiótico.

Calsina Marron Efrain

 Cespedez Yanapa Sandra

Resultados de la muestra de saliva con penicilina G

Tabla 1: resultados de la observación con efecto de penicilina G, obtenida con
dos diferentes tipos de medio de cultivo .

Moho Bacteria gram Bacteria gram

Penicillum negativa negativa
Cresugenum
Cultivo con positivo positivo
maíz
Cultivo con positivo positivo
nutriente agar
agar
 Cespedez Yanapa Sandra

Gastos para los experimentos empleados.

Azúcar 20 gr 0.30
papa 100 gr 0.30
gasa 1.00
agar agar 5 gr 5.00
papel para esterilizar 1.50
Total 8.10

Maíz 100 gr 1.5

papel para esterilizar 1.5
Total 3.00
 Cespedez Yanapa Sandra

Rendimiento de las penicilinas como bactericida de las GRAM NEGATIVA.

Prueba de saliva:
Se pudo observar que al agregar gotas de penicilina G a la bacteria de la saliva, la penicilina
cultivada con maíz dio mejores resultados en comparación con la cultivada con agar agar.
PRUEBA DE
TINCION
Arucutipa Apaza Rene
 TINCION
• La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción
diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre
todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian
Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 18841. Se utiliza tanto para
poder referirse a la morfología celular bacteriana,como para poder realizar
una primera aproximación a la diferenciación bacteriana,
considerándose bacterias grampositivas a las que se visualizan de color
morado, y bacterias gramnegativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o
grosella.
 TINCIÓN GRAM
• El cristal violeta actúa como un colorante primario, que se une a la pared celular bacteriana luego de un tratamiento con una
solución débil de iodo (Mordiente). Algunas bacterias debido a la naturaleza química de sus paredes celulares, poseen la capacidad
de retener el cristal violeta, aún luego del tratamiento con un decolorante orgánico, tal como una mezcla de alcohol y acetona. Tales
bacterias se denominan Grampositivas.
• Las bacterias Gramnegativas debido a su mayor contenido lipídico en su pared celular, pierden la coloración primaria del cristal
violeta cuando son tratadas con el decolorante. El colorante secundario o de contraste utilizado es la safranina. Las bacterias
Gramnegativas que han perdido el cristal violeta, aparecen rojas o rosadas vistas al microscopio, habiendo fijado la safranina como
contracolor a sus paredes celulares.
• Las bacterias aparecen de color azul, aunque el grado de absorción del colorante por los diferentes microorganismos es variable, y
algunas estructuras como las esporas absorben el colorante con dificultad son así fácilmente diferenciables.

Reactivos
• - Solución de Cristal Violeta (Cristal violeta= 1.0 g, Alcohol 95º = 20 ml, Agua destilada csp=100 ml)
• - Solución de Lugol (Yodo en cristales, 1.0 g, Yoduro de potasio= 2.0 g, Agua destilada= 100 ml)
• - Decolorante (Acetona= 50 ml, Etanol= 50 ml) ó Etanol comercial
• - Safranina ( Safranina= 0.25 g, Alcohol 95º= 10 ml, Agua destilada csp=100 ml)
 PROCEDIMIENTO
• Coloque una asada de caldo nutritivo que contiene una mezcla de bacterias Grampositivas y Gramnegativas sobre una lámina portaobjeto
limpia.
• Deje secar a temperatura ambiente o pasando por la llama suavemente para obtener la fijación del frotis, con la finalidad de que el material no
sea arrastrado durante el proceso de tinción.
• Colocar el preparado sobre un soporte de tinción y cubrir la superficie con solución de cristal violeta por 1 minuto. Lavar bien con agua de
caño.
• Cubrir el preparado con Iodo de Gram durante 1 minuto. Lavar con agua.
• Sostener el portaobjeto entre el pulgar y el índice y bañar la superficie con unas gotas del decolorante acetona-alcohol hasta no arrastrar más
colorante violeta. Se requiere unos 10 segundos más o menos. También puede utilizar etanol comercial como decolorante , en este caso dar
más tiempo aproximadamente 1 minuto.
• Cubrir la superficie con la safranina durante 1 minuto. Lavar con agua de caño.
• Secar al aire, a temperatura ambiente.
• Observar al microscopio con lente de inmersión. (100X) y con aceite de inmersión.
 Penicillium

TINCION CON AZUL DE LACTOFENOL

 Callata Wendy
CONCLUSIONES
• El Penicillum Chrysogenum, productora de la penicilina, es obtenido
de la zona verde que prolifera en la superficie de una naranja
enmohecida.
• Los medios de cultivo favorecieron la fermentación del Penicillum
Chrysogenum, debido a la presencia de salvado de trigo en el primer
medio de cultivo, agar papa dextrosa (PDA) en el segundo medio de
cultivo y el uso de lactosa de la leche en ambos medios como fuente
principal de carbono.
• Se comprueba la actividad antibiótica de la penicilina por su eficaz
acción contra bacterias Gram positivas y negativas presentes en la saliva
bucal.