MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL

CINÉTICA DE CRECIMIENTO
MICROBIANO

Dr. Tomás Galicia G.

Dr. Rubén Márquez M. 1
TIPOS DE SISTEMAS DE CRECIMIENTO

TRES PRINCIPALES TIPOS:

 Cultivo Batch
 Cultivo Continuo - Quimiostato
 Cultivo Fed-Batch

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CULTIVO
BATCH

3
CULTIVO BATCH
Definición: Sistema cerrado con una cantidad
limitada de substratos (no hay adición de medio)
Células crecen a través de diferentes fases:
A) Fase Lag
B) Fase aceleración
C) Fase Log
D) Fase desacelera-
ción
E) Fase estacionaria
F) Fase de muerte

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A) Fase Lag
Tiempo de adaptación de la célula al medio
ambiente (reorganización de constituyentes micro
moleculares).

La longitud de la fase lag puede variar (depende de

circunstancias específicas).

Se sugiere un tiempo corto de la fase lag en la

industria, esto se logra utilizando el inóculo adecuado
(edad, cantidad y medio) y las condiciones del
medio ambiente.

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Se llevan a cabo síntesis e inhibición de enzimas
y cambios de algunos componentes de la
estructura celular.

Efectos típicos:
 Bajo número de células / concentración
celular.
 No hay cambios en el pH de los substratos.
 No hay cambio significativo en la
concentración de substratos.
 No hay formación de productos.
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B) Fase de Aceleración
Comienza la división celular, sin alcanzar la
velocidad máxima.
Efectos típicos
 Aumenta el número de células/peso celular.
 Se inicia el cambio en el pH del medio.
 Se inicia la producción de metabolitos primarios.

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C) Fase Log

Se ilustra por una línea recta en la pendiente de

la gráfica de log de masa celular vs tiempo.

Durante esta fase, existe un crecimiento estable

dónde la velocidad específica de crecimiento (µ)
es constante.

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Las células crecen a su máxima velocidad.
Efectos típicos en la fase log :
 Incremento rápido en la concentración
celular.
 Cambios rápidos en el pH de los substratos.
 Disminuye la concentración de los substratos.
 Se inicia la formación de los productos.

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D) Fase de Desaceleración
La velocidad de crecimiento disminuye lentamente
debido a :
 Consumo de nutrientes y agotamiento de los
componentes escenciales (limitación del
substrato).
 Acumulación de productos tóxicos.

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E) Fase Estacionaria

Empieza cuando la velocidad de crecimiento

comienza a disminuir

Los nutrientes se han terminado

Acumulación de productos que inhiben el

cercimiento

Velocidad de crecimiento igual a cero – células

detienen su división

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La velocidad de crecimiento está en equilibrio =
velocidad de muerte

Efectos típicos:
 Existe un balance entre la muerte de células y la
producción de nuevas , la masa celular es constante.
 El número de celulas viables disminuye, puede existir
lisis celular lo que provoca una disminución en la
biomasa.

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F) Fase de Muerte
Efectos típicos:
 Terminación de los substratos
 Declinación rápida en el número de células /
concentración celular.
 Concentración de los substratos igual a cero

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 CURVA DE
CRECIMIENTO
(Biomasa)
vs
MULTIPLICACIÓN
(Número)
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 COMPARACIÓN ENTRE CURVA DE CRECIMIENTO
CONTRA MULTIPLICACIÓN
CURVA DE MULTIPLICACIÓN (No. de
CURVA DE CRECIMIENTO (Biomasa)
células)
Se grafica la concentración de Se grafica el número de células contra
Biomasa contra el tiempo . el tiempo.

Prácticamente no se observa la fase Se observa una fase Lag mucho más

Lag . larga.

La fase Log es más larga. La fase Log es más corta .

La sección 3 de la curvas son La sección 3 de la curvas son

idénticas. idénticas.
La fase de muerte comienza más La fase de muerte comienza más
pronto. tarde.

Fase estacionaria más larga. Fase estacionaria más corta.

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CURVA DE CRECIMIENTO
(Biomasa)
X = Concentración
de Biomasa
Fases:
1:Fase Lag
2: Fase Aceleración
3: Crecimiento
balanceado
4: Fase
Desaceleración
5: Fase estacionaria
6: Fase de muerte

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CURVA DE MULTIPLICACIÓN
(No. de células)
N = No de células
Fases:
1: Fase Lag
2: Fase Aceleración
3: Crecimiento
balanceado
4: Fase
desaceleración
5: Fase estacionaria
6: Fase de muerte

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18
 CINÉTICA DE
PRODUCCIÓN

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Determinación de parámetros
metabólicos.
Se requieren datos de:
 velocidad de consumo de substrato
• con y sin producción de metabolito
Velocidad de producción de metabolitos
• con y sin crecimiento celular
 Crecimiento celular con respecto al tiempo

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 Velocidad específica de crecimiento:

Dónde:
dx = Cambio en la concentración de biomasa.
dt = Cambio en el tiempo de incubación.
x = concentración de biomasa.

Velocidad específica de crecimiento, µ expresada en la

inversa del tiempo (h-1).

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 Durante el cultivo Batch, la velocidad específica de
crecimiento cambia continuamente desde cero hasta
su valor máximo, µmax.

µmax depende del microorganismo y los parámetros

fisicoquímicos del medio ambiente.

Valores típicos de µmax:

Temperatura de
Microorganismos µmax (h-1)
cultivo
Bacterias 37ºC 0.6-1.2

Levaduras 30ºC 0.3-0.5

Actinomicetos 28ºC 0.1-0.3

Hongos 28ºC 0.1-0.3

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Graficando la curva de crecimiento del microorganismo ,
luego determine el valor de μ instantáneo en cada
tiempo de muestreo determinando la tangente en el
punto de contacto en la curva de crecimiento.

El valor mayor obtenido (de 24-72h) es la µmax.

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El coeficiente de Rendimiento
(Y)
Representa la eficiencia promedio de la
conversión de substrato en masa celular o
producto:

Parámetro Ecuación
Celular(Y x/s) ΔX / ΔS
Producto (Y p/s) ΔP / ΔS
Producto/Biomasa (Y p/x) ΔP / ΔX

Y no es constante, variará dependiendo del

microorganismo, pH, temperatura y substrato

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Utilización de Substrato y
Formación de Producto (Yp/s)
g/l producto obtenido
YP/S =
g/g fuente de carbono utilizada
= g/g

Rendimiento económico (Yp/x)

g/l producto obtenido
YP/X =
g/L biomasa formada
= g/g

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Productividad Batch

Productividad – medida del metabolito

(o biomasa) producido por unidad de
tiempo (g/L/h).

La formación de producto o biomasa –

ligada al producto está muy
relacionada con la velocidad de
crecimiento.

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La productividad en cultivo Batch
será la mayor cuando nos
encontremos en (µmax).

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Productividad X max - Xo
(R batch) =
T final – T initial

Dónde;
X max = concentración celular máxima en fase estacionaria
Xo = concentración celular inicial (inoculación)
T final = tiempo durante el cual el m.o. crece a µmax
T inicial = tiempo cuando el m.o., no está en µmax, incluyendo la
fase lag , fase de desaceleración, tiempo de limpieza,
tiempo de esterilización y otros.
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 Tiempo (h) dt 1/t [Cel.] (g/L) dx 1/x dx/dt µ (h-1)

0 0
24 0.042 0.1 0 0.004 0
24 0.1
48 0.021 0.2 10.0 0.004 0.04
48 0.2
72 0.014 0.3 5.0 0.004 0.021
72 0.3
96 0.3 3.33
96 0.3
120
120 0.2
144
144 0.1
168
168 0.05
192
192 0.02
29
 CULTIVO
CONTINUO

30
CULTIVO CONTINUO
El medio de cultivo nuevo, es
continuamente agregado al reactor ,
mientras que el medio del fermentador
que contiene biomasa, productos y
nutriente sin utilizar, es continuamente
removido.

El crecimiento exponencial del cultivo

batch puede ser mantenido mediante la
adición de medio fresco al recipiente.
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El crecimiento puede ser mantenido
durante largos periódos de tiempo

Se trabaja en un estado estable, donde

no existe variación con respecto al
tiempo de los diferentes componentes
del reactor (células, substrato y
producto)

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Aplicación del Cultivo Continuo
Producción de Biomasa
Crecimiento asociado a la producción o metabolitos
primarios – ej: etanol, ácido cítrico
No se utiliza para la producción de metabolitos
secundarios – ej: antibióticos

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Importante
Cuando se hace referencia a los sistemas
de cultivo continuo, los términos utilizados
en el cultivo por lote o Batch (fase lag,
exponencial, fase estacionaria, fase de
muerte)
no tienen ningún significado
porque el sistema está operando
continuamente y el crecimiento no
puede separarse en fases.

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 CULTIVO BATCH
Nutrientes se agregan al inicio
Productos son removidos cuando la
fermentación termina.
Las velocidades de crecimiento y
formación de producto son bajas , ya
que existen factores limitantes
ej: nivel de substratos/ acumulación de
toxinas.
Velocidades de crecimiento bajas =
Reactores mas grandes tienen que ser
utilizados.
Fácil manejo y mantenimiento.
Si se produce contaminación, solo se
desperdicia un lote.
Menos eficiente / más tiempo
desperdiciado extrayendo el producto y
reiniciando otro batch.
Calidad del producto puede variar de
batch a batch.
CULTIVO CONTINUO
Nutrientes se agregan continuamente
Productos son removidos continuamente .
El organismo es mantenido en una fase de
crecimiento exponencial, lo que le da una
mayor productividad, por lo que se
pueden utilizar reactores mas pequeños.
Puede ser muy difícil mantener las
condiciones para que se mantenga la fase
exponencial. La espuma, la aglomeración
y el taponamiento presentan problemas.
La contaminación puede afectar un gran
volumen de producto / organismo.
Uso continuo, por lo tanto, más eficiente el
uso del tiempo.
Calidad del producto mas consistente.
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 CULTIVO
ALIMENTADO
(FED-BATCH)

36
CULTIVO ALIMENTADO

Extensión del cultivo

discontinuo o batch,
alimentando el reactor,
continua o periódicamente
con medio fresco sin
remover el cultivo del
recipiente.

Es un cultivo intermedio
entre el cultivo batch y el
cultivo continuo.

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Un volumen pequeño de medio es inoculado y
se permite crecer durante un período de tiempo
de un batch, hasta llenar el volumen del
reactor.

Posteriormente, se inicia una alimentación en el

fermentador hasta obtener un "estado casi
estable". Se evitan inhibiciones.

Estado casi estable: cuando el substrato

limitante se ha agotado

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FORMACIÓN DE
PRODUCTO

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Cinética de Producción
Clasificación según la relación entre la síntesis del
producto y la generación de energía en la
célula. Clasificación de Gaden
 Crecimiento asociado
 Crecimiento no asociado.
 Crecimiento parcialmente asociado.

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Productos
Crecimiento asociado.
 Producido al mismo tiempo que el crecimiento celular.
• Enzimas constitutivas (que se encuentran
normalmente presentes).
 glucosa isomerasa.
• Intermediarios metabólicos.
 piruvato, citrato, acetato.
Crecimiento no asociado.
 Se lleva a cabo durante la fase estacionaria (µ=0)
• Metabolitos secundarios.
 Antibióticos.
Crecimiento parcialmente asociado.
 Producido durante el crecimiento y la fase
estacionaria.
• Subproductos metabólicos.
 lactato, etanol.
• Metabolitos secundarios. 41
 Clasificación de Gaden

Crecimiento asociado Crecimiento parcialmente

asociado

Crecimiento no
asociado
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Metabolito primario
Liberado como resultado de procesos metabólicos que
son esenciales para la vida del microorganismo, p. etanol
de Saccharomyces cerevisiae.
Por lo tanto, los metabolitos primarios se producen a lo
largo del crecimiento del microorganismo, especialmente
a través de la fase exponencial.

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Metabolito Secundario
Una sustancia que no es esencial para la
vida de los microorganismos y que no se
produce como resultado del proceso de
crecimiento, como es el caso de la
producción de penicilina.

Los metabolitos secundarios se producen

después de que se termina la fase de
crecimiento exponencial.

44
Esto es importante porque significa
que los metabolitos secundarios
como la penicilina no pueden
producirse en fermentadores
continuos, en los cuales se mantiene
al m.o. en la etapa de crecimiento
exponencial,
deliberadamente.

45
 La producción del metabolito secundario
comienza cuando el crecimiento exponencial se
detiene y el crecimiento de las células comienza a
disminuir.

46
 Agregar, muchos mas nutrientes
adicionales en el momento T (ver gráfica)
simplemente aumentará el crecimiento
del microorganismo pero no la formación
del producto.
 Sin embargo, al agregar una pequeña
cantidad de nutrientes adicionales en
este momento, se puede aumentar la
cantidad de producto formado..

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Bibliografía

Daniel I.C. Wang, Charles L. Cooney, Arnold L.

Demain, Peter Dunill, Arthur E. Humphrey,
Malcolm D. Lilly. (1995). Fermentation and
Enzyme Technology. New York: Jhon Wiley and
Sons.
Pauline M.Doran. (2013) . Bioprocess
Engineering Principles. Waltham, MA. Academic
Press
Wei-Shou Hu. (2018). Engineering principles
of biotechnology. Hoboken, NJ, USA : John
Wiley & Sons
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