Historia

 Desde el comienzo de los estudios bioquímicos(1910), la mayor parte

de las CURVAS DOSIS-RESPUESTA, con la que se representaba la
actividad biológica de las proteínas tenían perfil hiperbólico, sin
embargo muchas de las proteínas en lugar de este tenían perfil
sigmoideo (cooperativo).
Hemoglobina Molécula transporte de O2 Porcentaje de 02 unido a la HG
(Actividad biológica) Oligómero (4protómeros) Cantidad de O2 en el medio

 (1960) Se hallaron algunas enzimas curvas dosis-respueta

cooperativas como la PKF(fosofofructoquinasa), Desoxitimidina.
Presentaban peculiaridad, haciendo que la actividad biológica sea
modificada por sustancias especificas llamadas reguladores(
activadores o inhibidores).
 Estos estudios presentaban que cada subunidad presentaba un sitio
especifico para cada tipo de regulador(activador o inhibidor).
PKF Activador: AMP Inhibidor: citrato
1963 surge la teoría alostérica
 Teoría alostérica concertada (modelo MWC)
 Presenta las correlaciones de los cambios de la actividad biológica en
presencia de diferentes sustancias o sustratos.
 Atribuye a los oligómeros dos estados conformacionales
con respectos
a sus ligandos que representaban diferente actividad biológica
El estado relajado : R Con alta actividad biología
El estado tenso : T Con baja actividad biológica
 En ausencia del ligando los estados T Y R están en equilibrio,
refiriéndose a la q total de oligómeros T y R son constantes a pesar
que están cambiando estado, dando que la relación entre ellos es constante:
constante alostérica; y el cambio de un estado a otro se le llama
transición alostérica.
 La unión del ligando a su sitio especifico del protomero R o T alcanza también
un equilibrio, LA CONSTANTE DE DISOCIACIÓN.
Parámetro que indica cuanta afinidad
Enzimas activadores: + afinidad R
tiene el sitio de unión del protómero
Enzimas inhibidoras : + afinidad T
Por el ligando en una conformación dada
 REGULACIÓN ALOSTÉRICA

regulación de ajuste fino de la actividad enzimática, a través de

efectos de activación o inactivación del enzima en un sitio
alostérico.

Alosterismo:
Una acción sobre la actividad enzimática que se desarrolla
fuera del Centro Activo (Jacob y Monod, 1963)

SITIO ALOSTERICO:
Región específica del enzima diferente del centro de fijación del
sustrato. La unión con el modulador o regulador es reversible, no
covalente.
 LAS SUSTANCIAS MODULADORAS PUEDEN SER
ACTIVADORES O INHIBIDORES.
• Activadores (moduladores positivos): cuando se
unen aumentan la actividad del enzima.
• Inhibidores (moduladores negativos): cuando se
unen disminuye la actividad del enzima.

• Cuando la sustancia que activa es el propio sustrato se

denomina activación homotrópica (en raras ocasiones) y si es
otra sustancia, heterotrópica. En la activación homotrópica el
centro modulador coincide con el centro activo del enzima,
mientras que en la heterotrópica es un sitio diferente.
 ENZIMAS ALOSTÉRICOS
• Son enzimas que presentan dos centros
distintos a los que pueden unirse las
moléculas reguladoras:
• el centro activo, en donde se une el sustrato
cuya reacción cataliza el enzima
• el centro alostérico, en donde se pueden
unir sustancias, que pueden activar o inhibir la
actividad enzimática
 TIPOS DE ENZIMAS ALOSTÉRICOS
• ENZIMAS HETEROTRÓPICAS, estimuladas o inhibidas
por un efector diferente del sustrato.
• ENZIMAS HOMOTRÓPICAS. Estimuladas o inhibidas
por el mismo sustrato, éstas tienen un sitio activo
con dos o más sitios de unión para el sustrato.
La modulación dependerá de cuántos sean los sitios
del sustrato que están ocupados.
• La mayoría son heterotrópicas o algunas de tipo
mixto, homotrópico-heterotrópico, el sustrato y
algún otro metabolito funcionan como moduladores.
 CARACTERÍSTICAS DE LA ENZIMA
ALOSTÉRICO
1. Primer paso de una ruta metabólica o punto de ramificación
2. Son proteínas oligoméricas (salvo excepciones), de elevado peso
molecular y de naturaleza compleja: subunidades catalíticas y
reguladoras.
3. Los ligandos se unen a la enzima en sitios específicos por fuerzas
no covalentes y de forma reversible, afectando el estado
conformacional de las enzimas.
4. Algunos inhibidores se comportan como competitivos (elevan el
valor de la Km aparente, pero sin embargo no son análogos
estructurales del substrato)
4. La cooperatividad en su comportamiento cinético es
característico.
Enzimas alostéricas monoméricas: Ribonucleótido difosfato reductasa y
Piruvato-UDP-N-acetilglucosamina transferasa, mayoría son oligoméricas
EFECTOR, MODULADOR O MODIFICADOR
ALOSTÉRICO
• “Moléculas de bajo peso molecular que regulan a la
enzima alostérica, se fijan de manera no covalente a un
sitio alostérico (heteroalostérico) o al sitio activo
(homoalostérico)”

• Altera la afinidad de la enzima por su sustrato, modifica

la actividad catalítica máxima de la enzima o ambas.

• Los que inhiben la actividad enzimática, son efectores

negativos y los que la incrementan son positivos
 TIPOS DE EFECTORES ALOSTÉRICO
• Efectores Homotrópicos: El propio sustrato
funciona como efector alostérico.
Cooperatividad. Curva sigmoidea (v0) contra (S).
• Efectores Heterotrópicos: Diferente del sustrato.
Retroalimentación. Generalmente el producto
final de una vía (Alostérico propiamente dicho:
FEEDBACK). Puede presentar cooperatividad.
 Inhibición por retroalimentación (I. FEEDBACK) Inhibición de una enzima en
una vía biosintética por un producto final de esa vía. Las concentraciones altas de
D inhiben la conversión de A hacia B. Normalmente, D se une en un sitio alostérico
espacialmente distinto del sitio catalítico de la enzima de destino. Estos son efectores
alostéricos y suelen tener poca o ninguna similitud estructural a los sustratos de las
enzimas inhiben. En este ejemplo, el inhibidor D actúa como un efector alostérico
negativo de Enz1.
-
-
Enz 1 Enz 2 Enz 3
A B C D
 INHIBICIÓN POR RETROALIMENTACIÓN ACUMULATIVA:

El efecto inhibitorio de dos o mas productos finales sobre una sola

enzima reguladora es estrictamente aditivo.

INHIBICIÓN POR RETROALIMENTACIÓN CONCERTADA

O MULTIPLE
La inhibición completa se produce solo cuando dos o más
productos finales estan presentes simultaneamente en exceso.

INHIBICIÓN POR RETROALIMENTACIÓN COOPERATIVA:

un solo producto final presente en exceso inhibe la enzima

reguladora, pero el efecto de la inhibición debida a la presencia de
dos o más productos finales, excede en mucho los efectos aditivos
correspondientes a la inhibición por retroalimentación acumulativa.
Ejemplo de retroinhibición:
La conversión de la L-treonina
en L-isoleucina está catalizada
por una secuencia de cinco
enzimas.

La treonina deshidratasa es
inhibida alostéricamente y de
forma específica por la
L-isoleucina, producto final de
la secuencia
 RUTAS METABÓLICAS CONTROLADAS POR
RETROALIMENTACIÓN

Ruta Enzima Inhibidor

Glicolisis Fosfofructokinasa ATP

Neoglucogénesis FBP fosfatasa AMP
Bios. Ács. Grasos AcetilCoA carboxilasa AcilCoA
Bios. Colesterol HMGCoA reductasa Colesterol
Bios. Purinas PRPP sintetasa AMP,GMP,IMP
 EJEMPLO DE ENZIMA REGULADA
HOMOALOSTÉRICAMENTE

Enzima ASPARTATO TRANSCARBAMOILASA (ATCasa)

bacteriana es clave en síntesis de nucleótidos de
pirimidina, el producto es el N-carbamoilaspartato, a
partir de los sustratos aspartato y carbamoilfosfato.
Ambos sustratos ejercen efecto homoalostérico
positivo. Hay una concentración umbral para que
estos actúen positivamente. Así regulan homeostasis
celular.
Enzima ASPARTATO
TRANSCARBAMOILASA
 EJEMPLO DE ENZIMA REGULADA
HETEROALOSTERICAMENTE
Enzima ACETILTRANSCARBAMOILASA

El CTP es regulador
alostérico negativo y el
ATP es regulador
alostérico positivo.
 Efecto del CTP sobre la cinética de la ATCasa

El CTP (inhibidor alostérico) estabiliza el estado T, haciendo

más difícil la unión del sustrato y la transición al estado R
 Efecto del ATP (activador alostérico) sobre la
cinética de la ATCasa

El ATP estabiliza el estado R, facilitando la unión del sustrato

La ATCasa posee seis subunidades
catalíticas en forma de dos trímeros y
seis subunidades reguladoras
ordenadas en tres dímeros. Cada
subunidad catalítica tiene dos
dominios diferentes a los que se unen
aspartato y carbamoilfosfato. Tras
la unión del sustrato, los dos dominios
se aproximan. Se disuelven los
puentes de hidrógeno de enlace a las
subunidades catalíticas opuestas,
toda la ATCasa modifica su
conformación y pasa del estado
inactivo T al estado activo R. El CTP
se une mejor a la forma T,
provocando así un desplazamiento
del equilibrio en dirección a la forma
inactiva. El ATP, se une fuertemente
al estado R favoreciendo la forma
activa. Los dos nucleótidos compiten
por lugares de unión en las unidades
reguladoras.
Ejemplo: Fosfofuctoquinasa

Regulador alostérico
(heterotópico):
activador
Enzima
no
regulada
CLASES DE ENZIMAS ALOSTÉRICAS POR CINÉTICA
– En este caso no se habla de una Km sino de una
K0.5 o [S] 0.5 para representar la concentración de
sustrato a la que se observa la mitad de la velocidad
máxima.

– K, efector altera la Km pero no la Vmax : doble

recíprocos similar a inhibidor competitivo

– V, efector altera la Vmax pero no la Km : doble

recíprocos similar a inhibidor no competitivo;
incrementan o disminuyen la velocidad de
descomposición del complejo ES en productos, la
constante de velocidad catalítica K3 queda afectada,
no se modifica la constante de fijación de sustrato
 La union de ligandos a la
enzima perturba la posición
del equilibrio entre las dos
conformaciones.
Forma T Forma R

Activador alostérico: favorece la Inhibidor alostérico: impide la unión

unión del sustrato del sustrato
 El comportamiento cooperativo implica:

1. Que hay más de un sitio de fijación de sustrato

por molécula de enzima (estr.cuaternaria)

2. Que hay interacciones entre los sitios de fijación

 Los efectores alostéricos operan sobre el grado de
cooperatividad del sistema:

-Los inhibidores alostéricos disminuye la afinidad por el

sustrato y aumentan el grado de cooperatividad

-Los activadores alostéricos aumenta la afinidad por el

sustrato y disminuyen el grado de cooperatividad; a
concentraciones elevadas de activador, la cinética pasa a
ser semejante a la michaeliana, y deja de ser sigmoide.
MODELO SIMÉTRICO O CONCERTADO DE
MONOD (1965)
 Pre-equilibrio o modelo concertado
1. La proteína es un oligómero simétrico
2. La proteína existe en un equilibrio entre
dos estados: T (tenso) y R (relajado)
3. La forma T tiene la misma constante Kt
de disociación al sustrato para todos
sus sitios
4. La forma R tiene la misma constante Kr
de disociación al sustrato para todos
sus sitios
5. Kt>Kr , y se define c=Kr/Kt < 1
6. El cooperativismo está dado por la
constante de equilibrio entre las formas
T y R, llamada constante alostérica,
L=[T]/[L] y de c.
 𝑲𝑹
C= <𝟏
𝑲𝑻

𝑻
L=
𝑹

𝑬𝑺𝒊−𝟏 𝑺
𝑲𝑻/𝑹 = 𝒄𝒕𝒆 𝒅𝒆 𝒅𝒊𝒔𝒐𝒄. 𝒎𝒊𝒄𝒓𝒐𝒔𝒄𝒐𝒑𝒊𝒄𝒂 𝒐 𝒊𝒏𝒕𝒓𝒊𝒏𝒔𝒆𝒄𝒂 =
𝑬𝑺𝒊

La curva se hace mas

sigmoidea a mayor L
(cuando el equilibrio
favorece a T) y a
menor c (cuando la
afinidad de T
disminuye respecto a
la afinidad de R)
Los inhibidores alostéricos se unen fuertemente a T → L aumenta
Los activadores alostéricos se unen fuertemente a R → L disminuye
MODELO SECUENCIAL DE
KOSHLAND (1966)
 Encaje inducido

1. En ausencia de ligando la
proteína existe como una
única conformación
2. Cuando el ligando se une,
induce un cambio
conformacional que es
trasmitido al resto de la
enzima modificando las
constantes de afinidad. Esto
es, la constante de
disociación Ks cambia a aKs,
con a < 1.
Ks es cte de disociación

si a, b y c son < 1 → la afinidad

de los sitios vacantes aumenta
→ cooperatividad positiva

si a, b y c son > 1 → la afinidad

de los sitios vacantes disminuye
→ cooperatividad negativa
 Referencias bibliográfica

1. Robert K, David A, Kathleen M, Peter J, Victor W,

Anthony W. Harper Bioquímica Ilustrada. 29° Ed.
Mexico: McGraw Hill; 2012.

1. Alleva K, J Díez J, Federico L. La Teoría MWC

(Monod, Wyman y Changeux): El sistema alostérico
. Agora. 2012;31(2):225-250.

2. http://www.dcne.ugto.mx/Contenido/MaterialDidactic
o/QuimicaBioinorganica/Revision_basica_sobre_las
_enzimas.pdf

3. http://ufq.unq.edu.ar/Docencia-
Virtual/BQblog/Coperatividad%20y%20Alosterismo.pdf