Realizar extracción Hidratar la muestra

de DNA con fenol- de DNA con agua Agitar de 10-15 veces

cloroformo y en libre de nucleases con la pipeta
papel FTA estéril

En un tubo agregar Leer en el

199 μl de agua espectrofotómetro y
Millipore y 1μl de la la muestra restante
solución anterior mantenerla congelada
 Descongelar las muestras
maestras y agitar en vortez,
manteniéndolas en baño de
hielo; descongelar agua libre
de nucleasas y el DNA
genómico
Diluir DNA genómico en agua
libre de nucleasas y mezclar
en el vortez, añadiendo a los
tubos etiquetados (control
positive)
Añadir el aceite mineral
Preparar 4 mezclas; para cada
mezcla multiple (A,B,C,D)
multiple y la DNA polimerasa a
Mezclar en vortex
Preparar el termociclador a
diferentes rangos de
temperature y tiempo
Para el control negativo:
añadir agua libre de nucleasas
a los tubos de reacción
previamente etiquetados
Añadir la mezcla principal
Mezclar y centrifugar;
mantener los tubos en baño
los tubos que contienen el
de hielo hasta estar listo el
DNA de la muestra, y los
termociclador.
controles
 Adicionar a cada Depositar 10 μl de la
Preparar un gel de muestra 10 μl del muestra con
acrilamida al 5% amortiguador de carga amortiguador de carga a
de la fase acuosa cada pozo

En un pozo del extreme

Correr la Teñir el gel con
colocar el marcador de
electrophoresis a 180 bromuro de etidio por 2
peso molecular de 100
volts por 180 minutos minutos
pb

Colocar el gel en el
Lavar con agua equipo para observer
bidestilada por 3 las bandas y
minutos compararlas con el
control +