NUCLEO INTERFASICO

Dr. Guillermo Bornaz Acosta

NUCLEO
O envelope nuclear, a cromatina e o nucléolo
Estrutura do Núcleo
Compartimento celular altamente organizado: 1) envelope nuclear, 2) lâmina
nuclear, 3) diferentes porções da cromatina (heterocromatina e eucromatina) e
4) o nucléolo definem sua arquitetura, com compartimentos bem definidos.

Alberts et al., 1994 - págs 335 e 345

_Tráfego de proteínas entre núcleo e citoplasma_
Compartimentalização das células eucarióticas:

núcleo
Ver animação

citoplasma

Complexo do poro
nuclear

Sinal apropriado
 _________________
Complexo do Poro Nuclear

Doye & Hurt, Curr Opin Cell Biol 1997 9:401

 Estrutura do_Complexo do poro nuclear

É uma estrutura cilindrica;

Perpendicular ao plano do envelope nuclear;

* Estrutura central

*Anel nuclear

* Filamentos nucleares

* Anel citoplasmático

* Filamentos Citopl.

* Plug central

Ohno et al., 1998 Cell 92:327

 Visão esquemática do mecanismo de
transporte ativo por meio dos poros nucleares.
Transporte através do poro nuclear
Sinal de localização
nuclear
________________Sinal de Localização Nuclear

Piruvato-kinase Ag T – piruvato-kinase

Kalderon, Cell 39:499

Partículas de
ouro revestidas
de sinal de
localização
nuclear são
importadas para
núcleo
 Vias de transporte diferentes envolvem
as mesmas moléculas

I- Nucleoporinas – hélices dispostas através do poro

II- Moléculas transportadoras solúveis – Importinas

Exportinas

III- Sinal de Localização Nuclear – Clássico

Não clássico
Sinal de Exportação Nuclear

IV- Ran-GTP/GDP
Transporte ativo através dos poros nucleares
depende do ciclo de hidrólise de GTP da
proteína Ran-GTPase
 Uma visão convencional do núcleo
O núcleo apresenta uma continuidade estrutural e funcional devido a
uma série de interações bioquímicas dos seus componentes.

FILAMENTOS DE LAMINAS
ENVELOPE
PROTEÍNAS
REGULATÓRIAS

PROTEÍNAS
LIGANTES
DE LAMINAS

CROMATINA (LBR-HP1)

Interações - estabelecimento de domínios funcionais

A lâmina nuclear
O núcleo vivo
A instabilidade nuclear pode ser prontamente observada durante o
ciclo celular, com técnicas simples como preparações citológicas e
autorradioagrafia.
Eventos:  desmontagem do envelope nuclear
 dissolução do nucléolo e da lâmina

 contatos entre os componentes da cromatina, a

lâmina e o envelope desaparecem
 histonas continuam nos cromossomos, mas fatores de
transcrição são dissociados e a transcrição é reprimida
 logo após a segregação o envelope começa a se formar
novamente sobre os cromossomos
 em cerca de 30 minutos (média) o núcleo esférico está
reconstituído

Toda esta reestruturação ocorre através da modificação nas interações

entre os componentes nucleares - resultados que mostram o possível
envolvimento de HP1.
Dissociação do envelope e lâmina nuclear
NUCLEOLO
Regiões do nucléolo
Regulação da importação e exportação
nuclear através de sinalização – Ex:
fosforilação/desfosforilação
CF: Centro fibrilar
: Síntesis del
ARNr
F: Zona fibrilar:
Región rica en
ARNr recién
transcrito
G: Capa Granular:
Asociación de
proteínas y ARNr
As funções do nucléolo
 NUCLEOPLASMA

• Matriz coloidal acuosa (80% Agua) semejante a

citosol, más rica en:
– Desoxirribonucleótidos: dATP, dGTP, dCTP dTTP.
– Ribonucleótidos: UTP, ATP, GTP y CTP
– Histonas.
– Enzimas polimerasas.
– ADN
CROMATINA INTERFÁSICA E CROMOSSOMO
MITÓTICO
 TIPOS DE CROMATINA
• Heterocromatina Constitutiva y Facultativa
• Eucromatina difusa y activa: transcripción
A cromatina – DNA compactado em fitas de 30 nm
de espesor

Collar de cuentas - nucleosomas

• En una misma fibra puede haber eucromatina y heterocromatina:
diferentes grados de condensación.
• Las regiones de heterocromatina pasan por diferentes grados de
condensación en la alternancia entre interfase y mitosis.
• Facultativa: Sólo se condensa en ciertos tipos celulares o en
ciertos momentos del desarrollo. Cromosoma X.
Constitutiva: Aparece condensada en todos los tipos celulares:
ADN altamente repetitivo. Protege eucromatina, se replica
tardíamente.
NATURALEZA DEL NUCLEOSOMA
 Contenido en V.
Nº moles % de
Hist Lys/ cambio
residuo Pm Modificación
ona Arg evoluti
s
Lys Arg vo

H1 213 21. 27,7 1,4 19,78 Fosforilación 4

000
Fosforilación,
H2A 129 13. 10,9 9,3 1,17 acetilación
1
900
Fosforilación,
H2B 125 13. 15,2 6,1 2,49 acetilación
1
774
Acetilación,
H3 135 15. 9,6 13,3 0,72
metilación
0,1
273 fosforilación

Acetilación,
H4 102 11. 10,8 13,7 0,79 0,06
metilación
236 fosforilación
 EMPAQUETAMIENTO DEL ADN
• Doble hélice de ADN Nucleosoma Solenoide
Microcónvula Roseta Rodillo Cromátida
EMPAQUETAMIENTO DEL ADN: ESTRUCTURA TERCIARIA:
NUCLEOPROTEÍNAS
ADN de 10 nm: EUCROMATINA DIFUSA
CROMOSSOMO METAFÁSICO
PARTES DE UN CROMOSOMA
Transcrição de genes ribossômicos arranjados em ta
As regiões de um cromossomo
 PARTES Y TIPOS DE CROMOSOMAS
• Partes: Cromátidas hermanas, centrómero, cinetocoro,
telómero, brazos, satélites.
• Tipos: Meta, submeta, acro y telocéntrico

Cinetocoro
Los cromosomas humanos

Las células somáticas contienen el

complemento
diploide (2n) constituido por 23 pares de
cromosomas

Las células reproductivas (gametos) contienen

el complemento haploide (n) constituido por
23 cromosomas,
un representante de cada pareja
Dotación cromosómica humana

Cariotipo humano: 46 XY
 Nomenclatura de bandeos dinámicos.
GBG: Bandas G por incorporación de BrdU utilizando Giemsa.
RBA: Bandas R por incorporación de BrdU empleando naranja
de acridina.
RBG: Bandas R por incorporación de BrdU utilizando Giemsa.
GB-AAu: Bandas G por incorporación de BrdU empleando
anticuerpos específicos unidos a partículas deoro coloidal.
RB-AAu: Bandas R por incorporación de BrdU usando
anticuerpos específicos unidos a partículas de oro coloidal.
EXPRESION DE LOS GENES
 DNA POLIMERASAS
Características principales de las ADN polimerasas de E. coli
DNA POLIMERASA ADN Pol I ADN Pol II ADN Pol III

Masa molecular (dalton) 109.000 90.000 900.000

Constitución Monómero Monómero Dímero asimétrico

Estructura
Número de polimerasas /
400 Desconocido 10 - 20
célula

Polimerasa 5' → 3' / Elongación SI SI SI

Actividad Exonucleasa 3' → 5' / Corrección SI SI SI

/ Función
Exonucleasa 5' → 3' / Reparación SI NO NO
 DNA
POLIMERASA
III
DE E. COLI
 DNA POLIMERASAS EUCARIOTES
• Pol α (sinónimos ARN primasa, la ADN polimerasa): forma un complejo con
un pequeño catalizador (PRI) y una gran subunidad no catalítica, con las
subunidades Pri actuando como primasa (síntesis de un cebador de ARN).
• Pol β: Implicado en la reparación del ADN, en la reparación por escisión de
base y la síntesis de llenar espacios en blanco.
• Pol γ: Réplicas y repara el ADN mitocondrial y la corrección 3'-> 5
'exonucleasa.
• Pol δ: muy processive y corrección de pruebas ha 3'-> 5 'exonucleasa. Se
cree que es la polimerasa principal implicada en la síntesis de hebra
rezagada.
• Ε Pol: También muy processive y corrección 3'-> 5 'exonucleasa. Muy
relacionada con δ pol, y se piensa que es la polimerasa principale implicados
en la síntesis de cadena principal.
• También hay otras polimerasas eucarióticas conocidas, que no están tan bien
caracterizados: θ, λ, φ, σ y μ.
REPLICACION
REPLICACION
 RNA POLIMERASAS en eucariotes
• La ARN polimerasa I produce pre-ARN
ribosómico (pre-ARNr) 18S, 5,8S y 28S.
• La ARN polimerasa II produce pre-ARN
mensajero (pre-ARNm) y ARN pequeño nuclear
(ARNsn).
• La ARN polimerasa III produce pre-ARN
transferente (pre-ARNt), ARNr 5S y otros ARNsn.
• La ARN polimerasa mitocondrial produce el ARN
mitocondrial.
TRANSCRIPCION EN EUCARIOTES
Transcripción y traducción
Reparacion del DNA
Agentes Alquilantes
Reparacionpor luz: Fotoliasa
Reparacion de alquilaciones
Sistema Mut
SOS
Ciclo celular
CICLO CELULAR: ESQUEMA
•Interfase: Periodo entre dos divisiones celulares.
•Comprende tres periodos:
•G1, S y G2
• G1 : Verdadera Interfase: La Eucromatina se transcribe.
Célula aumenta de tamaño. Calidad
• S: Replicación del ADN. La célula sabe que se va a
dividir
• G2 : Solo transcribe ciertas proteínas: Histonas, Actina,
Tubulina. Cambios en la estructura celular
•¿Por qué?
CICLO CELULAR: MODIFICACIÓN ADN
DIFERENCIACION

DIVISION

SUPERVIVENCIA / MUERTE
DIFERENCIACION

DIVISION

SUPERVIVENCIA / MUERTE
DIFERENCIACION

DIVISION

SUPERVIVENCIA / MUERTE
DIFERENCIACION

CICLO
DIVISION CELULAR

SUPERVIVENCIA / MUERTE
 Ciclo celular
Concepto

• Es el proceso responsable de la reproducción celular

• Comprende desde el nacimiento de una célula hija hasta que

ésta se divide

• Las células están: En ciclo celular o Quiescentes (Fase G0)

 CICLO CELULAR
Fases

• Interfase:
• Fase G1 (6-12 horas, a veces días a años)
• Fase S (6-8 horas)
• Fase G2 (3-4 horas)

• Mitosis / Citocinesis:
• Profase
• Metafase
• Anafase
• Telofase
 EL CICLO CELULAR

FASES DEL CICLO

CELULAR
Ciclo celular
 Ciclo celular
Elementos de regulación

• Ciclinas

• Kinasas dependientes de ciclinas (CDKs)

• Inhibidores de Kinasas dependientes de Ciclinas

 REGULACION DEL CICLO CELULAR
LEVADURA DE GEMACION: Saccharomyces cerevisiae

NUTRIENTES

FACTORES DE
CONJUGACION

TAMAÑO CELULAR
 REGULACION DEL CICLO
CELULAR

CELULAS ANIMALES
Punto de restricción

FACTORES DE
CRECIMIENTO
 PUNTOS DE CONTROL DEL CICLO CELULAR
Maquinaria de
CONTROL DE LA
replicación del DNA METAFASE
¿Se ha producido daño en el Maquinaria de la
DNA? mitosis
¿Se ha replicado todo el DNA?

Entorno ¿Es el entorno favorable?

¿Están todos los cromosomas ¿Se ha producido daño en el
Crecimiento ¿Tiene la célula el alineados en el huso? DNA?
tamaño adecuado?
celular
¡COMENZAR ¡FINALIZAR
CONTROL DE LA MITOSIS! MITOSIS!

FASE G2

CONTROL DE LA CONTROL DE LA
FASE S FASE G1
¡CONTINUAR LA
SÍNTESIS DE ¡ENTRAR EN
DNA! CICLO! ¿Tiene la célula el tamaño Crecimiento
¿Se ha producido daño en el adecuado? celular
DNA?
¿Es el entorno favorable? Entorno
¿Se ha producido daño en el
DNA?
 Ciclo celular
Ciclinas

• Ciclinas: cofactores, vm corta, llaves de control del ciclo, universales

en las celulas eucariotas

• Grupo G1: D1, D2, D3 y E (en G1 y paso G1-S)

• Grupo A: (en S y paso G2-M)
• Grupo B: B1 y B2 (entrar y salir de M)
• Grupos C, F, G, H (?)
 Ciclo celular
Puntos críticos de control
Gen Rb y p53
• Paso de G0-G1
• Fase G1 (Punto R):
• Gen Rb

• Paso G1-S (antes de duplicar el DNA):

• Gen Rb
• Gen P53 p21, p27, p57, p15, p16, p18, p19

• Paso G2-M (antes de empezar la mitosis)

• Paso de metafase a anafase
• Paso de anafase a telofase
 Ciclo celular
P53 (Guardian del genoma)