DIAGNOSTIC SEROLOGIC

IN INFECTIA HIV/SIDA
Este bine sa doresti sa fi diagnosticat la
timp!

CONTAGIOZITATE
SCADE CALITATEA VIETII
TRATAMENT
AGRAVARE
MONITORIZARE
Temeri
CRESTE CALITATEA
VIETII

Beneficii
1990
Romania
raporteaza 1094
cazuri de SIDA la
copii,
reprezentând
jumătate din
totalul de cazuri
de
SIDA pediatric din
Europa
ENCEFALOPATIE HIV

Infectie HIV in SNC

1. DIAGNOSTIC SEROLOGIC
TESTE DE TRIAJ- sensibilitate inalta
ELISA
TESTE RAPIDE

TESTE DE CONFIRMARE- specificitate inalta

WESTERN BLOT
RADIOIMUNOPRECIPITAREA (RIPA)
IMUNOFLUORESCENTA INDIRECTA

2. DETECTIA DIRECTA A VIRUSULUI

SAU A PRODUSELOR VIRALE
IZOLARE VIRALA
DETECTIA ANTIGENEMIEI p24
DETECTIA ACIDULUI NUCLEIC VIRAL
(ARN HIV PLASMATIC SAU ADN HIV PROVIRAL LIMFOCITAR)
TESTE DE TRIAJ
 ELISA INDIRECTA

ETAPE
1. Incubare ser pacient 1h la 37ºC
2. Spalare
3. Incubare conjugat (Ac anti IgG uman x enzima)- 1h la 37ºC
4. Spalare
5. Incubare substrat 20 – 30 min la temp camerei
6. Citire la spectrofotometru – DO probe, martori, cut off
Distribuirea probelor cu
pipeta automata

Spalator
automat
Spectrofotometru
ELISA de competitie

ETAPE
 Incubare ser pacient si conjugat 1h la 37ºC
 Spalare
 Incubare substrat 20 – 30 min la temp camerei
 Citire la spectrofotometru – DO probe, martori,
cut off
TESTE DE CONFIRMARE

WESTERN BLOT
- test imunoblot folosit pentru confirmarea prezentei anticorpilor
in diferite infectii
- se bazeaza pe detectia anticorpilor defalcati pe grupe antigenice
UTILIZARE

Detectia proteinelor virale

Caracterizarea preparatelor de anticorpi
mono- si policlonali
Determinarea specificitatii raspunsului
imun impotriva antigenelor virale
PRINCIPIU

Proteinele dintr-un lizat viral sunt separate

electroforetic dupa greutatea moleculara
prin SDS-PAGE (sodium dodecil sulfat)
Transferate pe o membrana de
nitroceluloza
Detectie prin anticorpi marcati radioactiv
(autoradiografie) sau enzimatic
(COLORIMETRIC)
ELECTROFOREZA
Pe gel de poliacrilamida
Apoi proteinele sunt transferate pe o
membrana de nitroceluloza prin difuzie,
electroforeza sau prin afinitate
Fixarea se face prin simpla absortie
pasiva, prin legaturi covalente pe
membrana diazotata sau prin legare
specifica pe membrana acoperita de
anticorpi
Tehnica
WESTERN BLOT

1. SDS-PAGE
2. BLOT (transfer)
3. DETECTIA
ANTICORPILOR
WESTERN BLOT – detectia Ac serici

Substrate

Stop

color
gp160 Western blot
gp120
in infectia HIV
p66
Criteriul minim de
pozitivitate
p55 • 2 env
p51 +
• 1 gag

gp41

p31
p24

p17
p10/11
p7/9
DIAGNOSTIC SEROLOGIC HIV
ELISA
NEGATIV= POZITIV IN DUPLICAT

ABSENTA
INFECTIEI HIV WESTERN BLOT

NEGATIV POZITIV=

INFECTIE HIV

! Ferestra INDETERMINAT
serologica -
-
repeta la 6-8 saptamini
alt test de confirmare
risc rezidual al
transfuziei = 2/1 milion

 Ag p24- 1.48/1 milion

 ADN proviral–1.48/1 milion
 ARN HIV – 1.01/1 milion
Test Elisa + in duplicat
WB –
Este posibil acest rezultat?; explicati.
Pacient 15 ani

test de triaj infectie HIV

Ce test s-a folosit si care sunt urmatorii pasi?