UNIVERSIDAD PRIVADA NORBERT

WIENER
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

EXAMEN MICROBIOLOGICO DE
PRODUCTOS NO ESTERILES:

Pruebas de Recuento Microbiano

USP 38 – CAPITULO < 61 >
Pruebas de m.o. Especificos
USP 38 – CAPITULO <62>

Q.F. Rita Guevara Vicaña

 Armonización de la
microbiología general

El objetivo de la armonización de la
farmacopea internacional es
promover la consistencia de los
métodos microbiológicos usados por
las empresas de todo el mundo.
PRUEBAS DE RECUENTO
MICROBIANO
 OBJETIVO:
 DETERMINAR EL NUMERO DE
MICROORGANISMOS AEROBIOS
MESOFILOS VIABLES Y HONGOS.
 IMPORTANCIA

 Controlar pureza quimica y microbiologica

 Infección en el usuario
 Toxi-infecciones - ingestion
 Infeccciones consecutivas aplicación tópica
 Alteración con cambios físicos y químicos
asociados a la contaminación
¿Cual es el significado de la presencia de
un microorganismo en un medicamento?
 Aspecto  Composición
 Sabor  Estabilidad
 Olor  Biodisponibilidad
 Color  Acción terapéutica
 Consistencia
FACTORES DE
CONTAMINACION
 ORIGEN Y NATURALEZA DE LA MATERIA
PRIMA
 PROCESO DE FABRICACION
 LOCALES DE PRODUCCION. EQUIPOS

 ALMACENAMIENTO DE ENVASES
 TIPO DE ENVASES
 PERSONAL MALOS HABITOS HIGIENICOS
APLICACION

 Productos
farmacéuticos de
uso (oral y tópico)

No requieran ser
estériles
 Cosméticos
Galenicos
 Materias Primas
 Artículos médicos
 Productos naturales
PRODUCTOS FARMACEUTICOS
NO ESTERILES

 FORMAS
FARMACEUTICAS
DE USO ORAL
 FORMAS
FARMACEUTICAS
DE USO LOCAL
 OBJETIVOS
– Verificar que los productos a evaluar se
encuentren dentro de los límites permisibles
Calcular el número de microorganismos
aeróbicos viables presentes (bacterias,
hongos y levaduras ) USP 38 CAP <61>
– Investigar la presencia de m. o. patógenos
Escherichia coli, Salmonella sp, Staphylococcus
aureus, Pseudomona aeruginosa, Clostridium
sp, Candida albicans. USP 38 CAP <62>
CONDICIONES
 BPL
 Área microbiologicamente
controlada
 Equipo validados y calibrados
 Medios de cultivo : promoción de
crecimiento
 Cepas referenciales ATCC
(validación)
MUESTREO

 SETOMARA 3 MUESTRAS
REPRESENTATIVAS DE UN LOTE
 CADA MUESTRA 10 ML o 10G
 CADA 10 ML o 10 G ESTARA
CONSTIITUIDO DE 1 ML o 1G DE
POR LO MENOS 10 ENVASES.
PRUEBAS PRELIMINARES
PRUEBA DE PROMOCION
DE CRECIMIENTO:
EVALUAR EFICACIA DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO A
UTILIZAR
PRUEBA DE APTITUD DEL
METODO EN PRESENCIA
DE PRODUCTO:
 COMPROBAR LA
INHIBICION DE LOS
MICROORGANISMOS
POR EL PRODUCTO .
EVALUA :
1.-LA
- EXISTENCIA DE PROPIEDADES
ANTIMICROBIANAS
–Neutralización

–Dilución

(PABA, Penicilinasa, L-cistina,TW 80, lecitina)

2.- LAS CARACTERISTICAS DE LA

SOLUBILIDAD Y LA NATURALEZA DEL
PRODUCTO
PREPARACION DE LA
MUESTRA
 LIQUIDOS  LIQUIDOS
 DILUIR CON INMISCIBLES
BUFFER FOSFATO  HOMOGENIZAR
pH 7.2 C/POLISORBATO
20 o TRITON
 CALENTAR 40ºC
 DILUIR
 METODOLOGIA
 RECUENTO
MICROBIANO
 TECNICA DEL
RECUENTO EN
PLACA
 TECNICA DEL NMP O
TUBOS MULTIPLES
DILUYENTES:
Para m.o.a.m.v.:
 BUFFER FOSFATO pH 7.2

Para Hongos y levaduras:

 BUFFER FOSFATO pH 7.2 CON
POLISORBATO
 VALIDACION

– Se realiza la validación con el objetivo de

verificar la calidad de los resultados del
ensayo.
– No inhibe el crecimiento de los
microorganismos
- No crecen se invalida los resultados
 RE-ENSAYO
Con el propósito de confirmar un
resultado dudoso de cualquiera de los
procedimientos en la que se utilizaron 10 g
de muestra, se puede realizar un re-
ensayo con 25 g de muestra. Proceder
según lo indicado en el procedimiento,
pero haga previsiones debido al gran
tamaño de la muestra.”.
LIMITES MICROBIOLOGICOS
SEGÚN Ph EUROPEA
 CATEGORIA 2  CATEGORIA 3
 PREP. TOPICAS  PREP. ORALES
 No mas de 100  No mas de 1000
aeróbicas viables y aeróbicas viables/G
hongos / G o ML o ML
 No mas de 10  No mas de 100
enterobacterias /G o hongos /G o ML
ml  ausencia de E. coli
EXAMEN MICROBIOLOGICO DE PDTOS.
FARMACEUTICOS NO ESTERILES
Pruebas de Microorganismos específicos
USP 38 CAPITULO <62>
Características:
 Detalla un esquema de análisis para tipos
de m.o. patógenos.
 Detalla pruebas preliminares:
 Prueba de Promoción del crecimiento.
 Prueba de Aptitud del método en
presencia de producto.
 Requiere uso de indicadores biológicos
PRUEBAS PRELIMINARES
PRUEBA DE PROMOCION
DE CRECIMIENTO:
EVALUAR EFICACIA DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO A
UTILIZAR
PRUEBA DE APTITUD DEL
METODO EN PRESENCIA
DE PRODUCTO:
 COMPROBAR LA
INHIBICION DE LOS
MICROORGANISMOS
POR EL PRODUCTO .
PRUEBAS PRELIMINARES:

1.-La promoción de crecimiento del medio

(capacidad del medio sin producto para
soportar un bajo número de especies
típicas de ensayo)

2.-Capacidad del método de recuento

(capacidad del medio y del producto
para soportar un bajo número de
especies típicas de ensayo).
 INDICADORES BIOLOGICOS:
 Promocion de crecimiento y Aptitud del Metodo en
Presencia de Producto
 PREPARACION DE CEPAS DE PRUEBA

 La dilución de la muestra que será

vertida en el agar se inoculan con menos
de 100 ufc/ml de cada especie de ensayo

 El esquema del ensayo será adecuado si

el recuento de las placas de ensayo no
difieren mas de 50% o 0.3 log de un lote
anterior de medio
 PRUEBA DE PROMOCION DE
CRECIMIENTO:
 Se adiciona propiedades “nutritivas” y
“selectivas “ al proceso de verificación.
 Es decir que el laboratorio tiene que
demostrar que el agar selectivo no solo
recupera bacterias para las cuales es
selectivo (nutritivo); sino también
previene la presencia de microorganismos
para los cuales es inhibidor (selectivo).
 Control negativo de verificación de
ausencia de contaminación
PRUEBAS PRELIMINARES:

1.-La promoción de crecimiento del medio

(capacidad del medio sin producto para
soportar un bajo número de especies
típicas de ensayo)

2.-Capacidad del método de recuento

(capacidad del medio y del producto
para soportar un bajo número de
especies típicas de ensayo).
 INDICADORES BIOLOGICOS:
 Promocion de crecimiento y Aptitud del Metodo en
Presencia de Producto
 PREPARACION DE CEPAS DE PRUEBA

 La dilución de la muestra que será

vertida en el agar se inoculan con menos
de 100 ufc/ml de cada especie de ensayo

 El esquema del ensayo será adecuado si

el recuento de las placas de ensayo no
difieren mas de 50% o 0.3 log de un lote
anterior de medio
P
- RUEBA DE APTITUD DEL METODO EN
PRESENCIA DE PRODUCTO
EVALUA :
1.-LA EXISTENCIA DE PROPIEDADES
ANTIMICROBIANAS DEL PRODUCTO FCTCO
–Neutralización

–Dilución

2.- LAS CARACTERISTICAS DE LA

SOLUBILIDAD Y LA NATURALEZA DEL
PRODUCTO FARMACEUTICO
Prueba de Recuento Microbiano y
Pruebas de m.o. Especificos 1 mL 1 mL

Muestra
10 ml o 10 ml
90 ml 10 g 10 mL 10 g
CDCS BF
90 ml 10 g
CDCS 1 mL 1 mL 1 mL

0,1 ml Bacterias
1 mL
AMS AC TSA TSA TSA
Caldo
Rappaport
Caldo TSA TSA TSA
Vassiliadis
Mac
Conkey 10 ml Hongos

100 ml AS AS AS

XLD AS AS AS
AMC

S. aureus P. aeruginosa E. coli Salmonella sp

 USP 29
E. coli 1. 10 g en 90 mLLactosa. Incubar
2. Tranferir a Agar MacConkey, incubar
3. Si se produce crecimeinto con la
morfologìa tìpica, transferir a EMB, incubar
Salmonella 1. 10 g a 90 mL Lactosa, incubar
2. 1 mL a 9 mL Selenito Cisteina y
tetrationato, incubar
3. Tranferir a Agar Verde brillante, Agar
xilosa lisina Deoxicolato, incubar
4. Transferir a Agar triple azùcar
Armonizado
1. 1g en 90 mL SCD, incubar
2. 1 mL a 100 mL Caldo MacConkey, incubar 42 -
44 ºC
3. Subcultivar en agar MacConkey, incubar
1 1g a 10 mL SCD, incubar
2. 1mL a 10 mL Caldo Rappaport - Vassiliadis
para enriquecimiento de Salmonella, incubar
3. Tranferir a Agar xilosa lisina deoxicolato,
incubar
4. Identificar las colonias sospechosas
Bacterias Gram negativas
tolerantes a la bilis.

 Clostridios

 Cándida albicans