Sunteți pe pagina 1din 13

Hibridizarea fluorescentă in situ

 Metoda FISH este o metodă de citogenetică moleculară care se


bazează pe realizarea unei hibridări (formarea de legături) între o
sondă de ADN marcată fluorescent şi o secvenţă ţintă de ADN,
prezentă în proba analizată.
 Pentru testarea FISH prenatală sau postnatală a microdeleţiilor (anomalii cromosomice structurale
neechilibrate de mici dimensiuni caracterizate prin absenţa unor mici fragmente cromosomice)
sunt utilizate sonde fluorescente ce corespund fragmentului cromosomic implicat în anomalie.

 Celulele fetale – obţinute prin puncţie de vilozităţi corionice, amniocenteză sau cordonocenteză –
respectiv cele ale persoanei bolnave, sunt cultivate în condiţii specifice fiecărui tip celular, cultuta
este prelucrată, iar celulele obţinute sunt etalate pe o lamă de microscopie, unde se realizează
hibridarea cu sonda specifică fragmentului cromosomic implicat în anomalie.

 După hibridare celulele sunt analizate la un microscop cu emisie în spectrul ultraviolet, pentru
vizualizarea semnalelor fluorescente.

 Analiza se bazează pe identificarea celulelor în care cromosomii sunt bine etalaţi, iar semnalele
fluorescente sunt bine evidenţiate.
 Identificarea unui singur semnal fluorescent corespunzător fagmentului
cromosomic implicat în anomalie indică prezenţa microdeleţiei, confirmând
supoziţia de diagnostic.

 Identificarea a două semnale fluorescente corespunzătoare fagmentului


cromosomic implicat în anomalie atestă absenţa microdeleţiei, infirmând
supoziţia de diagnostic.

 Trei semnale fluorescente specific pentru cromozomul 21 indică sindromul


Down- Trisomia 21
Reacţie de Polimerizare în Lanţ
 Metoda care consta in sinteza in vitro a secventei specifice din ADN prin
intermediul a doua fragmente scurte din ADN, oligonucleotide sau primeri,
care adera la catenele complementare ale moleculei din ADN-ul sintetizat, in
unele pozitii ce flancheaza regiunea tinta. Metoda PCR se foloseste intens in
diverse aplicatii din medicina si biologie.
 Prin aplicatiile sale, tehnica PCR permite o manipulare directa a secventelor
acizilor nucleici ADN si ARN. In acest fel se poate realiza secventierea
fragmentului ADN sau determinarea unei ordini de succesiune a bazelor
azotate din interiorul moleculei de ADN, determinarea unor variatii
existente intre diferitele molecule de ADN si modificarea secventei
moleculare ale acizilor nucleici de interes. In scopurile biologiei sistematice
determinarea variatiilor existente intre diferitele molecule si secventierea
ADN-ului sunt aplicatii de mare interes in evaluarea statutului diverselor
specii si in special in filogenia geografica.
 Reactia de polimerizare in lant se poate utiliza in urmatoarele
circumstante:
• Identificarea anomaliilor cromozomiale.
• Diagnosticarea patologiei infectioase din timpul sarcinii, care
poate sa determine modificari de ordin fetal.
• Detectarea unor afectiuni congenitale ori dobandite de natura
genetica.
1. Denaturarea ADN-ului dublu catenar

2. Cuplarea primerilor de ADN-ul simplu catenar

3. Extensia primerilor
 Testarea unor mutatii (ex.: fibroza chistica, gene tumorale)
 Testare prenatala (si screening preimplantare)
 Infectii virale (HIV), bacteriene (BK)
 Teste de histocompatibilitate
 Medicina legala:
 Teste de paternitate
 Identificarea de persoane
 Cladistica
Tehnica FISH Tehnica PCR
 https://www.scribd.com/docume  http://www.i-
nt/354378766/Genetica-tehnica- medic.ro/analize/reactia-de-
FISH-si-PCR polimerizare-lant-pcr
 http://www.cytogenis.ro/analiza-
cromosomica/tehnica-fish-pentru-  https://www.justmed.eu/files/Imu
detectia-microdeletiilor/ no/practic/PCR97.ppt

BAITOIU STEFANIA MIRUNA


MG; ANUL II; GRUPA 1