Microorganismos

productores de
Antibióticos
• Elugo Guevara
• Gonzalez Dahua
• Urbano León

Microbiología
Industrial 2016-II
 Antibiótico (del griego, anti, ‘contra’; bios, ‘vida’), se define
como cualquier compuesto químico utilizado para eliminar o
inhibir el crecimiento de organismos infecciosos
Antecedentes
Descubrimiento: Alexander Fleming
en 1928
• Staphylococcus aureus vs
Penicillium chrysogenum
Antes de la década de 1930 no
existían trata-mientos para
las infecciones bacterianas.

A partir del descubrimiento de

la penicilina la industria
farmacéutica empezó a
buscar otros antibióticos en la
naturaleza.
• Los cirujanos podían intentar
operaciones
más peligrosas.
Postulados de Erlich
Un ANTIMICROBIANO debe ser:
Muy activo frente a
microorganismos.
Fácilmente absorbible por el
organismo humano.
Activo en presencia de tejido o
fluidos corporales.
Bajo grado de toxicidad, alto
índice terapéutico.
No inducir desarrollo de
resistencias.
Bactericidas: producen la muerte del microorganismo responsable
del proceso infeccioso.

Bacteriostáticos: bloquean el crecimiento y multiplicación celular

quedando el microorganismo viable, de manera que, cuando se
suspende el tratamiento, puede volver a recuperase y multiplicarse
 Mecanismos de acción de los
antibioticos
a. Interfieren con
la biosíntesis de
la pared celular
b. Actúan sobre la
membrana
celular
c. Inhiben la
síntesis de
proteínas
d. Actúan sobre la
síntesis de
ácidos
nucleicos.
e. Interfieren en el
metabolismo
del ácido fólico
 Antibióticos
Antibiótico Microorganismo
productor de origen
Bacitracina
Cefalosporina
Bacillus licheniformis
Cephalosporium sp microbiano
Cloramfenicol Streptomyces venezuelae
Cicloheximida Streptomyce griseus
Cicloserina Streptomyces orchidaceus
Eritromicina Streptomyces erythreus
Giseofulvina Penicillium griseofulvin
Kanamicina Streptomyces kanamyceticus
Lincomicina Streptomyces lincolnensis
Neomicina Streptomyces fradiae
Nistatina Streptomyces noursei
Penicilina Penicillium chrysogenum
Polimixina B Bacillus polymyxa
Estreptomicina Streptomyces griseus
Tetraciclina Streptomyces rimosus
 Año de Tipo de droga
introducción
1935 sulfonamidas
1941 penicilinas
1945 cefalosporinas
1944 aminoglicósidos
1949 cloramfenicol
1950 tetraciclinas
1952 Macrólidos / lincosámidos
estreptograminas
1956 glicopéptidos
1957 rifamicinas
1959 nitroimidazoles
1962 quinolonas
1968 trimpetoprim
2000 oxazolidinonas
2003 lipopéptidos
Resistencia a agentes antimicrobianos
La resistencia natural es un carácter
constante de todas las cepas de
una misma especie bacteriana.

Riesgos en nosocomiales

Generado
principalmente por el uso
indiscriminado e irracional
de éstos y no sólo por la
presión evolutiva que se
ejerce en el uso
terapéutico
Resistencia natural o intrínseca
Carecen de diana para un antibiótico (como la falta de
pared en el Mycoplasma en relación con los -lactámicos).
 Resistencia adquirida
Modificación de la carga
genética de la bacteria y puede
aparecer por mutación
cromosómica o por mecanismos
de transferencia genética.
Resistencia de
las Biopelículas

Nature Reviews Drug Discovery 2, 114-122 (February 2003)

 Inactivación del antibiótico por
enzimas
-lactamasas: Enzimas
modificantes de aminoglucósidos y
aunque no es éste su principal
mecanismo de resistencia,
también el cloranfenicol, las
tetraciclinas y los macrólidos
pueden ser inactivados por
enzimas.
 Modificaciones bacterianas que
impiden la llegada del
antibiótico al punto diana
Las bacterias producen mutaciones en las porinas de la pared que
impiden la entrada de ciertos antibióticos (betalactámicos) o
alteran los sistemas de transporte (aminoglucósidos en los
anaerobios). En otras ocasiones pueden provocar la salida del
antibiótico por un mecanismo de expulsión activa, impidiendo que
se acumule en cantidad suficiente para que actúe eficazmente.
 …This hope comes not only in the form of new antibacterial compounds,
but also new sources of these compounds …

La Enociclina aislada de Burkholderria ambifaria es efectiva contra

Gram negativos resistentes, a excepción de Pseudomonas aureginosa,
además produce rhizoxina. ->EF-Tu
Janthinobacterium lividum son
bacterias gram negativas aerobias del
suelo encontradas incluso en la piel
de algunos anfibios.

• Produce Jantinocina B (útil

contra MRSA y VRE ), Jagaricina
(Util contra hongos como
Candida albicans y A. tereus) y
Violacina
Algunas de las cepas de
Lysobacter (Xanthomonadal)
son biocontroles de agentes
fúngicos (Fusarium) que atacan
a plantas.
• Producen depsipeptidos
con gran efecto en MRSA
y y un menor efecto en
VRE
Los Clostridium no patogénicos,
especialmente aisaldos de suelos
tienen una gran variedad
genética para producir NRP: C.
cellulolyticum.
• Produce Clostioamida:
Inhibe al Acetil Coa
carboxliasa, impidiendo la
formación de acidos
grasos en las Bacterias.
• Actua a muy bajas
concentraciones contra
MRSA y VRE
Aislamiento de microorganismos
productores de antibióticos
 “Screening”

PRIMARIO SECUNDARIO

IDENTIFICACIÓN DEL MICROORGANISMO

BÚSQUEDA DEL MICROORGANISMO MÁS ÚTIL
ÚTIL EN BIOTECNOLOGÍA (Tasa de crecimiento rápida, alta
producción del metabolito de interés, etc.)
PARA LUEGO MODIFICARLO
SCREENING PRIMARIO
 SCREENING
SECUNDARIO
1mL de
suspensión del VERTIMIENTO SIEMBRA DE
microorganismo EN PLACA DE ESTRIAS DEL MO
sensible PETRI DE INTERÉS

Incubación por 24h

15-20 mL de Agar Nutritivo fundido y mantenido a 24-25°C
y mantenido a 50°C
CUANTIFICACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE
ANTIBIÓTICO
MODELO EXPERIMENTAL:
HONGOS
Búsqueda de hongos productores de
metabolitos con actividad
antimicrobiana asociados a Magnolia
dealbata Zucc.

Se corta la muestra de tejido vegetal (corteza, raíz)

Las muestras colectadas se colocan en
una placa de Petri y se lavan con dos
concentraciones de etanol
50 y 70% por 30min cada una y
finalmente con agua esteril

Fragmentos de las muestras son

transferidos a placas de Petri
INCUBACIÓN A 29°C / 6-7 días
con Agar Czapeck +
cloranfenicol (25𝜇𝑔/𝑚𝐿)
 Colonias fenotípicamente diferentes son aisladas hasta que se
observe crecimiento y son mantenidas en 0.5% de
Sabouraud Dextrosa (SD) y probados para su actividad
antibiótica.

Las cepas aisladas son conservadas a 4°C en Agar Czapeck Esporas

en placas de Petri y tubo inclinado almacenadas en
solución salina a
4°C
Fig. 3. Fotografías de los 11 hongos que
presentaron actividad antimicrobiana.
Cepas crecidas en 0.5% de SD.
 SELECCIÓN DE CEPAS DE ENSAYO PARA LAS PRUEBAS
DE ANTIBIOSIS

B. Subtilis ATCC S. Cerevisiae ATCC

E. Coli ATCC 1129 M. Luteus ATCC 9341
6633 9763

Siembra de sepas cada dos

meses en agar nutritivo, para
conservarlos posteriormente en
glicerol.

2 días previos a la prueba, las cepas INCUBACIÓN A 37°C / 12--18

se dejaron crecer en matraces de horas a 180rpm ( M. luteus, B.
150-mL con 30 mL de medio NB subtilis y E. coli) y a 29°C la
(Nutrient Broth Difco)
levadura (S. cerevisiae)
 Determinación de la
actividad antimicrobiana
PRUEBA DE ANTIBIOSIS POR DIFUSIÓN

Preparación de tubos con 30 mL de

medio Agar nutritivo para cada placa de
Petri de antibiosis

Inoculación a cada tubo con 0.1% de

cepas de ensayo (microorganismos
sensibles).
Homegización con agitado suave.
 Descongelamiento de
las cepas aisladas
previamente aisladas
y conservadas a 4°C

Se toma 25 𝜇𝐿 de cada
una de la suspencion de
Una vez que se han dejado cepas y se colocan en
absorber, con pinzas sensidiscos de 6mm
esterilizadas, se colocan
cuidadosamente sobre el
agar de las placas
previamente inoculadas
con las cepas microbianas.
INCUBACIÓN 12-18h a 37°C
 Verificación de las placas para la medición de los halos de
inhibición y calcular su dimensión

𝐷𝑖é𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑑𝑒𝑙 ℎ𝑎𝑙𝑜 𝑚𝑚 − 6𝑚𝑚 (𝑠𝑒𝑛𝑠𝑖𝑑𝑖𝑠𝑐𝑜)

= Radio del halo generado
2
 Caracterización de
los hongos elegidos
Con el fin de identificar a los hongos de trabajo, se toma en
cuenta lo siguiente:

 Observación macroscópica de la morfología de la colonia crecida en el agar

 Pigmentación
 Superficie
 Aspecto

 Observación microscópica (Técnica de microcultivo)

 Hifas (Septos)
 Conidios o esporas ( tamaño, pigmentación, tabicamiento, forma, etc.)
 Fiálides y métulas
 Conodióforos o esporangióforos
  Herramientas bioinformáticas
IDENTIFICACIÓN  Secuenciación de la región 5.8S DNA
DE CEPAS ribosomal junto con sus ITS (Schoch et al.
2012)

Aislamiento del DNA genómico (

Protocolo de Akins y Lambowitz
1985) a partir de micelio
deshidratado (100mg) obtenido en
la etapa de crecimiento exponencial
(3 días)
Amplificación por PCR de la
región del DNA ribosomal 5.8S
(Primers universales para
eucariontes ITS1-F Fwd e ITS4-
Rev