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CARACTERIZACIÓN DE LLA

t(12; 21), que fusiona los


oncogenes ETV6 y RUNX1, es la translocación críptica, t (12;21)
La LLA es principalmente de
más frecuente en la LLA-B (p12;q22) en LLA de tipo B, no
origen multifactorial, con un
infantil, y ocurre se detecta por las técnicas
patrón de herencia complejo
aproximadamente en el 25 % citogenéticas convencionales
de los casos

La determinación de la t (12;21)
Dicha translocación identifica a en el estudio de LLA tiene
un subgrupo de pacientes con importancia pronóstica,
una evolución muy favorable, además de servir como
por lo que se considera un marcador para la detección de
indicador de buen pronóstico la enfermedad mínima residual
La t(12;21)(p12;q22), involucra genes reguladores de la transcripción, resulta de la translocación entre el
gen TEL (ETV6) que codifica a un factor de transcripción asociado al proceso de hematopoyesis presente
en el cromosoma 12 y el gen RUNX1 (CBFA2 core-binding factor) del cromosoma 21, originando el
transcripto de fusión TEL/AML.

La fusión parcial de estos dos genes, involucra puntos de ruptura clásicos. Para ETV6, se han descrito
punto de ruptura común entre los exones 5 y 6. En el caso de RUNX1, el punto de ruptura suele darse en
el intrón 1.
En la mayoría de los pacientes con este rearreglo, el gen de fusión resultante consiste en la unión del
exón 5 del ETV6 y el exón 2 de RUNX1
• RUNX1, miembro de la familia de factores de transcripción de unión
por heterodímeros, relacionados con la diferenciación hematopoyética
durante período embrionario. Participa en la diferenciación de células
de líneas mieloide y linfoide.

• ETV6, codifica para un represor transcripcional que posee dos dominios


funcionales: un dominio C terminal de unión al ADN, que reconoce
regiones promotoras en genes blanco y un dominio N terminal con
homodimerización indispensable para represión transcripcional.
Deleciones o mutaciones de ETV6 resultan en pérdida de su expresión y
por tanto en una inadecuada regulación en la hematopoyesis.
• La función alterada producto de este gen de fusión da como resultado
una inhibición activa de los promotores regulados por RUNX1; la
proteína tiene un componente oncogénico mediado por cambio en la
naturaleza y cantidad de factores transcripcionales que son
reclutados para la regulación de otros genes blanco implicados en la
diferenciación de células multipotenciales hematopoyéticas, la
alteración en la regulación hace que RUNX1 pase de ser modulador
transcripcional a represor transcripcional
Metodología
Selección de pacientes
Procesamiento de muestra:
Se estudiará 20 pacientes pediátricos Recolección muestras Separación de células
de un rango de edad de 2-5 años, en
Se efectuará por aspiración y biopsia mononucleares centrifugación con
etapa de diagnóstico inicial para LLA
de médula ósea, gradiente de densidad
tipo B del Hospital Pediátrico “Baca
FicollHypaque,
Ortiz”.

Linfocitos +monocitos

Extracción de ARN Síntesis de cADN


Se extraerá ARN con reactivo trizol, ARN : 1ug/uL + random primers
Almacenado a -20°C para su uso (oligos dT : 12–18 nucleótidos de
posterior T)+ Taq Continúa
Alineación 25º C por 10 min, 1 ciclo;
Síntesis a 45 ° C por 60 min, 1 ciclo;
Inactivación de la enzima a 99 ° C por 5
min
Detección de translocación de
estudio por PCR
Reacción en Cadena de la
Polimerasa (PCR) de β actina
Los oligonucleótidos (primers) y
Integridad del cDNA
procedimientos utilizados para las
reacciones de PCR

Cebadores + muestra (ADNc)+ dNTP+Cl2


1 ciclo: desnaturalización a 95 ºC por 1 min Mg, Taq polimerasa.
35 ciclos : desnaturalización a 95 ºC por 1 Desnaturalización de 30s a 94ºC,
min, alineamiento a 60 ºC por 30 segundos Alineación 60°C por 1 min
y extensión a 72 ºC por 30 segundos. Extensión de 72°C por 1min 33 ciclos
1 ciclo: extensión a 72 ºC por 7 min 5 min de extensión final a 72°C a 1 ciclo.

(Sentido 5’-ATG TGG CCG AGG ACT TTG ATT-3’;


antisentido 5’-AGT GGG GTG GCT TTT AAG GAT G-3’)

Prod. esperado 107 (pb)  gel de


agarosa teñido con bromuro de etidio
al 1.5% en un transiluminador

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