UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS MEDICAS

CARRERA DE MEDICINA

METODOS DE
IDENTIFICACION/ESTUDIO
VIRAL
CULTIVO DE LOS VIRUS

INTEGRANTES GRUPO: 14
Wendy Rosero SUBGRUPO: 3

CUARTO SEMESTRE
MÉTODOS FÍSICOQUIMICOS
 METODOS FÍSICOQUIMICOS
OBSERVACION DE PARTICULAS VIRALES POR MICROSCOPIA
ELECTRONICA

TINCIÓN NEGATIVA
muestras cutáneas de :
- líquido vesicular ( herpes simplex, varicela –zoster, viruela )
- verrugas( papilomavirus, molusco contagioso)
- materia fecal (rotavirus, calicivirus y adenovirus)
- suero(hepatitis, parvovirus)

LOS CORTES ULTRA FINOS

( obtenidos con micrótomo) de células o tejido
infectados, seguido de tinciones especiales.
( acetato de uranilo)
 RECUENTO DE PARTICULAS

Mezclar la suspensión con un numero conocido de partículas de latex y luego contar al

microscopio electrónico los viriones y las partículas de látex y así determinar mediante un
simple cálculo el número de viriones presentes.
 DETECCION DE PARTICULAS VIRALES POR
HEMAGLUTINACION

• Muchos virus de las familias

Orthomyxoviridae y Paramyxoviridae
poseen glicoproteínas en las
espiculas de su envoltura que pueden
aglutinar eritrocitos.
• Famila adeniviridae aglutinan
eritrocitos mediante los
constituyentes de su capside.

• Las condiciones en que se produce la

hemaglutinación varian para los
distintos virus
 HEMAGLUTINACION VIRAL
Descubierta en 1941 por Hirst y por McClelland.
Ejemplo:
(orthomyxoviridae, Paramyxoviridae, adenoviridae) .
 REACCION DE INHIBICION DE LA
HEMAGLUTININA:
Es utilizado para identificar virus , estudios serológicos, determinar presencia de
anticuerpos específicos inhibidores de la hemaglutinación en el suero del paciente.
 PROTEINAS VIRALES

PROTEINAS PROTEINAS NO
ESTRUCTURALES ESTRUCTURALES

Aquellas que son codificadas por

Presentes en los viriones
el virus y están presentes solo
purificados
durante el ciclo de replicación

 La difracción de rayos X de cristales de proteínas da detalle de su

conformación tridimensional y de la interacción tanto de péptidos como
de hidratos de carbono

 La técnica de Western Blot se una para estudiar antígenos virales

presentes en suspensiones virales o en células infectadas, así como
también detectar anticuerpos específicos presentes en el suero del
paciente
  CUANTIFICACION POR LA TECNICA DE UNIDADES
FORMADORA DE PLACAS (UFP)

 CUANTIFICACION MEDIANTE LA TECNICA DE PUNTO FINAL

CUANTIFICACION POR LA TECNICA DE
UNIDADES FORMADORA DE PLACAS
(UFP)
• Se basa en el recuento de lesiones
localizadas, ej.:
• Placas de lisis en monocapas de
células
• Focos en membranas
corioalantoidea de embrión de
pollo
• Focos de proliferación en cultivos
celulares

La infectividad se puede expresar en

UNIDADES FORMADORAS DE
PLACAS
• El título se calcula directamente a
partir de la dilución de la muestra, el
numero de placas contado y el
volumen del inóculo
 CUANTIFICACION MEDIANTE LA TECNICA DE PUNTO FINAL

• Se realizan diluciones seriadas del virus, las que se inoculan

en números iguales de unidades de prueba.
• Las unidades de prueba desarrollaran signos de infección
en las diluciones mas bajas del virus y no en las mas altas.

Si una unidad de prueba dio un resultado positivo

METODO en una dosis alta de virus, también dará positivo en
DE REED Y dosis mayores.
MUENCH Si una unidad de prueba dio un resultado negativo
en ciertas dosis, dará negativo con dosis mas bajas.

La dilución que infecta el 50% de las unidades de prueba –

DOSIS INFECTANTE DE CULTIVO50 (si se trata de cultivo)
DOSIS LETAL 50 (si se trata de animales)
 DETECCION DE ANTIGENOS VIRALES:
• INMUNOHISTOQUIMICA
• INMUNOFLUORESCENCIA
• INMUNOPEROXIDASA
• ENZIMOINMUNOENSAYO.
Detección de antígenos virales
antígeno-anticuerp
Fluorocromos – en
Dado que los virus solo se replican en células vivas, los estudios deben realizarse en células
vivas susceptibles al virus de estudio, provenientes de animales de experimentación,
huevos embrionados o cultivos celulares in vitro.