de laborator
Biochimia clinică
Diagnosticul clinic de laborator –
este o disciplină medico-ştiinţifică, care :
• studiază interdependenţa între starea
fiziologică (patologică) a organismului
şi modificarea în compoziţia celulelor şi
lichidelor biologice;
• elaborează metode de cercetare
obiectivă a componenţei celulare şi
chimice a ţesuturilor şi lichidelor
biologice;
Diagnosticul clinic de laborator –
utilizează datele obţinute pentru :
• determinarea devierilor de la normă,
• determinarea diagnozei, prognozei
maladiilor,
• estimarea eficacităţii tratamentului,
• efectuarea controlului asupra terapiei
medicamentoase,
• profilaxia patologiilor.
Diagnosticul clinic de laborator
include mai multe direcţii :
Biochimie clinică, hematologie clinică, citologie,
imunologie, microbiologie, micologie, parazitologie,
toxicologie clinică.
• 75% din toate investigaţiile clinice în prezent se
efectuează cu aplicarea metodelor de biochimie
clinică, deoarece a fost demonstrat, că la baza
patogeniei majorităţii maladiilor stau dereglări
primare sau secundare ale metabolismului.
1. Faza preanalitica
în exteriorul
laboratorului 20% Transportarea
Înregistrarea
şi păstrarea
2. Faza preanalitică
Centrifugarea
în interiorul
laboratorului 37%
Repartizarea pe aparate
Pregătirea probelor
Etapa analitică constă în:
• Prelucrarea preliminară specială a
probei biologice;
• Efectuarea testului de
laborator;
• Trigliceride
• Colesterol total
• HDL Colesterol
• LDL Colesterol
Profilul “Investigaţii hepatice :
screening"
• АlАТ (Alanin aminotransferaza)
• АsАТ ( Aspartat aminotransferaza)
• Bilirubina totală
• Bilirubina directă
• Gamma-glutamil transferaza (GGT)
• Fosfataza alcalină
Profilul “Investigaţii hepatice :
complet"
Teste biochimice, ce permit de a depista şi de a
caracteriza gradul de afectare a celulelor hepatice, de a
aprecia starea funcţională a ficatului, de a elucida
cauzele posibile ale patologiei.
• Creatinina
• Urea
• К+( Potassium), Na+(Sodium), Сl-(Cloride)
• Ca (Calcium total)
• Мg (Magnesium)
• P (Fosfor neorganic)
• Analiza generală a urinei (cu microscopia
sedimentului)
“Profil diabetic"
Testul de bază pentru diagnosticul diabetului zaharat .
Testul este important în alegerea terapiei şi monitoringul
tratamentului. În monitoringul diabetului se utilizează şi
teste, ce dau o informaţie retrospectivă despre starea
metabolismului glucidic.
• Glucoza
• Hemoglobina glicozilată (HbA1С, Glycated
Hemoglobin)
• C-Peptidul
• Fructozamina
Profilul “Diagnostilul osteoporozei"
• Ca (Calcium total)
• P (Fosfor neorganic)
• Hormonul paratiroid (Parathyroid hormone, PTH)
• Creatinina
• N-Оsteocalcina
• Dezoxipiridinolina (în urină)
Reguli importante în alegerea termenilor
optimali pentru efectuarea investigaţiei de
laborator :
aldosterona
Fosfaţii
colesterolul fierul
Particularităţile
individuale ale
pacientului:
vârsta rasa
sexul
N PARAMETRU VÎRSTA BĂRBAŢI FEMEI
1. AlAT, U/l 0-100 0-41 0-31
2. AsAT, U/l 0-10 15-60 15-60
11-100 0-37 0-31
3. γ -Glutamiltransferaza 0-100 12-64 9-36
Creatinkinaza
Negri
Amilaza
Europeni
Indieni
Factorii, ce influenţează asupra rezultatelor
investigaţiilor de laborator:
Particularităţil Efort
Efort fizic
fizic şi
şi
Particularităţil
ee alimentaţiei stres
stres emoţional
emoţional
alimentaţiei
Variabile extrinseci
Fumatul,
Fumatul, Proceduri
Proceduri
alcoolul
alcoolul,, diagnostice
diagnosticeşi
şi
cofeina
cofeina,, terapeutice
terapeutice
drogurile ((roentgenografia
roentgenografia,,
drogurile
colonoscopia
colonoscopia,,
proceduri
proceduri
Medicamentel
Medicamentel fizioterapeutice
fizioterapeutice))
ee
Influenţa inaniţiei asupra parametrilor
biochimici sanguini:
Corticosteroizi Scădere
Medicamente ce influenţează rezultatele
testelor biochimice de laborator
Heparina
Tiroxina Scădere
Creatinkinaza Dexametazona Sporire
Digoxina
Fenobarbital
Instruirea pacientului
cu privire la dietă,
regim şi procedurile de
recoltare
Recoltarea materialului biologic primar
pentru investigare
În calitate de material biologic pentru investigaţiile
clinice de laborator cel mai frecvent este utilizat
sângele. Recoltarea sângelui se efectuează prin:
• Venepuncţie;
Cu atenţie Scoatem acul
amestecăm sângele
Optimal
Recoltarea materialului biologic primar
pentru investigare
Recoltarea sângelui venos se efectuează cu
ajutorul unor sisteme speciale cu vacuum , care:
2. holder VACUTAINER
3
3. Eprubetă sterilă
cu conţinut dozat de vacuum.
Priorităţile faţă de sistemele
deschise:
• Sterilitate.
Influenţa duratei de aplicare a garoului
la venepuncţie asupra rezultatelor
testelor de laborator
CO2
Sânge
3.
Eprubetă cu Li-heparină
integru
imunologice, Verde
sau heparină electroliţi, EAB
/plasma
Sânge
4. Eprubetă cu EDTA integru
Hematologice, Violetă
PCR
/plasma
Eprubetă cu inhibitor al
5.
glicolizei
Plasma glucoza, lactat Sură
Aditivi polimeri pentru
eprubete cu vacuum
(pentru separarea serului):
• Granule de polisterol pentru
coagularea rapidă a sângelui şi
formarea unui cheag compact
–Metode optice
–Metode cromatografice
–Electroforeza
Metode în biochimia clinică
• Metodele optice se bazeaza pe
masurarea proprietatilor optice ale
substantei şi sunt bazate pe
înregistrarea modificărilor razei de
lumină la trecerea ei prin soluţia
examinată.
• Metode fotometrice sunt:
– refractometria;
– polarimetria;
– fotometria.
FOTOMETRIA
1. Fotometrie de absorbţie –
a) spectrofotometria -metodele bazate pe masurarea
absorbtiei luminii de catre substantele colorate
2.Fotometrie de emisie –
a) fluorimetria
FOTOMETRIA
de absorbţie
• ADN-matricea
• Praimeri
• ADN-polimeraza termostabilă
• Substrate – dezoxiribonucleotidtrifosfaţi
• Ioni Mg2+
• Soluţie-tampon
Principiul PCR
• Denaturarea – matricea bicatenară dublu helix
de ADN este încălzită la 94-96°C pentru ca
catenele să se despiralizeze şi să se separe .
• Annealing- unirea complimentară a matricei cu
praimerul – la aprox. 54°C.
• Elongarea- ADN-polimeraza sintetizează catena
complimentară, polimerizând bazele azotate
suplimentate în mediul de reacţie; Taq-polimeraza
este maximal activă la 72°C.
Etapele efectuării PCR:
1. prelucrarea materialului biologic.
Centrifugarea materialului biologic
2. Extragerea ADN/ARN
1. La sediment se adaugă soluţia pentru extragerea ADN;
Centrifuga
Vortex
Termostat
2.«AMESTECARE»
3. Încălzire a câte min la 55 и 95 С
4. Centrifugarepentru obţinerea supernatantului cu ADN
3. Pregătirea probelor pentru
amplificare: introducerea în eprubetă a probelor biologice,
primerilor, polimerazei, substratelor pentru polimerizarea ADN.
Probele pregătite pentru
amplificare
4. Amplificarea
Amplificator
Amplificator pentru real-time PCR
5. Electroforeza
- pregătirea gelului pentru camera de
electroforeză
Cameră pentru electroforeză cu soluţie tampon
Gelul după electroforeză
7. Înregistrarea rezultatelor la
transiluminator (in lumină ultravioletă)
Citirea rezultatelor PCR
• Prezenţa unei benzi luminoase strict la nivelul
controlului pozitiv în proba de analizat semnifică
prezenţa agentului patogen respectiv în proba dată.
• Lipsa bandei luminoase la nivelul controlului pozitiv în
proba de analizat semnifică lipsa agentului patogen
respectiv în proba dată.
K+ - control pozitiv
K- - control negativ
1,2,7,9,10,11 – probe clinice cu rezultate pozitive
3,4,5,6,8,12 – probe clinice cu rezultate negative