CURSO: Automatización en Laboratorio

DOCENTE: Lic. T.M. Eladio Reyes

INTEGRANTES: Castillo Centurión Celeste

Castro Lazaro Carmen
Cerna Menacho Edwin
Gutierrez Callán Jazmín
Herrera Carbonel Hiroshi
 Hemoglobina glucosilada

Determinación cuantitativa del porcentaje de

hemoglobina (HbA1) que se encuentra
irreversiblemente unida a productos avanzados de la
glucosilación no enzimática de las proteínas.
 La unión de azúcares reductores a las proteínas es
llamada la llamada reacción de glucosilación no
enzimática El proceso tiene lugar en etapas
sucesivas: las iniciales son rápidas y reversibles
mientras que las finales son lentas e irreversibles.

 Se cree que ambas están implicadas en el

envejecimiento celular y en el desarrollo de
complicaciones crónicas de la diabetes.
 Los azúcares reductores (así denominados
porque son oxidados fácilmente por otras
sustancias) son aquellos que poseen un grupo
químico llamado carbonilo.

 La unión de estos azúcares (glucosilación) a

proteínas tiene lugar a través de una reacción
tradicionalmente denominada reacción de
Maillard y, más recientemente, glicación.
 El exceso de glucosa se une a grupos epsilon
amino de lisina de una proteína induciendo su
desnaturalización.
 . Efectos potenciales de glucosilación de proteínas
Proteínas glucosiladas Posibles consecuencias

Hemoglobina Modificar el transporte

A1a, A1b, A1c de oxígeno

Inmunoglobulinas Autoinmunidad/inmunodeficiencia

Coagulación, factor Coagulopatías/

von Willebrand trombosis/embolia

Colágena y fibrina Disminución de elasticidad tisular

Cristalino Cataratas

Endotelio vascular, Aterosclerosis

receptores LDL

ADN, ARN Mutaciones/neoplasia

 Debido a que las concentraciones de glucosa
plasmática varían durante un periodo de 24
horas, la medición de la HbA1c es el indicador
del control glucémico más acertado a largo plazo.
 Efectos de la glucosilación de
proteínas
 La capacidad de la hemoglobina A para reaccionar con
la glucosa circulante, formando hemoglobina
glucosilada, es un proceso lento y proporcional a la
glucosa coexistente en el medio.

Se produce por la glucosilación no enzimática de

aminoácidos de la cadena beta de la hemoglobina A y se
observa en sujetos normales y en diabéticos.
 Efectos de la glucosilación de
proteínas
 La fracción denominada hemoglobina A1c es la
única que representa una glucosilación
irreversible, por lo que se le llama también
"estable" y refleja la cifra de glucemia media en
las cuatro a ocho semanas previas a su
determinación.
Efectos de la glucosilación de
proteínas
 Recomendaciones
 Realizar el examen dos veces al año en pacientes
que cumplen metas de tratamiento y con un control
estable de la glucosa (E).
 Realizarlo cada trimestre en pacientes que no
alcanzan un control adecuado o han sido sometidos
a cambios en el tratamiento. (E)
 Utilizar en cualquier momento para tomar decisiones
en pacientes que requieren cambio de tratamiento.
 Recomendaciones
 Evaluarla eficacia del tratamiento
 Estado de la glucosa 2-3 meses atrás
 Puede requerirse al inicio
 Durante su seguimiento
 Recomendaciones
 Limitaciones:
 Condiciones que afectan el recambio
eritrocitario:
-Hemólisis
-Hemorragia
 Variantes de la Hemoglobina
 Sospechar cuando el nivel de glucosa
sérica no es correlativo
 Recomendaciones
 El estudio de Control de Diabetes y sus
Complicaciones (DCCT) recomienda un
mejor juicio al usar ambas pruebas, como
marcadores de exactitud del resultado y
para validar los controles de glucosa sérica
en los 2-3 meses previos.
Correlación entre niveles de A1C y niveles de
glucosa promedio en seguimiento a 2-3 meses

HbA1C (%) Glucosa mg/dl

6 135
7 170
8 205
9 240
10 275
11 310
12 345
 Recomendaciones
 En ambos estudios DCCT y UKPDS
demostraron que, los esquemas de tratamiento
que reducen HbA1C a 7% ( 1% por encima del
limite normal) estan asociados con menores
complicaciones vasculares a largo plazo ; sin
embargo el control estricto también se
correlacionó con mayor riesgo de hipoglucemia
y ganancia de peso.
 Recomendaciones para el control de
glucosa del paciente Diabético

 A1C <7.0%*
 Glucosa preprandial plasmática: 90–130 mg/dl
(5.0–7.2 mmol/l)
 TA <130/80 mmHg
Lípidos :
LDL <100 mg/dl (<2.6 mmol/l)
Triglicéridos <150 mg/dl (<1.7 mmol/l)
HDL >40 mg/dl (>1.0 mmol/l)
 Metas de Glucosa sérica y Hb1AC en pacientes
con DM1 por grupo de edad
Valores por edad Preprandial Al acostarse HbA1C

Preescolares (0-6) 100-180 110-200 <8.5% pero >7.5%

Escolares (6-12) 90-180 90-150 <7.5%

Adolescentes y 90-130 90-150 <7.5%

adultos jóvenes (13 a
19)
 Estudio UKPDS:
Efectos del tratamiento intensivo en las complicaciones
de la Diabetes
Reducción de la HbA1c del 11% con tratamiento intensivo (7.9 vs. 7.0%)

Esto conlleva a:
12% disminución en cualquier complicación
25% disminución en complicaciones microvasculares
21%disminución en retinopatía
33% disminución en microalbuminuria
16% disminución riesgo de infarto al miocardio
5%disminución riesgo de EVC
 Metas del control glucémico ideal

Indice Meta

Glucosa preprandial 5.0–7.2 (90–130

Glucosa postprandial <10 (<180)

HbA1C <7
 Recomendaciones
 Losriesgos y beneficios de una meta de
HbA1C de <6% se estan probando
actualmente en el estudio (ACCORD
[Action to Control Cardiovascular Risk in
Diabetes]) en Diabetes 2.
Los métodos inmunológicos utilizan anticuerpos contra una secuencia de
aminoácidos que varían de 3 a 8 de la fracción N-terminal de la
hemoglobina glicada. Tienen como ventaja el que son específicos contra la
HbA1c y pueden ser incorporados a los auto analizadores de química
clínica ya sea por métodos de inmunoturbimetría, como se esquematiza:
Otro método es el de inmunoanálisis enzimático en donde se utiliza una
proteasa para digerir la hemoglobina y producir fructosil-aminoácido que por
la acción de una oxidasa produce peróxido de hidrógeno.

El principio de la prueba se puede resumir en cuatro pasos básicos:

1) Hemólisis: se emplea una solución que permite la lisis de los eritrocitos y

la reducción con agentes oxidantes de moléculas interferentes
2) Proteólisis: se somete la muestra a una digestión proteolítica donde las
proteínas presentes en la solución, incluida la hemoglobina, liberan
aminoácidos y péptidos.
3) Reacción enzimática 1: la valina de la hemoglobina que está glicada,
es el sustrato de la enzima específica fructosil-valina-oxidasa. En esta
reacción se produce peróxido de hidrógeno (H2O2).

4) Reacción enzimática 2: empleando la enzima per oxidasa de rábano

se promueve la producción a partir del H2O2de un cromógeno. La señal
emitida por el cromógeno es cuantificada y es proporcional a la
concentración de aminoácidos de valina glicados presentes en la muestra.
La determinación del porcentaje de HbA1c con esta técnica es directa y
requiere de una curva estándar. Esta técnica no requiere la determinación
de la concentración de la Hb total.
Electroforesis, isoelectroenfoque: Es una técnica para la separación de
moléculas según la movilidad de estas en un campo eléctrico. La separación puede
realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (p. ej., electroforesis en
papel de acetato de celulosa), o bien a través de una matriz porosa (electroforesis en
gel), o bien en disolución (electroforesis libre). Dependiendo de la técnica que se use, la
separación obedece en distinta medida a la carga eléctrica de las moléculas y a su
masa.
Cromatografía: Es un método físico de separación para la caracterización
de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia y la
física. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo
objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y
determinar las cantidades de dichos componentes. Existen varios tipos de
cromatografía, entre los cuales se encuentran:
HPLC o LPLC (Cromatografía líquida de alta eficacia): Es una técnica utilizada
para separar los componentes de una mezcla basándose en diferentes tipos de
interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatográfica.
D-10 Programa de Hemoglobina A1c
El innovador Analizador D-10TM ha sido diseñado para la
determinación porcentual de los niveles de hemoglobina A1c, A2 y F;
así como para la detección de variantes anormales de hemoglobinas
en sangre humana utilizando la cromatografía líquida de alta
resolución por intercambio iónico (HPLC)
Se compone de dos programas:
1.Short Program: programa de 3 minutos que permite determinar el
porcentaje de área de HA1c únicamente
2.Extendent Program: programa de 6,5 minutos que permite
determinar el porcentaje de área de hemoglobinas A1c, A2 y F
El usuario puede alternar entre ambos programas sin cambiar los
tampones ni el cartucho y sin volver a acondicionar el sistema.
El innovador Analizador D-10TM proporciona un desempeño superior
con un equipo compacto.

Rapido
•Resultados de A1c en 3 minutos
•Ofrece inmediata valoración de riesgos de las complicaciones
diabéticas
•Reporte de pacientes impresos automáticamente
iQ A1c
Es un analizador de hemoglobina glicosilada totalmente
automático, que emplea como método la cromatografía
líquida de intercambio iónico a bajas presiones.

Ventajas
1.Ofrece comodidad, rapidez y confiablidad.
2.Informe en 4 minutos y del proceso total incluyendo la
limpieza de la columna y tiempos de recuperación a los 6
minutos.
3.Cromatograma en tiempo real resumido.
4.25 posiciones giratorias de la muestra, selección opcional
del test o pruebas de emergencia.
5.Estructura totalmente abierta, vía de flujo perfecto y fácil
mantenimiento.
6.Tecnología de eliminación de burbujas con una solución de
gas.